湖北实验动物专业技术考试复习用PPT---胡秀兰-操作规程(SOP)与动物实验技术.ppt

操作规程（操作规程（SOP)SOP)与动物实验技术与动物实验技术武汉生物制品研究所有限责任公司胡秀兰 联系电话：1899558620012主要内容主要内容主要内容主要内容一一我国实验动物管理体制简介我国实验动物管理体制简介二二相关相关SOPSOP和程序和程序三三动物实验技术动物实验技术一、我国实验动物的管理体制一、我国实验动物的管理体制3我国实验动物的管理体制我国实验动物的管理体制我国实验动物的管理体制我国实验动物的管理体制我国实验动物质量保障体系我国实验动物质量保障体系我国实验动物质量保障体系我国实验动物质量保障体系许可证管理许可证管理五年五年换发换发 每年年检每年年检 国家级种子中心国家级种子中心 （动物种子供应）（动物种子供应）质量监测质量监测 实验动物质量保障体系实验动物质量保障体系实验动物质量保障体系实验动物质量保障体系实验动物质量管理国家标准实验动物质量管理国家标准实验动物质量管理国家标准实验动物质量管理国家标准哺乳类实验动物遗传控制质量标准哺乳类实验动物遗传控制质量标准实验动物微生物学等级及监测实验动物微生物学等级及监测实验动物寄生虫学等级及监测实验动物寄生虫学等级及监测实验动物环境及设施实验动物环境及设施实验动物环境及设施实验动物环境及设施实验动物配合饲料通用质量标准实验动物配合饲料通用质量标准实验动物配合饲料通用质量标准实验动物配合饲料通用质量标准实验动物配合饲料卫生标准实验动物配合饲料卫生标准实验动物配合饲料卫生标准实验动物配合饲料卫生标准实验动物大鼠、小鼠、地鼠、地鼠、实验动物大鼠、小鼠、地鼠、地鼠、兔、猴、犬配合饲料（系列标兔、猴、犬配合饲料（系列标准共准共6 6项）项）强制性标准（共强制性标准（共1212项）项）推荐性标准（共推荐性标准（共8181项）项）实验动物微生物学检测方法（系列标准共实验动物微生物学检测方法（系列标准共实验动物微生物学检测方法（系列标准共实验动物微生物学检测方法（系列标准共55555555项）项）项）项）SPFSPFSPFSPF鸡微生物学检测方法（系列标准共鸡微生物学检测方法（系列标准共鸡微生物学检测方法（系列标准共鸡微生物学检测方法（系列标准共10101010项）项）项）项）实验动物寄生虫学检测方法（系列标准共实验动物寄生虫学检测方法（系列标准共实验动物寄生虫学检测方法（系列标准共实验动物寄生虫学检测方法（系列标准共10101010项）项）项）项）实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法实验动物近交系小鼠、大鼠皮肤移植法实验动物近交系小鼠、大鼠皮肤移植法实验动物近交系小鼠、大鼠皮肤移植法实验动物近交系小鼠、大鼠皮肤移植法实验动物配合饲料常规营养成分的测定实验动物配合饲料常规营养成分的测定实验动物配合饲料氨基酸的测定实验动物配合饲料氨基酸的测定实验动物配合饲料维生素的测定实验动物配合饲料维生素的测定实验动物配合饲料矿物质和微量元素的测定实验动物配合饲料矿物质和微量元素的测定7湖北省实验动物管理条例，2005年10月1日施行。湖北省实验动物管理条例湖北省实验动物管理条例湖北省实验动物管理条例湖北省实验动物管理条例必须取得湖北省实验动物生产或使用许可证9许可证有效许可证有效期五年期五年http:/www.hbsydw.org/湖北省实验动物公共服务平台湖北省实验动物公共服务平台湖北省实验动物公共服务平台湖北省实验动物公共服务平台实时登记实时登记在线监控在线监控二、如何在实验动物中心做实验二、如何在实验动物中心做实验11实验动物品种实验动物品种 SFP SFP级实验动物级实验动物1 1、ICRICR小鼠小鼠2 2、KMKM小鼠、小鼠、NIHNIH小鼠、小鼠、BALB/CBALB/C小鼠、地鼠小鼠、地鼠 普通级实验动物普通级实验动物 兔、豚鼠兔、豚鼠12本本中中心心动动物物实实验验室室开开放放时时间间为为周周一一周周五五8 8：40401616：0000。双休日有人值班。双休日有人值班。动动物物饲饲养养室室内内动动物物照照明明时时间间设设定定为为7 7：00001717：0000，即，即10h10h明明14h14h暗。暗。13 动物实验室开放时间动物实验室开放时间 o每每年年的的1010月月提提交交下下一一年年度度的的实实验验动动物物使使用用计计划划，交交生生产产技技术术部部，由由生生产产技技术术部部统统一一向向实实验验动动物物中中心下达下年度的生产任务。