第六章--水产品中农药、兽药残留的检测课件.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第六章,水产品中农药、兽药残留的检验,1.1,农药、农药残留,农药是指用于预防、消灭或者控制危害农业、林业的病、虫、草和其他有害生物以及有目的地调节植物、昆虫生长的化学合成或来源于食物、其他天然物质的一种物质或者几种物质的混合物及其制剂。,按用途可将农药分为杀（昆）虫剂、杀（真）菌剂、除草剂、杀蜻剂、杀鼠剂和植物生长调节剂等类型。其中最多的是杀虫剂、杀菌剂和除草剂三大类。,按化学组成及结构可将农药分为有机磷、氨基甲酸酯、拟除虫菊酯、有机氯、有机砷、有机汞等类型。,1.2,兽药、兽药残留,兽药,是指用于预防、治疗、诊断动物疾病或者有目的地调节动物生理机能的物质（含药物饲料添加剂），主要包括：血清制品、疫苗、诊断制品、微生态制品、中药材、中成药、化学药品、抗生素、生化药品、放射性药品及外用杀虫剂、消毒剂等。,1.3,水产品中农药和兽药污染的来源和途径,导致水产品药物残留的主要原因如下：,（,1,）使用未经批准的药物或禁止使用的药物,（,2,）不正确使用或滥用药物,（,3,）未能遵守有关药物休药期,（,4,）水产品及其制品加工时受到药物污染或储藏、运输方法不当造成药残,（,5,）生态、生产环境的污染,2.1,有机氯农药的检测方法,有机氯农药（,OCPs,）,是具有杀虫活性的氯代烃的总称，其代表性的品种包括六六六、,DDT,及其类似物和环戊二烯衍生物，它们均为神经毒性物质。,由于它们在物理化学性质上均具有较高的化学稳定性和极低的水溶性、在正常环境中不易分解、有很强的亲脂性、易通过食物链在生物体脂肪中富集和积累，可导致残留污染严重、害虫的抗性增加。,水产品中有机氯农药残留量的,测定原理,试样经提取、净化、浓缩、定容，用毛细管柱气相色谱分离，电子捕获检测器检测，以保留时间定性，外标法定量。出峰顺序：,-HCH,、,-HCH,、,-HCH,、五氯硝基苯、,-HCH,、七氯、艾氏剂、除蜻酯、环氧七氯、杀瞒酯、狄氏剂、,pp-DDE,、,pp-DDD,、,op-DDT,、,pp-DDT,、胺菊酯、氯菊酯、氯氰菊酯、,-,氰戊菊酯、澳氰菊酯。,标准溶液的配制,分别准确称取所需的标准品，用少量苯溶解，再用正己烷稀释成一定浓度的储备液。根据各农药在仪器上的响应情况，以正己烷配制混合标准应用液。,测定方法,（,1,）提取,称取试样,20g,（精确到,0.0lg,）于,100mL,具塞三角瓶中，加水,6mL,丙酮,40mL,振摇,30min,，加氯化钠,6g,，充分摇匀，再加,30mL,石油醚，振摇,30min,。取,35 mL,上清液，经无水硫酸钠滤于旋转蒸发瓶中，浓缩至约,1mL,，加,2mL,乙酸乙酯环己烷（,1,1,）溶液再浓缩，如此重复,3,次，浓缩至约,1mL,。,结果计算,X,试样中各农药的含量，单位为,mg/kg;,m,1,被测样液中各农药的含量，单位为,ng;,m,试样质量，单位为,g;,V,1,试样进样体积，单位为,L,；,V,2,试样最后定容体积，单位为,mL,。,标准溶液的配制,准确称取各有机磷农药标准品，用乙酸乙酯溶解、定容成一定浓度的储备液。测定前，用乙酸乙酯稀释配制混合标准应用液。,色谱条件,色谱柱：,涂以,SE-54 0.25m,30m,0.32mm,（内径）石英弹性毛细管柱。,程序升温：,60,维持,1 min,：,40/min,升到,110,；,5/min,升到,235,；,40/min,升到,265,进样口温度：,270,。,检测器：,火焰光度检测器（,FPD-P,）。,载气流速：,氮气（,N,2,）：,1 mL/min;,尾吹：,50mL/min,；氢气：,50mL/min,；空气：,500mL/min,测定方法,提取,称取试样,20g,（精确到,0.01g,）于,100mL,具塞三角瓶中，加水,6mL,，丙酮,40mL,，振摇,30mi,云，加氯化钠,6g,，充分摇匀，再加,30mL,石油醚，振摇,30min,。取,35 mL,上清液，经无水硫酸钠滤于旋转蒸发瓶中，浓缩至约,1mL,，加,2mL,乙酸乙酯,-,环己烷（,1,1,）溶液再浓缩，如此重复,3,次，浓缩至约,1mL,。,净化,将此浓缩液经凝胶柱以乙酸乙酯,-,环己烷（,1,1,）溶液洗脱，弃去,0mL,35mL,流分，收集,35mL,70mL,流分。将其旋转蒸发浓缩至约,1mL,，再经凝胶柱净化收集,35 mL,70mL,流分，蒸发浓缩，用氮气吹除溶剂，以石油醚定容至,1mL,，留待,GC,分析。,水产品中多氯联苯的测定,多氯联苯（,PCBs,），又称氯化联苯，是由一些氯置换联苯分子中的氢原子而形成的化合物，在工业上得到广泛应用。,多氯联苯可以通过水体中生物食物链的富集作用，其在鱼类体内浓度累积到几万甚至几十万倍。