亲免素加载的红细胞作为新药的传递系统.ppt

,亲免素加载的红细胞作为免疫抑制药的新传递策略,目录,1,2,3,4,Abstract/,摘要,Introduction/,介绍,Materials and methods,/,材料与方法,Results,/,结果,5,Discussion/,讨论,1,2,3,1,2,Abstract/,摘要,环孢霉素,A,（,CsA,）,他克莫司（,FK506,）,FKBP12,CypA,从,FKBP12RBC,释放的,FK506,能被,T,淋巴细胞吸收，作为自由的药物抑制,IL-2,在体外表达,;,实验结果：扩散性免疫抑制剂可以被红细胞摄取,亲免素靶向,RBC,可以被作为免疫抑制药的潜在传递系统,Introduction/,介绍,FK506,和,CsA,阻止了细胞核转录因子的移位，“核因子和活化的,T,细胞”,(NF-AT),。,FK506,在体外的效力比环孢霉素大,100,倍，能经常抑制毒性发生，包括肾毒性、神经毒性、葡萄糖不耐性等,一个基于使用红细胞作为药物输送系统的有趣的策略已被提出，主要是基于两点：,1,）生理的相互作用在他克莫司或环孢素,A,与红细胞亲免素之间发生,;2,）将,RBC,作为药理学载体的可能性归因于细胞膜的开放和释放的独特能力。,Materials and methods,/,材料与方法,人体,FKBP12,的和亲环素,A,重组体形式的生产,1,2,重组蛋白质,-,药物结合研究,3,重组蛋白质载入人体红细胞,4,原生和,FKBP12,加载的红细胞的,FK506,结合能力评价,5,未加载和,CypA,加载红细胞的,CsA,结合能力的评价,6,KBP12,加载红细胞作为,FK506,传递系统的可行性,7,从,FKBP12,加载的,RBC,中释放的,FK506 IL-2,的表达抑制,Results/,结果,1,重组蛋白,-,药物结合研究,FKBP12-FK506,结合点杂交分析。,FKBP12,的不同数量被点在,0.2um,孔径的的硝酸纤维素膜上，进行点杂交分析,。,从左到右：,FKBP12 10,5 and 2.5,g,/,孔。,Results/,结果,2,FKBP12,和,CypA,加载的,RBC,的特征,加载过程后细胞恢复。在加载过程结束中获得恢复细胞的百分比计算为,FKBP12,加载（,a,）和,CypA,加载,RBC,（,b,）。装载,20,，,40,和,80um,的蛋白质细胞的恢复与未加载的细胞进行了比较。所得结果为,5,次加载实验的平均值,。,Results/,结果,2,FKBP12,和,CypA,加载的,RBC,的特征,细胞内,rFKBP12,（,a,）和,rCypA,（,b,）进入到工程红细胞中的浓度。,125I-FKBP12,（,a,）和,125I-CypA,（,b,）被加载到人类红细胞，恢复的放射性物质在不同的负载条件下（,20,，,40,和,80um,）用于估计包埋蛋白量的数量。结果是从,3,加载实验得出的平均值。,Results/,结果,3,评价原生和亲免素加载红细胞的药物结合能力,FKBP12RBC,结合他克莫司的能力。该图显示,FKBP12,加载,RBC,与原生红细胞相比，在,20,，,40,和,80um,的蛋白质浓度下他克莫司的结合能力。结果,3,次个实验所得的平均值。,P,值被称为原生红细胞。,Results/,结果,3,评价原生和亲免素加载红细胞的药物结合能力,CypARBC,结合,CsA,的能力。在直方图中表示与未加载红细胞相比，加载红细胞在,20,，,40,和,80um,的,CypA,浓度下，,CsA,的结合能力。结果,3,个实验所得的平均值。,P,值被称为未加载红细胞。,Results/,结果,4,FKBP12,的加载红细胞作为,FK506,的输送系统的适用性,加载细胞的稳定性。装载过程的细胞（加载和卸载,RBC,）在治疗,6,天之后被孵育，每个样品的存活曲线都被估计。,Results/,结果,4,FKBP12,的加载红细胞作为,FK506,的输送系统的适用性,FKBP12/FK506-,加载红细胞在体外地药物释放。从工程红细胞丸稀释到全血直到,60,分钟，通过评估药物释放到血浆的片段，来评价,FKBP12/FK506,加载红细胞释放药物的能力。,Results/,结果,5,从,FKBP12,加载,RBC,释放的被,FK506,抑制,IL-2,的表达,3H,胸苷掺入激活淋巴细胞。在表中，,cpm,值代表了在,48,小时中，,3H-,胸苷注入未激活的和分裂激活的细胞的速率。,Results/,结果,5,从,FKBP12,加载,RBC,释放的被,FK506,抑制,IL-2,的表达,从,PBL,的所得,RNA,的,RT-PCR,分析显示，,32,的,IL-2,的表达抑制在,24,小时内，在,T,细胞暴露到,2 10,7,与他克莫司育培养的,FKBP12,的加载,RBC,中，至于,PBL,没有收到药物加载的红细胞。在,PBL,接受自由药物，依靠,RBC,（,3 nM,）提供相同数量的，相等的,IL-2 mRNA,抑制（约,34,）被检测到。,Discussion/,讨论,谢谢观赏！,