心下达下年度的生产任务。o每每月月2525日日前前，各各使使用用部部门门（科科室室）填填写写下下月月的的动物使用计划交实验动物中心。动物使用计划交实验动物中心。o在在本本中中心心做做动动物物实实验验实实行行至至少少提提前前一一天天预预约约登登记记制。制。o详详细细填填写写：课课题题名名称称、动动物物的的品品种种、品品系系、性性别别、数数量量、实实验验开开始始的的日日期期、预预计计实实验验结结束束的的日日期期、实实验验材材料料中中有有无无有有毒毒、有有害害、感感染染性性、放放射射性性物物质质以以及及实实验验的的特特殊殊条条件件、有有无无大大型型仪仪器器设设备备搬搬入入等等。经经本本中中心心审审核核后后，即即安安排排动动物物的的供供应应，落落实实动物实验场所。动物实验场所。1 1、年度计划和预约登记年度计划和预约登记142 2、网上平台管理的管控网上平台管理的管控15三天内登录三天内登录3 3、屏障环境设施环境指标控制屏障环境设施环境指标控制控制人员、物品、动物和空气控制人员、物品、动物和空气温度：温度：20-26 20-26 湿度：湿度：40-70%40-70%换气：换气：15 15次次/h h噪声：噪声：60 60dBdB工作照度：工作照度：20200 0lx lx动物照度（小鼠、地鼠、豚鼠）：动物照度（小鼠、地鼠、豚鼠）：15-15-20Lx20Lx 兔：兔：100-100-150Lx150Lx树立无菌观念，严格管理，规范操作树立无菌观念，严格管理，规范操作 164 4、屏障环境设施运行模式图屏障环境设施运行模式图经初、中、高效经初、中、高效三级过滤后进入三级过滤后进入空空 气气耐高温物品经高压灭菌进入耐高温物品经高压灭菌进入饲料等经渡槽消毒进入饲料等经渡槽消毒进入不耐高温物品经传递窗消毒进入不耐高温物品经传递窗消毒进入物物品品动动物物经传递窗外包装消毒后进入经传递窗外包装消毒后进入人人员员经穿戴无菌防护服、经穿戴无菌防护服、口罩、手套后进入口罩、手套后进入高压锅高压锅渡槽渡槽传递窗传递窗人员人员 通道通道屏屏障障设设施施出口出口 缓冲缓冲空空气气过过 滤滤除除 臭臭排排 放放人人 员员物物 品品动动 物物缓缓 冲冲退退 出出17严格规定人员、物品、动物的流向严格规定人员、物品、动物的流向 合理选择消毒方法合理选择消毒方法 积极开展各项指标的检测工作积极开展各项指标的检测工作认真做好屏障环境内外的清洁消毒工作认真做好屏障环境内外的清洁消毒工作加强人员队伍建设和管理加强人员队伍建设和管理有效的检测措施有效的检测措施5 5、屏障屏障设施的设施的运行运行管理管理规范规范 SPFSPF级车间人员流动路线级车间人员流动路线外区外区办公室办公室/休息间休息间更外衣更外衣更衣间更衣间缓冲间缓冲间一更间一更间二更缓二更缓冲间冲间手消毒手消毒洁品间洁品间二更间二更间准备间准备间工作间工作间 洁净走廊洁净走廊饲养间饲养间洁净走廊洁净走廊污物走廊污物走廊19污物缓冲人员缓冲生产区洁净走廊生产区洁净走廊动物接收间动物接收间检疫检疫3-73-7天天传递窗传递窗洁净走廊洁净走廊饲养间饲养间紫外照射紫外照射30min30min消毒剂擦拭外包装消毒剂擦拭外包装SPFSPF级车间动物循环路线级车间动物循环路线污物走廊污物走廊缓冲间缓冲间冷藏间冷藏间20合理选择消毒方法合理选择消毒方法饲养笼盒、饮水瓶、垫料、衣服和各种实验用具饲养笼盒、饮水瓶、垫料、衣服和各种实验用具采用高压蒸汽灭菌器消毒采用高压蒸汽灭菌器消毒;动物食用饲料采用放射性照射动物食用饲料采用放射性照射(6060Co)Co)的消毒方法的消毒方法;工作人员用的拖鞋等采用浸泡的方法工作人员用的拖鞋等采用浸泡的方法(0.1%(0.1%新洁新洁尔灭或尔灭或1%841%84消毒溶液、消毒溶液、0.2%-0.5%0.2%-0.5%过氧乙酸过氧乙酸)消消毒毒;对于不耐热、不耐水、不耐酸碱和不能进行放射对于不耐热、不耐水、不耐酸碱和不能进行放射性照射的物品采用传递窗紫外线消毒。性照射的物品采用传递窗紫外线消毒。积极开展各项指标的检测工作积极开展各项指标的检测工作经常对空调通风系统进行保养经常对空调通风系统进行保养,每每1 12 2 周更换排风周更换排风口过滤膜口过滤膜,每天更换新风口过滤膜，每每天更换新风口过滤膜，每2-32-3个月更个月更换一次初效和中效过滤袋换一次初效和中效过滤袋,每年更换一次高效过滤每年更换一次高效过滤器器;每半年检测一次外购饲料的微生物指标和营养成每半年检测一次外购饲料的微生物指标和营养成分分,每季度检测一次高压灭菌物品（水、垫料等）每季度检测一次高压灭菌物品（水、垫料等）的微生物指标的微生物指标;每天对温度、湿度、压差等进行监每天对温度、湿度、压差等进行监测。