芽孢杆菌属.ppt

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,第二十二章,芽胞杆菌属,芽胞杆菌属（,Bacillus,）,200,多个种，致病的的,5,个种,炭疽芽胞杆菌（,B.anthracis,）,蜡样芽胞杆菌（,B.cereus,）,蕈状芽胞杆菌（,B.mycoides,）,巨大芽胞杆菌（,B.megaterium,）,苏云金芽胞杆菌（,B.thuringiensis,）,1,一、炭疽芽胞杆菌（,Bacillus,anthracis,，,B.anthraci,),炭疽是人畜共患的急性传染病,主要是牛、羊等食草类动物的传染病，人可通过接触或摄食病畜及畜产品而感染,皮肤炭疽、肠炭疽、肺炭疽等，,并发败血症，甚至炭疽性脑膜炎,2,形态染色,:,致病菌中最大的,G,+,杆菌，,两端平切、竹节状,有毒株可有明显荚膜,生物学性状,炭疽芽胞杆菌,亚甲基蓝染色,1000,革兰染色,1000,3,芽胞,椭圆形，小于菌体，位于菌体中央,多在有氧条件下形成，,25,30,，在培养基中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中，都易形成芽胞,在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞，,尸,体严禁解剖,4,培养特性：,需氧或兼性厌氧，生长条件不严格，最适温,度,30,35,普通培养基,扁平、粗糙、不透明、灰白色、,无光泽，边缘不整齐的菌落，低倍镜下菌落边,缘呈卷发状,5,BAP,：,12,15h,不溶血，,18,24h,轻微溶血,其他需氧芽胞杆菌大多溶血明显而快速,炭疽杆菌在血琼脂平板中菌落,6,肉汤,絮状沉淀生长,明胶,3718,24h,表面液化成漏斗状，由于细菌沿穿刺线向四周扩散形成倒松树状。,NaHCO,3,BAP,：,-,有毒株,5%CO,2,、,3724,48h,、,产生荚膜,呈黏液型菌落，挑取时呈粘丝状,(,鉴别要点,),-,无毒株,粗糙型菌落,7,生化反应：,分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、蕈糖，,有些菌能迟缓发酵甘油和水杨素产酸不产气,水解淀粉、还原硝酸盐,不产生吲哚和硫化氢、不利用柠檬酸盐、不,分解尿素,在牛乳中生长,2,4,天牛乳凝固,缓慢胨化,触酶（,+,）、卵磷脂酶弱（,+,）,8,抗原构造：,菌体多糖抗原：,-,与毒力无关，耐热、耐腐败，长时间煮沸仍能与特异性抗体发生环状沉淀反应（,Ascoli,热沉淀反应）。,-,特异性不高，能与其他需氧芽胞杆菌、,14,型肺炎链球菌、人,A,血型抗原发生交叉反应。,9,荚膜多肽抗原：,-,与毒力有关，有抗吞噬作用，有利于细,菌生长和扩散,-,荚膜肿胀试验，对本菌鉴定有意义,芽胞抗原：,有免疫原性和血清学诊断价值,10,炭疽毒素：,-,保护性抗原（,PA),、,致死因子（,LF,）,、水肿,因子（,EF,）,三个组分,-,单独皆无致病性，与,PA,结合才显示出致病性,-,具有抗吞噬和免疫原性,11,抵抗力：,-,芽胞抵抗力很强，煮沸,10min,或干热,140,3h,才能杀灭,-,在干燥土壤中或皮毛中常温下存活数十年致,病力不减，牧场一旦污染，传染性可持续数,十年,-,生物武器,12,-,芽胞对,化学消毒剂抵抗力不一，对碘和氧化,剂较敏感，常用以下方法杀菌：,1,：,2500,碘,10min