生物化学水杨酸比色定糖法.ppt

单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实验一,3,5,二硝基水杨酸比色定糖法,目的和要求,1.,掌握,3,5,二硝基水杨酸比色法定糖的原理及方法。,2.用3,5,二硝基水杨酸定糖法测定样品中的总糖及还原糖。,实验原理,3,5-,二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和反应液的颜色强度呈现比例关系，利用比色法可测知样品的含糖量。,该方法是半微量测糖法，操作简便，快速，杂质干扰较小。,实验步骤,一、葡萄糖标准曲线的绘制,取,9,支大试管，分别按下表顺序加入各种试剂：,将上述各管溶液混匀后，用721型分光光度计（,520,nm）,进行比色测定，用空白管溶液调零点，记录光密度值。以葡萄糖浓度为横坐标，光密度值为纵坐标绘制出标准曲线。,二、样品中总糖和还原糖含量的测定,1.,样品中还原糖的提取：准确称,取1,g,样品，放入50或100,ml,烧杯内，加入,85,乙醇30,ml，,混匀，在,50,恒温水浴中保温30,min，,过滤，滤渣再用,85,乙醇提取二次。将滤液合并，蒸去乙醇，加少量水，移入50,ml,容量瓶中，用水定容，备用。,2.,样品中总糖的水解及提取：准确称取样品,1,g，,放入大试管中，加入,1,ml 6mol/L,盐酸和,15,ml,蒸馏水。混匀，在沸水浴中加热半小时后，用碘化钾碘溶液检查水解程度，若已水解完全，则不呈现蓝色。冷却后加入酚酞指示剂,1,滴。以,10,氢氧化钠中和至溶液呈微红色。过滤并定容至,100,ml。,再精确吸取上述溶液,10,ml，,放入,100,ml,容量瓶中，定容，备用。,3.,样品中含糖量的测定：取,7,支大试管，分别按下表加入各种试剂：,将各管混匀后，按制作标准曲线时同样的操作测定各管的光密度，在标准曲线上查出相应的还原糖含量，按下述公式推算出山芋粉内还原糖与总糖的百分含量。,思考题,1.,比色测定的操作要点是什么？方法的基本原理是什么？,2.,721型分光光度计的原理及使用时的注意事项是什么？,3.,比色测定时为什么要设计空白管？,4.,总糖包括哪些化合物？,