测。认真做好屏障环境内外的清洁消认真做好屏障环境内外的清洁消毒工作毒工作保持屏障环境内的洁净度是保持屏障环境内的洁净度是SPF SPF 级动物房正常级动物房正常运行的关键。运行的关键。每天的实验和饲养工作完成后每天的实验和饲养工作完成后,对室内环境进对室内环境进行清洁行清洁,每每 次用灭菌消毒水对整个屏障系统的次用灭菌消毒水对整个屏障系统的内环境和饲养笼架进行清洁消毒。内环境和饲养笼架进行清洁消毒。有效的检测措施有效的检测措施环境设施的检测环境设施的检测日常消毒灭菌物品的检测日常消毒灭菌物品的检测环境设施的检测环境设施的检测主要参数包括主要参数包括温度、湿度、噪音、光照、室内温度、湿度、噪音、光照、室内风速、氨浓度、室内换气次数、各区域压力差风速、氨浓度、室内换气次数、各区域压力差等等。要根据检测的指标调整或适时更换维护系。要根据检测的指标调整或适时更换维护系统的设备统的设备,对多项环境参数的正常维持都有着对多项环境参数的正常维持都有着重要的作用重要的作用温、湿度和压差需每日记录温、湿度和压差需每日记录,根据它们的变化根据它们的变化,需要对风阀或空气过滤器进行更换处理。环境需要对风阀或空气过滤器进行更换处理。环境指标的全面系统检测一般指标的全面系统检测一般每季度检测一次每季度检测一次。日常消毒灭菌物品的检测日常消毒灭菌物品的检测双扉高压真空灭菌器双扉高压真空灭菌器,用于所有可经高压灭菌用于所有可经高压灭菌的物品的物品;消毒液渡槽消毒液渡槽,用于可浸泡消毒的物品用于可浸泡消毒的物品;传递窗用于不能高压传递窗用于不能高压,又不能浸泡的物品。又不能浸泡的物品。加强人员队伍建设和管理加强人员队伍建设和管理人员污染是洁净动物设施失败的重要原因。人员污染是洁净动物设施失败的重要原因。人与动物直接接触之间的防护仅仅是洗澡和穿人与动物直接接触之间的防护仅仅是洗澡和穿上灭菌衣、戴上手套和口罩。裸露部分很容易上灭菌衣、戴上手套和口罩。裸露部分很容易对环境造成污染。对环境造成污染。工作人员容易出汗，偶尔也打喷嚏，但灭菌衣、工作人员容易出汗，偶尔也打喷嚏，但灭菌衣、口罩并不具备初、中、高效过滤功能，也容易口罩并不具备初、中、高效过滤功能，也容易对环境造成污染。对环境造成污染。加强加强人员培训人员培训 岗前接受实验动物专业培训岗前接受实验动物专业培训 了解实验设施的特点和要求了解实验设施的特点和要求 实验动物饲养管理方法实验动物饲养管理方法 熟悉操作程序和操作规范熟悉操作程序和操作规范 工作中接受实验动物管理员的技术指导工作中接受实验动物管理员的技术指导人员的培训人员的培训 o本动物实验室所用的实验动物原则上必须本动物实验室所用的实验动物原则上必须 本单位供应的本单位供应的向有动物生产许可证的单位购买。向有动物生产许可证的单位购买。没没有有清清洁洁级级和和SPFSPF级级质质量量合合格格证证的的动动物物禁禁止止进进入入本本SPFSPF级动物实验室。级动物实验室。本本中中心心不不接接受受实实验验人人员员自自行行采采购购的的来来源源不不清清的的动动物。物。o在在一一般般情情况况下下，本本中中心心在在双双方方协协定定的的时时间间内内将将实实验验人人员员要要求求的的实实验验动动物物（品品种种、品品系系、性性别别及及年年龄龄或或体体重重）运运到到指指定定的的动动物物实实验验车车间间，由由实实验验人人员分组安置动物。员分组安置动物。6 6、动物的供应和确认动物的供应和确认29o动物领用后，本中心通知实验人员对动物进行动物领用后，本中心通知实验人员对动物进行验收。如有不合格或有疑义，实验人员须第一验收。如有不合格或有疑义，实验人员须第一时间通知饲养人员。时间通知饲养人员。o外购动物：外购动物：实验前动物检疫观察实验前动物检疫观察3d3d7d7d，普通级动物（兔、豚鼠）检疫观察，普通级动物（兔、豚鼠）检疫观察d dd d。o单位内供动物：单位内供动物：实验前应观察实验前应观察1 d 1 d。307 7、动物的检疫动物的检疫核对项目：实验动物品种品系、性别、数核对项目：实验动物品种品系、性别、数量、体重。量、体重。