酶活性的影响因素.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,酶活性的影响因素,Vane,知识背景,pH,、温度、紫外线、重金属盐、抑制剂、激活剂等通过影响酶的活性来影响酶促反应的速率；酶的浓度、底物的浓度等不会影响酶活性，但可以影响酶促反应的速率。,纳氏试剂（,Nessler,）是指一种利用红外可见分光光度法原理用于测定空气中、水体中氨氮含量的试剂。,碘离子和汞离子在强碱性条件下，会与氨反应生成红棕色胶态化合物，此颜色在波长,420nm,左右会有强烈的吸收。而生成的这类红棕色胶态化合物的量会与其溶液的吸收值成正比，可用测试反应液的吸收值而测定氨氮的含量。,实验原理：,尿素在酸、碱、酶作用下（酸、碱需加热）能水解成氨和二氧化碳,新鲜大豆中含有较高活性的尿素酶，可以水解尿素生成,NH3,CO(NH2)2+H2O-,2NH3+CO2,尿素养在尿素酶作用下，在中性或酸性环境下生成碳酸胺，在,NaOH,环境下生成,Na2CO3,和,NH3,、,NH3,与纳氏试剂作用，生成棕黄色碘化双汞胺,尿素酶,NaOH,CO(NH2)2+H2O -,(NH4)2CO3-,NH3,NH3+,纳氏试剂,(HgI2.2KI)-,NH2.Hg2I3(,棕黄色,),实验材料：,器材：,控温水浴锅（每个实验室,3,个），制冰机，电磁灶，不锈钢锅，白瓷板，试管、滴管、移液管（,1-2ml,）,试剂：蒸馏水，,1%,淀粉液，,1%,蔗糖液，,0.1%,尿素液，大豆尿素酶溶液，,0.1%CuSO4,，,0.1%HgCl2,，,0.1%NaCl,，,1M,NaOH,，,0.5M H2SO4,，纳氏试剂，班氏试剂，各种,pH,缓冲液：,5.0,；,6.8,；,8.0,酶活性的影响因素假设,1,、酶的活性受,pH,的影响,2,、酶的活性受底物特异性的影响,3,、酶的活性受温度的影响,4,、酶的活性受重金属离子的影响,下面就让我们进入,这次的酶的探索之旅吧,1,、酶的活性受,pH,的影响,步骤,1,、向四支,10ml,试管，分别标号,1,，,2,，,3,，,4,2,、将,1%,尿素液,3ml,分别倒入四支试管中,3,、向前三支支试管中分别倒入,1ml,的,pH,为,5.0,，,6.8,，,8.0,的缓冲液，四号试管加入,1ml,的蒸馏水,4,、向四支试管中加入等量的大豆尿素酶溶液五滴，轻摇后静置,3,分钟,5,、向四支试管中加入等量的纳氏试剂,2ml,，摇匀。,6,、观察并记录实验现象,实验记录,项目,底物（,/ml,）,加入的,pH,和蒸馏水（,/ml,）,纳氏试剂（,/ml,）,实验现象,试管,1,试管,2,试管,3,试管,4,2,、酶的活性受底物的特异性的影响,步骤,1,、向四支,10ml,试管，分别标号,1,，,2,，,3,，,4,2,、向四支试管中分别加入,3ml,的蒸馏水，,1%,淀粉液，,1%,蔗糖液，,0.1%,尿素液,3,、向四支试管中加入等量的大豆尿素酶溶液五滴，轻摇后静置,3,分钟,4,、向四支试管中加入等量的纳氏试剂,2ml,，摇匀。,5,、观察并记录实验现象,实验记录,项目,底物（,/ml,）,大豆尿素酶溶液,（,/ml,）,纳氏试剂（,/ml,）,实验现象,试管,1,试管,2,试管,3,试管,4,3,、酶的活性受温度的影响,步骤,1,、向四支,10ml,试管，分别标号,1,，,2,，,3,，,4,2,、向四支试管中分别加入,3ml0.1%,尿素液,3,、将四支试管分别置于,0C,，,30C,，,100C,，室温的水浴中预温,10,分钟,3,、向四支试管中加入等量的大豆尿素酶溶液五滴，轻摇后静置,3,分钟,4,、向四支试管中加入等量的纳氏试剂,2ml,，摇匀。,5,、观察并记录实验现象,实验记录,项目,底物（,/ml,）,温度（,/,C,）,大豆尿素酶溶液,（,/ml,）,纳氏试剂（,/ml,）,实验现象,试管,1,试管,2,试管,3,试管,4,4,、酶的活性受重金属离子的影响,步骤,1,、向六支,10ml,试管，分别标号,1,，,2,，,3,，,4,，,5,，,6,2,、向六支试管中分别加入,3ml0.1%,尿素液,3,、将六支试管分别加入,0.1%CuSO4 0.1%HgCl2 0.1%NaCl 1M,NaOH,0.5M H2SO4,，蒸馏水各,2ml,3,、向六支试管中加入等量的大豆尿素酶溶液五滴，轻摇后静置,3,分钟,4,、向六支试管中加入等量的纳氏试剂,2ml,，摇匀。,5,、观察并记录实验现象,实验记录,项目,底物（,/ml,）,加入的重金属离子和蒸馏水（,/ml,）,大豆尿素酶溶液,（,/ml,）,纳氏试剂（,/ml,）,实验现象,试管,1,试管,2,试管,3,试管,4,试管,5,试管,6,谢谢,