超微结构基本知识讲座.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,*,2010.3,吴晓英,超微结构基本知识,一,、,取材、样品制备与课题设计密切相关,取材前要问几个问题,:,a,所要研究对象的解剖位置是否清楚,?,如海马,.,肾小球病变,.,b,要观察样品的外部还是内部结构？取材和固定前的处理不同（），如肠上皮、牙齿髓腔的观察,c,是定量还是定性？,d,有横,/,纵向之分吗,?,肌肉,神经等,.,取材或固定要与课题设计的目的一致,.,取材、固定,组织取材,:,大小,(1X1X5mm,3,),、部位,(,与要观察的对象有关,),原则,:,保证样品的超微结构不受损伤及细胞原有的定位,.,注意事项,:,切取组织动作要迅速,;,低温操作,;,取材用的刀具要锋利,;,组织块要切小,;,部位要准确可靠,.,(6),做好文案工作,:,标本编号、各项相关资料等,3.,各类标本的取材,实体组织标本的收集,手术标本,穿刺标本,细胞标本的收集,体液游离细胞,:,血液、尿液等,(,抗凝,/,防溶血,),培养细胞的收集,常规包埋法,原位包埋法,培养细胞,:,量的多少能做,(,培养瓶,孔板,),；一般,1mm,3,即可，或孔均可做，其方法不同细胞可更少,固定,:,2.5%-3%,的戊二醛或多聚甲醛混合固定液,.,灌注固定,_,好,浸泡固定,体液,：血、骨髓液、精液等的取材方法特殊性,温度,时间,二,、,超微结构观察与研究中值得注意的问题,1,、局部与整体的关系,:,EM,下,:,极小的一部分,超薄切片获得的样品厚度只有一个细胞的几百分之一,必须同时进行大体和组织学的观察,才能获得全面的资料,.,2,、静态和动态的关系,:,在常规电镜技术中,不能观察活细胞,故细胞结构是瞬间静态的图象,实际上,细胞是运动和变化,细胞超微结构也是动态的,.,防止单纯的形态描述。,3.,半薄切片,:,补充上述缺陷,.,生物样品的普通石蜡切片厚度为,5,微米左右,其观察深度远比超薄切片为大,即在石蜡切片和超薄切片之间不仅有观察范围大小的区别,也有观察厚度大小的显著差异,.,半薄切片厚度为,1,微米左右,一方面可为超薄切片定位,以选取电镜下观察部位,另一方面可供光镜观察标本的整体面貌,.,通过,LM,观察半薄切片可以检见通常在石蜡切片难以检见的形态结构,并据此可做出诊断,.,因为制作半薄切片的材料和技术操作过程不同于石蜡切片,而切片又较普通石蜡切片为薄,故其中某些组织成分得以较好保存和得以显示,有利于诊断,.,4,.,电子显微镜的分辨本领虽已远胜于光学显微镜，但电镜因需在真空条件下工作，所以很难观察活的生物，而且电子束的照射也会使生物样品受到辐照损伤。其他的问题，如电子枪亮度和电子透镜质量的提高等问题也有待继续研究。,三、几类常见细胞的超微结构特征及鉴定,细胞是构成人体最基本的功能单位，人体的细胞有两百多种，其结构不同，功能不同,结构与功能相联系，每种细胞、组织和器官都有一定的形态结构特点。这些特点往往是它们行使,一定功能的结构基础，两者密切相关。,如：分泌蛋白质的腺细胞富有粗面内质网和发达的高尔基复合体，巨噬细胞则有较多的溶酶体；构成肌组织的肌细胞，形态细长，含有大量纵行肌丝，是细胞收缩的物质基础；上皮组织则细胞排列紧密，具有吸收和保护等功能相关结构。又如消化管是连续的管道，而食管、胃、小肠和大肠的粘膜又各有特点，它们与各段的相应功能相关。因此，结构与功能相结合既能达到深入理解，融会贯通,神经元,神经组织由神经细胞和神经胶质细胞构成。神经细胞即为神经元，是神经系统的结构功能单位，可接受刺激，传递信息，有的还有内分泌功能。神经胶质起支持、营养、保护作用。,突分两类，即轴突,(axon),和树突,(dendrite),，大多数神经元具有多个树突，每个树突都较短，分支较多，可扩大接受信息面积。,树突小分支表面有大量的细刺状突起，称为棘突或棘刺（,spine,）。,神经细胞（,neuron,）细胞质内有丰富粗面内质网及发达的高尔基体，细胞核大，常染色质及核仁均明显,。粗面,内质网与核糖体成片，异染色质少单个核仁均明显,。,大鼠脑神经细胞，胞核大，核常染色质及染色质间颗粒（黑“,”,）明显，核仁大（白“,”,）。