检检疫疫项项目目：是是否否有有异异常常（死死亡亡、外外伤伤、畸畸形形、溃溃烂烂、脱脱毛毛、异异常常分分泌泌物物）等等临临床床症症状状，诊断取样，安乐死诊断取样，安乐死8 8、动物实验饲养密度标准动物实验饲养密度标准成年小鼠：限成年小鼠：限5 5只只/笼笼繁殖小鼠：限繁殖小鼠：限3 3只只/笼笼成年大鼠：限成年大鼠：限3 3只只/中鼠笼中鼠笼新新生生仔仔鼠鼠：限限1 1窝窝/笼笼，并并明明确确标标示示出出生生日日期。期。31在本中心进行动物实验时，由动物饲养人员负在本中心进行动物实验时，由动物饲养人员负责动物实验场所的安排。责动物实验场所的安排。清洁级以上大小鼠实验场所的安排，原则上依清洁级以上大小鼠实验场所的安排，原则上依据制品类别及科研分区。据制品类别及科研分区。329 9、动物实验场所的安排动物实验场所的安排 1010、动物实验操作规范动物实验操作规范抓取实验动物：要小心，不能粗暴，防止抓取实验动物：要小心，不能粗暴，防止被动物咬伤；如被咬伤，立即用纯净流水被动物咬伤；如被咬伤，立即用纯净流水冲洗，通知工作人员用外用消毒药局部应冲洗，通知工作人员用外用消毒药局部应急处理、登记，并尽快前往医院处置急处理、登记，并尽快前往医院处置谨防动物逃逸：随时盖好笼盖，及时捉回谨防动物逃逸：随时盖好笼盖，及时捉回逃逸动物淘汰处置逃逸动物淘汰处置回送笼盒：还原到位（确保回送笼盒：还原到位（确保IVCIVC笼具通气）笼具通气）应急处理：实验人员如发现动物有异常情应急处理：实验人员如发现动物有异常情况，应立即告知有关管理人员应急处理况，应立即告知有关管理人员应急处理环境整洁：清洁工作台和地面；将使用过环境整洁：清洁工作台和地面；将使用过的笼具放置规定区域，传至洗刷间；屏障的笼具放置规定区域，传至洗刷间；屏障内走廊禁止摆放实验用品内走廊禁止摆放实验用品33每天检查饲养间内的温度、湿度、压差、每天检查饲养间内的温度、湿度、压差、噪声；噪声；准备好灭菌拖鞋、手套、口罩、防护服等准备好灭菌拖鞋、手套、口罩、防护服等用品；用品；及时清理、清洗、干燥、消毒灭菌防护服及时清理、清洗、干燥、消毒灭菌防护服等用品；等用品；每周更换垫料，保证动物饮水、饲料充足，每周更换垫料，保证动物饮水、饲料充足，维护饲养环境清洁、整齐，不留死角；维护饲养环境清洁、整齐，不留死角；每天对屏障内地面、走廊消毒，预防交叉每天对屏障内地面、走廊消毒，预防交叉感染；感染；将消毒灭菌后的笼具、饲料、垫料、饮水将消毒灭菌后的笼具、饲料、垫料、饮水储备充足；储备充足；每天对设备、实验动物状态进行观察并做每天对设备、实验动物状态进行观察并做好记录；好记录；如发现异常，及时通知相关研究组实验人如发现异常，及时通知相关研究组实验人员。员。34 1010、动物实验操作规范动物实验操作规范进出屏障系统应按指定的路线走，穿无菌进出屏障系统应按指定的路线走，穿无菌衣帽、戴口罩手套，不得随意闯进入，并衣帽、戴口罩手套，不得随意闯进入，并及时登记及时登记人员进出车间记录人员进出车间记录。在屏障系统内进出各区域应在屏障系统内进出各区域应随手关门随手关门，保，保持压差和气流方向，不得敞开洁净区内各持压差和气流方向，不得敞开洁净区内各门。门。共用的动物实验用具，如实验台、电子秤、共用的动物实验用具，如实验台、电子秤、固定器、解剖板等，用后应清理干净，放固定器、解剖板等，用后应清理干净，放回原处。回原处。动物中心提供更换笼盒、给水给料等服务。动物中心提供更换笼盒、给水给料等服务。实实验验人人员员和和饲饲养养人人员员共共同同担担任任实实验验动动物物的的观察。观察。工工作作完完毕毕必必须须及及时时清清场场，并并按按废废弃弃物物分分类类别放入垃圾桶类。别放入垃圾桶类。实实验验人人员员与与本本中中心心工工作作人人员员之之间间应应及及时时沟沟通，可在通，可在白板上留言。白板上留言。3511 11、实验人员应注意的事项实验人员应注意的事项实实验验人人员员应应在在实实验验记记录录卡卡片片上上记记载载分分组组编编号号情情况，况，禁止用记号笔在笼盒上作记号。禁止用记号笔在笼盒上作记号。实实验验人人员员未未经经他他人人允允许许，不不得得进进入入其其他他动动物物实实验验室室，也也不不得得动动用用同同一一动动物物实实验验室室的的其其他他实实验验组的动物。组的动物。为为避避免免动动物物传传染染病病的的流流行行，屏屏障障系系统统内内的的实实验验动物一旦拿出屏障系统，不得再带回屏障系统。动物一旦拿出屏障系统，不得再带回屏障系统。