,、,3%H,2,O,2,1h,、,4%,高锰酸钾,15min,、,0.5%,过氧乙酸,10min,-,对磺胺、青霉素、链霉素、四环素、红霉素、,氯酶素均敏感,13,临床意义,炭疽是人畜共患的急性传染病,主要是牛、羊等食草类动物的传染病，人可通过接触或摄食病畜及畜产品而感染,皮肤炭疽、肠炭疽、肺炭疽等，,并发败血症，甚至炭疽性脑膜炎,14,致病物质,荚膜：,抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散,炭疽毒素：,保护性抗原、致死因子、水肿因子,15,所致疾病,炭疽病,：,传染源：患病食草动物及其制品或被污染物,传播途径：接触,皮肤炭疽,食用,肠炭疽,吸入,肺炭疽,可并发败血症，,死亡率极高,16,17,乙类传染病,发生肺炭疽按甲类处理,病后可获得持久免疫力,18,要求快速检出、分离鉴定病原菌，以利早期确诊、查清疫源、及时治疗和采取预防对策,三、微生物学检验,19,标本的采集与处理,皮肤炭疽：病灶深部标本,肺炭疽：痰和血液,肠炭疽：粪、呕吐物,脑膜炭疽：,CSF,、,血液,死于败血症的动物，严禁宰杀和解剖，可消,毒皮肤后割取耳朵、舌尖采集少量血液，局,限性病灶可取病变组织或附近淋巴结。,20,无杂菌污染标本：直接接种肉汤增菌或固体培养基,污染杂菌固体标本：加,10,倍量生理盐水充分浸泡，振,荡,10,15min,、静置,10min,，取悬液,65,水浴,30min,或,855min,杀死杂菌，保留芽胞活性，再增菌和培养,污染杂菌液体标本：离心，弃上清液后，加,0.5%,洗涤,剂振荡,10,15min,，离心取沉淀物增菌和分离培养,21,生化反应,噬菌体裂解,青霉素抑制,毒力试验,检验程序,皮毛、腐败脏器等,血液,Ascoli,试验,以,NG,制成悬液经加温或饱和尿素处理,肉汤增菌培养,BAP,或戊烷脒平板,2%,兔血清肉汤,4-8h,G,染色镜检,菌落特征,动力观察,串珠试验,确定报告,荚膜肿胀试验,22,痰、呕吐物、,CSF,及炎症分泌物,2%,兔血清肉汤快速增菌,374h,荚膜肿胀试验,直接涂片,荚膜染色,G,染色,初步报告,0.2ml,注射小白鼠腹腔，,8h,后解剖,涂片,G,染色、荚膜染色,初步报告,23,涂片染色：,-G,染色、荚膜染色、芽胞染色,初步报告,-,荚膜荧光抗体染色,核酸检测：,核酸杂交,分离培养：,-BAP,、,戊烷脒多粘菌素,B,平板,-2%,兔血清肉汤增菌,分离培养,24,鉴定试验,：,形态和菌落特征,生化试验,:,表,11-1,串珠试验,:,-,接种于含青霉素,(0.05,0.5U/ml),的肉汤,中，,37 6h,，大而均匀成串的圆球状菌体,-,与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关,-,类炭疽无此现象,25,青霉素抑制试验：,接种于含青霉素,5,、,10,、,100U/ml,琼脂平板，,3724h,生长 受抑制不生长,串珠和青霉素抑制联合试验：,兔血琼脂平板,抑菌环,青霉素纸片,26,噬菌体裂解试验：,AP631,炭疽噬菌体,NaHCO,3,毒力试验：,接种于含,0.5%NaHCO,3,和,10%,马血清的平板，,10%CO,2,、,37,、,24,48h,有毒株形成荚膜,黏液型菌落,无毒株不形成荚膜,粗糙型菌落,动物试验：,小鼠、家兔或豚鼠皮下接种,27,植物凝集素试验：,Ascoli,热沉淀试验：,可作追溯性诊断,28,Plaque,29,二、蜡样芽胞杆菌,(Bacillus