课题3-分解纤维素的微生物的分离-(4).pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,人教版选修,1,专题,2,微生物的培养与应用,课题,3,分解纤维素的微生物的分离,你认为,什么是,纤维素？,纤维素,纤维素酶,组成,分布,作用,由,葡萄糖,相连而成的,高分子,化合物,植物的,根、茎、叶,等器官，木材、作物秸秆等,与果胶,构成植物的细胞壁,，,用于纺织业、造纸业,，食品中的,膳食纤维具有通便清扫的作用,一,.,纤维素和纤维素酶,那么，我们如何将纤维素分解为生物乙醇呢？,纤维素生物燃料：,最有希望替代石油能源,科学家正致力于研究，怎样将农业废弃物、木材及生长更为迅速的草本植物，,转化为种类繁多的生物燃料，,比如：生物乙醇,。,能分解纤维素的微生物，有各种细菌、真菌和少数放线菌。,纤维素,纤维素酶,组成,分布,作用,C,1,酶、,C,X,酶,葡萄糖苷酶,纤维二糖,葡萄糖,纤维素,由,葡萄糖,相连而成的,高分子,化合物,由,C,1,酶、,C,X,酶,和,葡萄糖苷酶,组成的复合酶,植物的,根、茎、叶,等器官，木材、作物秸秆等,某些微生物,与果胶,构成植物的细胞壁,，,用于纺织业、造纸业,，食品中的,膳食纤维具有通便清扫的作用,纤维素酶能水解纤维素,，,一,.,纤维素和纤维素酶,取二支,20mL,的试管,小实验：纤维素酶分解纤维素的实验,各加入一张滤纸条,分别加入,pH4.8,，物质量为,0.1mol/L,的醋酸醋酸钠缓冲液,11ml,和,10ml,甲 乙,在乙试管中加入,1mL,纤维素酶,两支试管固定在锥形瓶中，放在,140r/min,的摇床上振荡,1h,结果：乙试管的滤纸条消失,讨论,1,：乙试管的滤纸条为什么会消失？甲试管的作用是什么？,讨论,2,：,如何验证纤维素酶分解纤维素产生的是葡萄糖？,二,.,纤维素分解菌的筛选,1.,纤维素分解菌的筛选方法,2.,纤维素分解菌的筛选方法的原理,刚果红染色法,：,这种方法能够通过颜色反应直接对微生物进行筛选,。,即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。,三、实验操作,土壤取样,选择培养,梯度稀释,将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上,挑选产生透明圈的菌落,三、实验操作,土壤取样,选择培养,操作方法：,将土样加入装有,30ml,选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下振荡培养,1,2,天，直至培养液变浑浊。也可重复选择培养,三、实验操作,土壤取样,选择培养,梯度稀释,梯度稀释,按照课题,1,的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释，稀释最大倍数到,10,6,三、实验操作,土壤取样,选择培养,梯度稀释,将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上,将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上,1,、制备培养基,:,参照旁栏中的比例,2,、涂布平板：将稀释度为,10,4,10,6,的菌悬液各取,0.1ml,涂布在培养基上，,30,倒置培养,培养基组成分,提供的主要营养物质,CMC-Na 510g,碳源,酵母膏,1g,碳源、氮源、生长因子,KH,2,PO,4,0.25g,无机盐,土豆汁,100mL,碳源,琼脂,15g,凝固剂,上述物质溶解后，加蒸馏水定容至,1000mL,水,鉴别纤维素分解菌的培养基,(,水溶性羧甲基纤维素钠,),三、实验操作,土壤取样,选择培养,梯度稀释,将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上,挑选产生透明圈的菌落,挑选产生透明圈的菌落,参照课本,刚果红染色法,，,挑取产生明显的透明圈的菌落，,一般即为分解纤维素的菌落。,刚果红染色法,方法一：,先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应,方法二：,在倒平板时就加入刚果红,方法一加入中,NaCl,溶液的作用？,漂洗作用,，洗去与纤维素结合不牢的刚果红，以免出现的透明圈不够清晰。,思考2,思考1,这两种方法各有哪些优点与不足？,染色法,优点,缺点,方法一,方法二,颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用,1、操作繁琐,2、刚果红会使菌落之间发生混杂,操作简便，不存在菌落混杂问题,1.,产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈,2.,有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。,四、课题延伸,本课题对分解纤维素的微生物进行了初步的筛选，但是这只是分离纯化的第一步。为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶的实验，纤维素酶的测定方法一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定。,分解,纤维素的微生物的分离,纤维素酶,种类、作用,刚果红染色,筛选原理,实验设计,土壤取样,选择培养,涂布培养,纯化培养,前置染色法,后置染色法,富含纤维素土壤,增大分解菌含量,染色鉴别,分离出分解菌,课堂总结,下列生物能分解纤维素的是（）,人 兔 牛,蘑菇 纤维杆菌,A,、,B,、,C,、,D,、,C,练一练：,练一练：,2,、下列关于纤维素酶的说法，错误的是,A.,纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种,B.,纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖,C.,纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁,D.,葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖,D,3,、利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是,A.,刚果红能与纤维素形成红色复合物,B.,刚果红能与纤维二糖形成红色复合物,C.,刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物,D.,若培养基上产生了透明圈，则说明已筛选出了纤维素分解菌,B,4,、在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌，符合下列哪一生物学观点？,A,、生物结构与功能相适应的观点,B,、生物结构与功能整体性观点,C,、生物与环境相适应的观点,D,、生物发展进化的观点,c,5,、从土壤中分离获得某种微生物的步骤是,土壤取样梯度稀释选择培养 菌悬液涂布平板挑选出单个菌落,A.B.,C.D.,B,6,、有关选择培养正确的叙述是,A.,可以增加纤维素分解菌的浓度,B.,可以减少纤维素分解菌的浓度,C.,所用培养基是固体培养基,D.,所用培养基是平板培养基,A,