3611、实验人员应注意的事项实验人员应注意的事项实实验验人人员员在在实实验验中中产产生生的的废废弃弃物物应应在在实实验验后后进进行行清清扫扫，废废弃弃的的纸纸箱箱、塑塑料料袋袋应应整整齐齐折折叠叠，包包扎扎；换换下下的笼具整齐叠加，放到污物走廊上。的笼具整齐叠加，放到污物走廊上。工工作作人人员员在在饲饲养养管管理理中中发发现现死死亡亡动动物物后后，应应通通知知实实验验人人员员。如如实实验验人人员员无无特特殊殊要要求求，本本中中心心将将动动物物尸尸体作废弃尸体处理。体作废弃尸体处理。实实验验中中产产生生的的动动物物尸尸体体应应由由实实验验人人员员集集中中后后放放置置于于塑塑料料袋袋内内，自自行行带带出出，放放到到动动物物尸尸体体冰冰柜柜内内。注注射射针头、针管：放置锐器盒内；针头、针管：放置锐器盒内；淘淘汰汰实实验验动动物物：经经缓缓冲冲间间出出屏屏障障（屏屏障障内内禁禁止止处处死死动动物物），在在指指定定地地点点经经安安乐乐死死方方式式处处置置，动动物物尸尸体体及及残残留留物物要要经经塑塑料料袋袋密密封封后后，存存放放在在专专用用冰冰柜柜内内。并填写实验动物处死记录并填写实验动物处死记录371212、废弃物和动物尸体的处理废弃物和动物尸体的处理38实实验验结结束束时时，实实验验人人员员应应及及时时通通知知中中心心工工作作人人员员，便便于于及及时时清清理理、消消毒毒，并并做做好好一一切切准准备备工工作。作。如课题验收、鉴定、评奖等需要，实验人员可如课题验收、鉴定、评奖等需要，实验人员可向动物中心索要：向动物中心索要：实验动物使用许可证，实验动物使用许可证，实验动物质量合格证，实验动物质量合格证，实验动物设施使用合格证实验动物设施使用合格证等。等。391313、动物实验结束动物实验结束三、动物实验技术三、动物实验技术40动物实验：动物实验：是用实验动物作为人的替身是用实验动物作为人的替身进行各种生命科学实验的过程。进行各种生命科学实验的过程。以实验动物为材料，采用各种方法在实以实验动物为材料，采用各种方法在实验动物身上做试验，研究动物在实验过验动物身上做试验，研究动物在实验过程中的反应、表现及发生、发展规律和程中的反应、表现及发生、发展规律和有关技术问题。有关技术问题。动物实验操作技术：动物实验操作技术：是实施动物实验的是实施动物实验的重要手段，在不同的研究领域有其不同重要手段，在不同的研究领域有其不同的目的和应用，一些基本操作技术是共的目的和应用，一些基本操作技术是共同的。同的。41各种动物特点比较实验项目 无菌动物 无特殊病原体动物 普通动物 传染病 无无有或可能有 寄生虫 无无有或可能有实验结果 明确明确有疑问 应用动物数 少数少数多（或大量）统计价值 很好可能好不准确 长期实验 可能好可能好困难 自然死亡率 很少少高 长期实验存活率 约100%约90%约40%实验的准确设计 可能可能不可能实验结果的讨论价值 高中低 小鼠比较温顺，抓取时先用右手抓取鼠尾提取，置于鼠笼和实验台向后拉，在其向前爬行时，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈部的皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，以无名指按住鼠尾，小指按住鼠尾即可。（一）动物抓取固定（一）动物抓取固定431 1、大、小鼠的抓取固定、大、小鼠的抓取固定45小鼠固定盒固定46大鼠固定盒固定大鼠固定盒固定473 3、豚鼠的抓取与固定、豚鼠的抓取与固定484 4、家兔的抓取与固定、家兔的抓取与固定49兔固定盒固定501 1、大、小鼠的、大、小鼠的性别鉴定性别鉴定（二）（二）性别鉴定性别鉴定51Female Male 2 2、兔的、兔的性别鉴定性别鉴定523 3、豚鼠的、豚鼠的性别鉴定性别鉴定二、小鼠编号的标记方法二、小鼠编号的标记方法1 1、染色法：染色法：3 3 -5-5苦味酸溶液（黄色）苦味酸溶液（黄色）0.5%0.5%中性红或碱性品红溶液（红色）中性红或碱性品红溶液（红色）2 2硝酸银溶液（咖啡色，涂后光照硝酸银溶液（咖啡色，涂后光照1010分钟）分钟）煤焦油酒精溶液（黑色）煤焦油酒精溶液（黑色）龙胆紫溶液（紫色）龙胆紫溶液（紫色）53（三（三）标记编号标记编号 优点：简单、易识别优点：简单、易识别缺点：长期易退色；不能编大号码。缺点：长期易退色；不能编大号码。左左前前腿腿上上部部为为1 1，左腰部为左腰部为2 2，左后腿为左后腿为3 3，头部为头部为4 4，背部为背部为5 5，尾基部为尾基部为6 6，右右侧侧从从前前至至后后依依次次为为7 7、8 8、9 9。