cereus,B.cereus,),30,形态与染色：,-G,+,大杆菌,-,生长,6h,后即形成圆形芽胞、位于,菌体中心或次末端、不突出菌体,-,菌体两端平截，多数呈链状排列,-,引起食物中毒的菌株多有周鞭,毛、无荚膜,微生物特性,31,培养特性：,需氧或兼性厌氧,营养要求不高,最适温度,3035,普通琼脂平板：菌落较大，,灰白色，表面粗糙似,毛玻璃状,或,融蜡状,，有,蜡样光泽,32,BAP,有,溶血,卵黄平板,生长迅速，培养,3h,后，虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷脂而形成白色的混浊环，称,乳光反应,或,卵黄反应,33,生化反应：,能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、水杨素、糊,精，产酸不产气,能胨化牛乳，液化明胶，,VP,（,+,）,、卵磷脂,酶（,+,）,多次传代后生化特性常可改变,34,抵抗力：,耐热，肉汤中细菌需,10020min,才能杀死，,食物中毒菌株的游离芽胞耐受,10030min,、,干热,12060min,才能杀死,对氯霉素、红霉素、庆大霉素敏感，对青霉,素、磺胺、呋喃类耐药,35,临床意义,食物中毒,含菌量达,10,5,/g,以上,呕吐型,耐热肠毒素,腹泻型,不耐热肠毒素,全眼球炎（外伤后）,心内膜炎、败血症和脑膜炎,36,夏、秋季多见,食物有米饭、乳品、禽畜肉类、果汁饮料等，大多为加热烹调过的熟食,在米饭中极易繁殖，由米饭受污染引起的食物中毒在国内、外均为常见,中毒食物大多无腐败、变质现象，感官性状正常，应引起注意,37,微生物学检验,标本采集：,可疑食物、粪便、呕吐物，因食品暴露于空气中，在一定程度都会受到本菌污染，所以不能分离出该菌就认为是引起食物中毒的病原菌。,38,确诊由该菌引起的食物中毒必须,：,从,食物中分离出菌数,10,5,CFU/g,，,提示本菌活跃生长，构成潜在危险,从可疑食物分离到的菌株与从病人粪便和,(,或,),呕吐物中分离到的菌株属同一血清型,39,检验程序,呕吐物、残留食物等,活菌计数,接种 普通琼脂平板、,BAP,、,卵黄平板,3718-24h,纯,培养,动物试验（肠毒素测定）,生化反应,血清凝集（分型）,报告结果,直接涂片染色镜检,40,检验方法：,直接镜检,分离培养与活菌计数,普通琼脂平板、,BAP,、,卵黄平板,鉴定与分型：,根据菌落特点、形态染色、生化反应等初步鉴定,生化分型、血清分型、噬菌体分型，肠毒素检测,41,第,五节,棒状杆菌属,42,棒状杆菌属是一群革兰染色阳性杆菌，菌体形态特征是在其一端或两端常呈棒状膨大，故名，归属放线菌科。,棒状杆菌属概述,43,棒状杆菌属种类繁多，,主要有：,白喉棒状杆菌（,C.diphtheriae,）,假白喉棒状杆菌（,C.pseudodiphtheriticum,）,干燥棒状杆菌（,C.xerosis,）,化脓棒状杆菌（,C.pyogenes,）,溃疡棒状杆菌（,C.ulcerans,）,假结核棒状杆菌（,C.pseudotuberculosis,）,溶血棒状杆菌（,C.haemolyticum,）,J-K,群棒状杆菌（,C.jeikeium,-CDC group