,14000,大鼠脑神经细胞，胞质内粗面内质网（黑“,”,）丰富，高尔基体（黑“,”,）发达，细胞周边可见突触（白“,”,）。,20000,人脑白质中少突胶质细胞，核及细胞均略呈椭圆形，核相对较大，胞质少，核糖体较多，其他细胞器少，邻近为神经毡。,16000,血管内皮细胞,内皮为衬贴于血管腔单层扁平上皮。内皮细胞长轴多与血液流动方向一致，细胞核居中，核所在部位略隆起，细胞基底面附着于基板上。电镜观察，可见内皮细胞腔面有稀疏而大小不一的胞质突起，表面覆以厚约,30,60nm,的细胞衣，相邻细胞间有紧密连接和缝隙连接及,10,20nm,的间隙。内皮细胞核淡染，以常染色质为主，核仁大而明显。在胞质内有发达的高尔基复合体、粗面内质网和滑面内质网。,内皮细胞超微结构的,主要特点,是胞质中有丰富的吞饮小泡，或称质膜小泡（,plasmalemmal,vesicle,），直径,60,70nm,（图）。这些小泡是由细胞游离面或基底面的细胞膜内凹形成，然后与细胞膜脱离，经细胞质移向对面，又与细胞膜融合，将小泡内所含物质放出，故小泡有向血管内外输物质的作用，细胞质内还可见成束的微丝和一种外包单位膜的杆状细胞器，长约,3m,直径,0.1,0.3m,，内有,6,26,条直径约,15nm,左右的平行细管，称,Weibel,-Palade,小体（,W-P,小体）,W-P,小体,是内皮细胞特有的细胞器，一般认为它是合成和储存与凝血有关的第,因子相关抗原（,factor related antigen,F,）的结构（图）,上皮细胞,上皮组织（,epithelial tissue,）由密集的细胞组成，细胞形状较规则，细胞间质很少，大部分上皮覆盖于身体表面和衬贴在有腔器官的腔面,上皮组织的细胞呈现明显的极性（,polarity,），即细胞的两端在结构和功能上具有明显的差别。,上皮细胞表面的,特化结构,:,游离面特殊结构,(,微绒毛与纤毛,),。上皮细胞侧面的连接,(,紧密连接、中间连接、桥粒、缝隙连接、连接复合体,),。上皮细胞基底面的结构,(,基膜、质膜内褶、半桥粒,),。,人皮肤鳞状上皮细胞，胞质内有丰富的张力原纤维（白“,”,），细胞间有桥粒（黑“,”,）。,20000,兔输卵管纤毛柱状上皮，可见纤毛柱状细胞（黑“,”,）及浆液粘液分泌细胞（白“,”,）。,肠粘膜上皮细胞间可见高脚杯状粘液分泌细胞（黑“,”,），核小（白“,”,），在基底处。,5000,人胃粘膜上皮中神经内分泌细胞，胞质内可见大量神经内分泌颗粒，细胞间可见桥粒（黑“,”,）。,6000,4.,肌细胞,依椐肌细胞的形态结构、功能和分布，肌肉组织分三种类：,平滑肌,：,细胞呈梭状,无横纹,不受意志支配（不随肌）,骨骼肌,:,具横纹,肌肉收缩受意志支配，又称随意肌,收缩力 强，易疲劳,心肌,:,具横纹,肌原纤维粗细差别很大，介于,0.2,2.3,微米之间；同时，粗的肌原纤维与细的肌原纤维可相互移行，相邻者又彼此接近以致分界不清。,免输卵管肌壁平滑肌细胞，胞质内可见密布肌细丝,少量密体（黑“,”,）及密斑（黑“,”,）,质膜外有基板，细胞间有连接。,30000,细胞内可见线粒体（黑“,”,）及肌原纤维，肌节（黑“,”,）中带、带、带及线、线都清楚可见。,33000,豚鼠心肌细胞，可见线粒体（黑“,”,）、肌原纤维（黑“,”,）、管（白“,”,）及肌浆网（白“,”,）。,21000,5,肿瘤细胞,肿瘤的基本结构不管什么肿瘤，都由主质和间质两部分构成。,肿瘤不伺，主质成份也不同，实际上主质也就是肿瘤细胞。,低分化,异常分化,侵润性生长、破坏正常细胞,与蛋白质合成有关的结构十分发达,细胞外形异常,细胞排列紊乱极性消失,细胞核形态异常,细胞器形态异常,异型性,特点,鼻咽癌未分化型，癌细胞大小形状不一，仅见个别原始连接（黑“,”,）。,6000,小脑髓母细胞瘤 瘤细胞大小形状不一。,10000,鼻咽癌，癌细胞大小不一，形态各异，胞质中可见较多粗面内质网及张力原纤维（黑“,”,）。,10000,皮肤鳞癌 癌细胞形态怪异，胞质中有丰富张力原纤维（白“,”,），细胞间桥粒少（黑“,”,）。,12000,间变型室管膜瘤，瘤细胞及核大小、形状差异很大。,6000,谢 谢 ！,