用用黄黄色色表表示示个个位位数，红色表示十位数数，红色表示十位数2.2.剪剪耳耳号号法法：是在动物的耳边缘剪出不同的缺口或打成不同的小孔进行标记的方法。由打孔或剪切的位置和孔数代表编号，一般在耳内按上、中、下打孔，分别代表1、2、3，在相应位置剪1个缺口代表4、5、6，剪2个缺口代表7、8、9，无孔或缺口为10。一般左耳代表个位数、右耳代表十位数。3.3.断趾标记法断趾标记法4 4、号牌法：号牌法：用金属制的牌号固定于实验动物的耳上5 5、笼子编号法：笼子编号法：不在动物身上做标记而把装动物的不在动物身上做标记而把装动物的笼子进行编号，也叫替代法笼子进行编号，也叫替代法6 6、烙印法：烙印法：大中型动物；大中型动物；用烙印钳或刺针将号码刺在或烙印在动物无体毛或明显部位，如耳、面、鼻部及四肢等，操作时要注意防止感染。（四）动物被毛的去除方法（四）动物被毛的去除方法1.1.剪毛法：用弯头剪逆毛方向剪；剪毛法：用弯头剪逆毛方向剪；适用于适用于各种实验动物各种实验动物2.2.拔毛法：常用于兔的耳缘静脉注射拔毛法：常用于兔的耳缘静脉注射3.3.剃毛法：剃须刀、手术刀；剃毛法：剃须刀、手术刀；适用于大动适用于大动物物4.4.脱毛法：脱毛剂脱毛法：脱毛剂常用脱毛剂配方常用脱毛剂配方配方配方1 1：硫化钠：硫化钠8g8g溶于溶于100mL100mL水中。水中。配方配方2 2：硫化钠：肥皂粉：淀粉：硫化钠：肥皂粉：淀粉=3=3：1 1：7 7，再加水调成糊状。，再加水调成糊状。配方配方3 3：硫化钠：硫化钠10g10g和生石灰和生石灰15g15g溶于溶于100mL100mL水中。水中。配方配方1 1和和2 2：适用于家兔和啮齿类动物的脱毛，配方适用于家兔和啮齿类动物的脱毛，配方3 3适合给犬脱毛。适合给犬脱毛。59（五）给药方法（五）给药方法经口给药法经口给药法注射法注射法其它途径给药方法其它途径给药方法呼吸道给药呼吸道给药皮肤给药皮肤给药脊髓腔内给药脊髓腔内给药脑内给药脑内给药直肠内给药直肠内给药关节腔内给药关节腔内给药 1 1、经口给药法经口给药法60（五）给药方法（五）给药方法拌入饲料、饮水中自由摄取拌入饲料、饮水中自由摄取 优点：省人力优点：省人力 缺点：因个体差异，摄入缺点：因个体差异，摄入量不等量不等灌胃灌胃 优点：能准确定量优点：能准确定量 缺点：给动物造成一定的缺点：给动物造成一定的痛苦，需熟练掌握技术痛苦，需熟练掌握技术大小鼠灌胃注意点大小鼠灌胃注意点 从嘴角处插入，到达咽部后改变灌胃针的从嘴角处插入，到达咽部后改变灌胃针的方向，使其与食管的走向一致，然后顺利方向，使其与食管的走向一致，然后顺利插入。插入。小鼠灌胃针长小鼠灌胃针长4 45cm5cm，直径直径1 mm1 mm大大 鼠鼠 灌灌 胃胃 针针 长长 6 6 8cm 8cm，直直 径径1.2mm1.2mm常用的灌胃量：小鼠为常用的灌胃量：小鼠为0.20.2 1ml1ml，大鼠大鼠1 14ml4ml，豚鼠为，豚鼠为1 15ml5ml。兔灌胃法兔灌胃法 操作者用左手拇指和操作者用左手拇指和中指挤压家兔两颊，将下中指挤压家兔两颊，将下颌挤开使兔被动张口，右颌挤开使兔被动张口，右手将开口器从一侧口角插手将开口器从一侧口角插入口腔并固定，用泡在水入口腔并固定，用泡在水中的中的1414号细导尿管，经开号细导尿管，经开口器的孔插入，向前推进口器的孔插入，向前推进约约15cm15cm，可达胃内，确认，可达胃内，确认泡在水中的导管另一端没泡在水中的导管另一端没有冒气泡，说明没有误入有冒气泡，说明没有误入气管，即可注入药液。灌气管，即可注入药液。灌胃量为胃量为每只每次每只每次80-150mL80-150mL。各种动物一次灌胃能耐受的最大容积各种动物一次灌胃能耐受的最大容积动物种类动物种类体重体重（g g）最大容积最大容积（mlml）动物种类动物种类体重（体重（g g）最大容积最大容积（mlml）小鼠小鼠20-2420-240.50.5豚鼠豚鼠250-300250-3004-54-525-3025-300.80.83003006.06.030301.01.0兔兔2kg-2.4kg2kg-2.4kg100100大鼠大鼠100-199100-1993.03.02.5kg-2.5kg-3.5kg3.5kg150150200-249200-2494-54-53.5kg3.5kg200200250-300250-3006.06.0猫猫2.5kg-2.5kg-3.0kg3.0kg50-8050-803003008.08.03.0kg3.0kg100-150100-150犬犬10kg-15kg10kg-15kg200-500200-5002 2、注射法注射法 包括：皮下注射、腹腔注射、静脉注射、包括：皮下注射、腹腔注射、静脉注射、肌肉注射以及皮内注射、脑内注射等。