JK,）,44,G,+,杆菌、一端或两端膨大成棒状,染色不均匀，两端浓染或有异染颗粒,无鞭毛、无芽胞,排列不规则，呈栅栏状,白喉棒状杆菌,致病菌,类白喉棒状杆菌,条件致病菌,45,白喉棒状杆菌,C.diphtheriae,46,一、生物学特性,形态与染色,:,G,+,细长微弯的杆菌,一端或两端膨大呈棒状,常排列呈,V,、,L,、,X,等文字形,异染颗粒,形态上的鉴别特征,无荚膜、无芽胞、无鞭毛,白喉棒状杆菌异染颗粒,1000,47,培养特性：,需氧或兼性厌氧，最适温度,35,37,营养要求高，在含血液、血清、鸡蛋的培养基上生,长良好,吕氏（,Loeffler,),血清斜面或鸡蛋斜面：,生长最快，,6h,即生长，,10,12h,长出灰白色、,湿润、有光泽的光滑型菌苔,/,菌落，菌体形,态典型、异染颗粒明显，连续传代可保持形,态和产毒性能不变,48,BAP,中菌落,BAP,：,菌落灰白色、光滑型、,直径,1,2mm,、,有狭窄,溶血环（轻型）,多次传代后菌体变为球,型,49,亚碲酸钾,BAP,：,选择鉴别培养基,黑色菌落,鉴别依据,不同菌型还原能力不同，呈现黑色或灰黑色,菌落,根据菌落特征及生化反应特点可将本菌分为：,重型、中间型、轻型,白喉棒状杆菌,在亚碲酸钾,BAP,中菌落,50,液体培养基：,生长较好，但菌型不同其生长特点也不相同,51,生化反应：,分解葡萄糖、半乳糖、麦芽糖、果糖产酸不产气，不分解乳糖、甘露糖，一般不分解蔗糖，吲哚（,-,）、硝酸盐还原（,+,）、触酶（,+,）、氧化酶（,-,）、明胶液化（,-,）尿素（,-,）,重型能分解淀粉、糖原、糊精，迟缓分解蔗糖,52,抵抗力：,对,干燥、寒冷和日光抵抗力较其他无芽胞细菌强，在干燥的假膜中可生存,3,个月,对湿热和消毒剂敏感，,5%,石炭酸、,1,：,1000,升汞,1min,，,1001min,、,6010min,均可灭菌,对青霉素、红霉素等敏感，对磺胺不敏感,53,致病物质,(,一,),白喉外毒素,毒力强，,130ng/kg,可使人死亡,抗原性强,编码外毒素的,tox,基因,-,棒状杆菌噬菌体,二、临床意义,54,作用机制：,A,亚单位可使细胞延伸因子,-2,（,EF-2,）灭活，影响蛋白质的合成,作用特点：,毒性作用大，,1,分子能杀一个细胞,作用于多种细胞，心肌、神经细胞均有毒素受体,肿瘤细胞对此毒素敏感,55,（二）索状因子,细菌表面的一种糖脂，能破坏细胞的线粒体，影响细胞的呼吸与磷酸化,（三）,K,抗原,-,细胞壁外面的一种不耐热糖蛋白,-,抗吞噬,-,有利于细菌在黏膜表面的定植,56,所致疾病：白喉,-,急性呼吸道传染病,传染源：患者及带菌者,传播途径：飞沫或污染,临床表现,细菌,-,上呼吸道粘膜，生长繁殖，产生毒素,细菌与毒素共同作用,引起,局部炎症,：,炎性渗出，坏死，纤维蛋白,假膜,窒息,毒素,血液,全身中毒症状,外周,N-N,炎：膈肌麻痹,-,呼吸困难,声带麻痹,-,声音嘶哑,软颌麻痹,-,吞咽困难,心肌,-,心肌炎,57,白喉假膜,58,抗毒素免疫,感染后机体可获得牢固的免疫力,机体还可通过其它方式获得免疫力：,六月以下婴儿,-,母亲,成人,-,隐性感染、人工主动免疫,易感者：,15,岁儿童,成人,-,也有可能,免疫性：,59,锡克试验（,Schick test,）,（,白喉外毒素皮内试验）,调查人群在感染或预防接种后对白喉是否产生免疫力,根据外毒素与抗毒素中和的原理，以少量白喉外毒素测定机体有无相应抗毒素,缺点,观察时间长、操作繁琐，不易进行广泛测试,60,锡克试验,白喉杆菌所含的毒素对机体组织有损伤作用，而引起一系列病理变化。