肌肉注射以及皮内注射、脑内注射等。药物吸收速度：药物吸收速度：静脉注射腹腔注射肌肉注射静脉注射腹腔注射肌肉注射 皮下皮下注射注射 脑内注射常用于病毒学接种脑内注射常用于病毒学接种2.1 2.1 皮内注射皮内注射(i.d)(i.d)将药液注入到皮肤的表皮与真皮之间。用细针头将药液注入到皮肤的表皮与真皮之间。用细针头紧贴皮肤表层刺入皮内，然后再向上挑起并稍刺紧贴皮肤表层刺入皮内，然后再向上挑起并稍刺入。常用于观察皮肤血管通透性变化或反应，如入。常用于观察皮肤血管通透性变化或反应，如过敏试验过敏试验小鼠皮内注射662.2 2.2 皮下注射皮下注射(s.c)(s.c)：0.01ml0.01ml0.03ml0.03mlg g体重体重 一般取颈背、腋下、侧腹或者后腿皮下。注射时，一只手轻轻提起动物皮肤，另一只手将注射针刺入皮下，若针头容易摆动则证明针头已在皮下，推送药物。小鼠皮下注射67小鼠的腹腔注射小鼠的腹腔注射从下腹部（腹股沟位置）朝头方向几乎平行的刺入从下腹部（腹股沟位置）朝头方向几乎平行的刺入皮肤，再把针竖起，使注射针与皮肤成皮肤，再把针竖起，使注射针与皮肤成4545角斜刺角斜刺入腹肌，进入腹腔内。入腹肌，进入腹腔内。注射量：注射量：0.010.010.02m10.02m1g g体重。体重。682.3 2.3 腹腔注射（腹腔注射（i.pi.p）2.4 2.4 肌肉注射肌肉注射(i.m)(i.m)：注射量：注射量：0.01m10.01m1g g体重。体重。后后肢肢大大腿腿外外侧侧肌肌肉肉丰丰富富处处呈呈6060度度角角迅迅速速刺刺入入后注入药液后注入药液702.5 2.5 静脉注射静脉注射(i.v)(i.v)大小鼠尾静脉、兔耳缘静脉、犬后肢小隐静脉、大鼠、沙鼠、豚鼠后肢浅背侧足中静脉注射；注射时血管和针头平行，待有回血后表明针头已经进入静脉，缓慢注射药液。注射量：注射量：0.05m10.05m10.025 0.025 m1m1g g体重。体重。71几种动物不同给药途径的常用注射量（几种动物不同给药途径的常用注射量（mlml）注射途径注射途径小鼠小鼠大鼠大鼠豚鼠豚鼠兔兔狗狗腹腔腹腔0.20.21.01.01 13 32 25 55 510105 51515肌肉肌肉0.10.10.20.20.20.20.50.50.20.20.50.50.50.51 12 25 5静脉静脉0.20.20.50.51 12 21 15 53 310105 51515皮下皮下0.10.10.50.50.50.51 10.50.52 21 13 33 310103.3.其他途径其他途径3.1.3.1.呼吸道给药：呼吸道给药：雾化器雾化：药物雾化后通入密闭盒中，动雾化器雾化：药物雾化后通入密闭盒中，动物通过上呼吸道粘膜物通过上呼吸道粘膜挥发性：乙醚吸入麻醉挥发性：乙醚吸入麻醉滴鼻：动物先行全身麻醉，药物作用于鼻滴鼻：动物先行全身麻醉，药物作用于鼻 腔粘膜腔粘膜3.2 3.2 皮肤给药皮肤给药 为了鉴定药物或毒物经皮肤的吸收作用、为了鉴定药物或毒物经皮肤的吸收作用、局部作用、致敏作用和光感作用等，均需局部作用、致敏作用和光感作用等，均需采用经皮肤给药方法。如家兔和豚鼠常采采用经皮肤给药方法。如家兔和豚鼠常采用脊柱两侧背部一定面积的皮肤脱毛后，用脊柱两侧背部一定面积的皮肤脱毛后，将一定药液涂在皮肤上，药液经皮肤吸收。将一定药液涂在皮肤上，药液经皮肤吸收。大小鼠通常采用大小鼠通常采用浸尾方式，经尾皮吸收给浸尾方式，经尾皮吸收给药，用以定性地判定药物或毒物经皮肤的药，用以定性地判定药物或毒物经皮肤的吸收作用。吸收作用。3.3 3.3 脊髓腔内给药脊髓腔内给药 此法主要用于椎管麻醉或抽取脑脊液此法主要用于椎管麻醉或抽取脑脊液 家家兔兔椎椎管管内内注注射射方方法法：将将家家兔兔作作自自然然俯俯卧卧式式，尽尽量量使使其其尾尾向向腹腹侧侧屈屈曲曲，用用粗粗剪剪将将第第七七腰腰椎椎周周围围背背毛毛剪剪去去，消消毒毒，在在兔兔背背部部髌髌骨骨脊脊连连线线之之中中点点稍稍下下方方摸摸动动第第七七腰腰椎椎间间隙隙（第第七七腰腰椎椎与与第第一一骶骶骨骨椎椎之之间间），插插入入腰腰椎椎穿穿刺刺针针头头。当当针针到到达达椎椎管管内内时时（珠珠网网膜膜下下腔腔），可可见见到到兔兔的的后后肢肢跳跳动动，即即证证明明穿穿刺刺针针头头已已进进入入椎椎管管。这这时时不不要要再再向向下下刺刺，以以免免费费软软件件 损损伤伤脊脊髓髓。固固定定好针头，即可将药物注入。好针头，即可将药物注入。3.4 3.4 小脑延髓池给药小脑延髓池给药此种给药都是在动物麻醉情况下进行的。此种给药都是在动物麻醉情况下进行的。常用于大动物如狗等。常用于大动物如狗等。狗麻醉后，狗头尽量向胸部屈曲，用左手狗麻醉后，狗头尽量向胸部屈曲，用左手摸到其摸到其第一颈椎上方的凹陷（枕骨大孔）第一颈椎上方的凹陷（枕骨大孔）右手取右手取7 7号钝针头（将针头尖端磨钝），由号钝针头（将针头尖端磨钝），由此凹陷的正中线上，顺平行狗的方向，小此凹陷的正中线上，顺平行狗的方向，小心地刺入心地刺入小脑延髓池小脑延髓池。当针头正确刺入小。当针头正确刺入小脑延髓池时，注射者会感到针头再向前穿脑延髓池时，注射者会感到针头再向前穿时无阻力，同时可以听到很轻的时无阻力，同时可以听到很轻的“咔嚓咔嚓”一声，即表示针头已穿过硬脑膜进入小脑一声，即表示针头已穿过硬脑膜进入小脑延髓池，而且可抽出清亮的脑脊液，注射延髓池，而且可抽出清亮的脑脊液，注射药物前，先抽出一些脑脊液，药物前，先抽出一些脑脊液，抽取量根据抽取量根据实验需要注入多少药液决定，即注入多少实验需要注入多少药液决定，即注入多少抽取多少，抽取多少，以保持原来脑脊髓腔里的压力。以保持原来脑脊髓腔里的压力。3.5 3.5 脑内给药脑内给药 此法常用于此法常用于微生物学动物实验微生物学动物实验，将病原体，将病原体等接种于被检动物脑内，然后观察接种后等接种于被检动物脑内，然后观察接种后的各种变化。的各种变化。小鼠脑内给药时，选套有塑料管、针尖露小鼠脑内给药时，选套有塑料管、针尖露出出2mm2mm深的深的5(1/2)5(1/2)针头，由鼠正中额部刺入针头，由鼠正中额部刺入脑内，注入药物或接种物。脑内，注入药物或接种物。给豚鼠、兔、狗等进行脑内注射时，须先给豚鼠、兔、狗等进行脑内注射时，须先用穿颅钢针穿透颅骨，再用注射器针头刺用穿颅钢针穿透颅骨，再用注射器针头刺入脑部，剃去头顶的被毛，左手将头皮绷入脑部，剃去头顶的被毛，左手将头皮绷紧，消毒后，用穿颅钢针自头顶正中稍偏紧，消毒后，用穿颅钢针自头顶正中稍偏一侧部位锥穿头骨，即换以左手固定穿颅一侧部位锥穿头骨，即换以左手固定穿颅钢针，右手持注射器，使针头沿穿颅钢针钢针，右手持注射器，使针头沿穿颅钢针刺入，慢慢拔出穿颅钢针，即刻将针头刺刺入，慢慢拔出穿颅钢针，即刻将针头刺入约入约101020mm20mm，即可徐徐注入被检物。，即可徐徐注入被检物。注注射速度一定要慢，避免引起颅内压急骤升射速度一定要慢，避免引起颅内压急骤升高高小鼠脑内注射小鼠脑内注射小指夹鼠尾，拇指和食指置小鼠头两侧固定，中指和无名指压住鼠身，在注射处消毒后，右手持注射器，以食指固定针芯，在小鼠两眼连线中间后3-4mm，左右1mm处垂直刺入针头。脑注射前的固定注射器和消毒棉注射823.6 3.6 直肠内给药直肠内给药此种给药方法常用于此种给药方法常用于动物麻醉动物麻醉。家家兔兔直直肠肠内内给给药药时时，取取灌灌肠肠用用的的胶胶皮皮管管或或用用1414号号导导尿尿管管代代替替。在在胶胶皮皮管管或或导导尿尿管头上涂上凡士林。管头上涂上凡士林。由由一一人人固固定定兔兔，并并住住兔兔尾尾，露露出出肛肛门门，并用右手轻握后肢；并用右手轻握后肢；实实验验者者将将橡橡皮皮管管插插入入家家兔兔肛肛门门内内，深深度度约约7 79cm9cm。橡橡皮皮管管插插好好后后，将将注注射射器器与与橡皮管套紧，即可灌注药液。橡皮管套紧，即可灌注药液。3.7 3.7 关节腔内给药关节腔内给药此种方法常用于关节炎的动物模型复制此种方法常用于关节炎的动物模型复制 兔兔给给药药时时，将将兔兔仰仰卧卧固固定定于于兔兔固固定定台台上上，剪剪去去关关节节部部被被毛毛，用用碘碘酒酒或或酒酒精精消消毒毒，然然后后用用手手从从下下方方和和两两旁旁将将关关节节固固定定，把把皮皮肤肤稍稍移移向向一一侧侧，在在膑膑韧韧带带附附着着点点处处上上方方约约0.50.5厘厘米米处处进进针针。针针头头从从上上前前方方向向下下后后方方倾倾斜斜刺刺进进，直直至至针针头头遇遇阻阻力力变变小小，然然后后针针头头稍稍后后退退，以