对白喉具有免疫力的个体，血清中有白喉抗毒素，能中和白喉毒素的有害作用。皮内注射白喉毒素后，观察局部皮肤反应，可以判断受试者是否对白喉有免疫力。,于前臂屈侧皮肤乙醇消毒，皮内注射白喉毒素，,0.1ml,，另一侧前臂皮内注射等量对照液,(,经加热,80,，,5min,处理过的白喉毒素,),。,24h,48h,后观察结果。,1,出现下列情况之一为阳性。（,1,）试验臂局部皮肤红肿，第,4,日直径可达,10mm-20mm,，,7d-14d,开始消退，对照臂无反应。（,2,）于注射后,6h-12h,，两臂同时出现同样大小的红斑，颜色较浅，,24h,后对照臂红斑开始消退，而试验臂的皮肤反应继续发展。,2,阴性：两臂注射部位均无反应。,3,假阳性：双臂注射部位,6h-12h,后同时出现同样大小的红斑，颜色较浅，,24h,后均开始消退。,61,主要用于检查人群对白喉的免疫状态，也可指导临床治疗。,1,阳性：表示机体对白喉无免疫力，应进行白喉疫苗接种，然后再用本试验测定免疫效果。,2,阴性：表示机体已产生了免疫力。,3,假阳性：也表示机体对白喉具有免疫力。双臂注射部位均出现红斑，属于机体对白喉毒紊蛋白质的变态反应。,4.,对于临床疑诊的白喉患者，可同时做本试验与咽拭子细菌培养，根据两种试验结果，分别给予不同的处理。（,1,）白喉杆菌培养阳性，本试验阴性，按白喉病例处理。（,2,）白喉杆菌培养与本试验均阴性，应留观察。（,3,）培养阴性，本试验阳性，应进行预防接种。疑诊白喉，人群白喉免疫状态筛查。局部皮肤感染者。同狄克试验。,62,致敏红细胞凝集试验,测定血清中抗毒素水平,0.1ml,血清，倍比稀释,+,外毒素致敏红细胞,37,、,1h,敏感度可达,10,-4,单位，简便快速,63,防治原则：,-,人工主动免疫,白喉类毒素,DPT,混合疫苗：白喉类毒素、百日咳菌苗、破伤风类毒素,-,人工被动免疫,白喉抗毒素,+,白喉类毒素,-,治疗：抗毒素,+,抗生素,早期足量注射白喉抗毒素，使毒素在与细胞结合以前被抗毒素中和,64,三、微生物学检验,分离出白喉杆菌，并证明其毒力,标本采集：,分泌物,取双份,如不能及时检验，标本浸于无菌生理盐水或,15%,甘油生理盐水保存,65,毒力试验,患者或带菌者咽喉、鼻咽拭子等,直接涂片染色镜检（单染或,G,染色,+,异染颗粒染色）,吕氏血清斜面,3512,18h,亚碲酸钾BAP、352448h,BAP3516-18h,涂片染色镜检,(G,染色和异染颗粒染色）,观察菌落特点,吕氏血清斜面,生化反应,涂片染色镜检,检验程序,66,直接涂片染色镜检：,-2,3,张涂片,G,染色、异染颗粒染色,镜检,初报“直接涂片检出形似白喉杆菌”,早期诊断,-,用无菌棉拭子浸以动物血清，采集标本，,3710h,，,涂片染色镜检,提高阳性率,67,分离培养：,吕氏,血清斜面：,37,、,8,12h,涂片染色镜检,-,检出率要比直接涂片高，有助于快速诊断,亚碲酸钾,BAP,：,37,、,24,48h,，黑色菌落,BAP,：,轻型有,溶血环，应注意与溶血性链球菌鉴别,68,鉴定：,形态染色、菌落特点、生化反应,糖发酵试验、尿素酶、硝酸盐还原,鉴别棒状杆菌属不同的种,白喉：葡萄糖（,+,）、麦芽糖（,+,）,蔗糖（,-,）,69,毒力试验（鉴定致病菌株的重要依据）,体外法：,琼脂平板毒力试验（,Elek,平板毒力测定）,SPA,协同凝集试验,对流电泳,琼脂平板毒力试验,-,Elek,平板,对流免疫电泳,70,体内法：,用豚鼠作毒素,-,抗毒素中和试验,71,