多氯苯同时损害人类的免疫系统并被列为可能的致癌物质，其毒性主要表现为：影响皮肤、神经、肝脏，破坏钙的代谢，导致骨骼、牙齿的损害，并有慢性致癌和致遗传变异等的可能性。,（,3,）超声波萃取法,该方法是分析固体基质最简单的技术之一，其原理是在室温下用适当的有机溶剂和样品混合，超声萃取待测物质。萃取效率除与溶剂的极性有关外，还受萃取时间的影响。该法操作简单。,（,4,）酸碱处理萃取法,有实验表明，在萃取混合液中加入有反应性的酸、碱或经酸碱处理过后的硅胶可明显地改善萃取效果，提高萃取回收率。,Liang,等曾在液,-,液萃取中加入,HCI,，研究了不同酸性对,PCDDs/PCDFs/PCBs,回收率的影响，结果表明，前两者在碱性条件下的回收率高，而后者则在酸性条件下的回收率高。,（,5,）蒸汽相萃取法（,Bleidner,法）,Schuphan,等利用“,Bleidner”,蒸汽相萃取技术分析湖泊沉积物中的,PCBs,和有机氯沉淀物，与传统的索氏抽提法相比较，结果表明，该法无需干燥和一般的清洗步骤，因而可大大缩短分析时间。但随着,PCBs,氯化度的增高，使用该法所得的回收率明显降低（由,PCB28,的,98%,下降到,PCB180,的,43%,）。,（,6),索氏抽提法,在分析非极性和中等极性痕量有机物方面得到广泛应用，在分析,PCBs,方面的报道也有很多，如沉积物、土壤和动植物组织等。该法的要点是溶剂的极性应与溶质的溶解度相符，并且萃取前要用溶剂将基质完全浸湿，其不足之处在于干燥过程耗时长，另外萃取时硫也易从基质中萃取出来，影响检测器的测定，延长分析时间。,所用的检测器主要有以下几类：,电子俘获检测器（,ECD,）,ECD,是分析痕量电负性有机化合物最有效的检测器，具有选择性较好、灵敏度高、检测限低、易于操作和维修等特点。,质谱检测器（,MS,）,MS,具有很强的结构鉴定能力，与,GC,结合，充分利用各自的优点可以实现高效、快速的分离鉴定。,MS,法是一种先将分子离解成不同带电荷的离子，然后对离子质量的强度进行检测，从而获得分子结构信息的方法。,薄层层析法（,TLC,）,高效液相色谱法（,HPLC,）,HPLC,应用于,PCBs,的分析相对较少，且主要是作为,GC,定性分析前以除去样品中的废物和油污的一种净化方法。,HPLC,的,优点,是分析速度快、方便，可用于日常分析，,不足,是其常用的,UV,检测器灵敏度低、选择性差。,气相色谱法测定水产品中多氯联苯残留量,利用消化法破坏水产品中的蛋白质和脂肪等杂质，用石油醚提取、浓硫酸磺化净化，用毛细管气相色谱法测定。,本方法简便、快速，结果准确，适用于大批量样品分析。,测定多氯联苯中有代表性的六种：,PCB28-2,4,4,-Trchlorbiphenyl,；,PCB52-2,2,5,5-Tetrachlorbiphenyl,；,PCB101-2,2,4,5,5,-Pentachlorbiphenyl,；,PCB138-2,2,3,4,4,5,-Hexachlorbiphenyl,；,PCB153-2,2,4,4,5,5,-,Hexachlorbiphenyl,；,PCB 180-2,2,3,4,4,5,5,-,Heptachlorhiplienyl,。,原理,试样经高氯酸与冰乙酸的混合溶液消化，破坏样品中蛋白质和脂肪等基体物质，进行初步净化，用石油醚提取多氯联苯残留物，再用硫酸进一步净化，浓缩，用具有电子捕获检测器的气相色谱仪测定，外标法定量。,色谱条件,(1),色谱柱：,DB-1701,石英毛细管柱（或与之相当的色谱柱），,30m,0.32mm,025m,(2),载气：,氮气，线速度,24cm/s,(3),进样口：,温度,235,，无分流方式进样。,(4),温度程序：,初始柱温,100,，维持,1min,；,59 /min,升至,200,，维持,l0min,；,5/min,升至,240,，维持,15min,，确保所有的样品已经流出,(5),检测器：,温度,300,，补充气流量,60mL,(6),进样量：,1L,(7),检测器：,63,Ni,电子捕获检测器。,测定步骤,（,1,）样品预处理,鱼去鳞、去皮沿背脊取肌肉；虾去头、去壳、去附肢，取可食肌肉部分；蟹、甲鱼等取可食肌肉部分；样品切为不大于,0.5cm,0.5cm,0.5cm,的小块后混匀，放置冰箱备用。,（,2,）提取,将样品解冻，匀浆机匀浆后，称取样品,5g,（精确到,0.001 g),，置于,100mL,具塞三角烧瓶中，加入,50mL,高氯酸与冰乙酸的混合溶液（体积比,1,1,），于,70,恒温水浴中振荡约,2h,，至样品消化完全。将溶液转移至,250mL,分液漏斗中，用,l0mL,石油醚洗涤原烧瓶，洗涤液合并于分液漏斗中，再向分液漏斗中加入,30mL,石油醚，振摇提取多氯联苯残留物，静置分层，将上层石油醚提取液转移于另一分液漏斗中；再用,20mL,石油醚重复提取,2,次，将上层石油醚提取液合并于同一分液漏斗中。,（,3,）提取液的净化,向分液漏斗中加入,l0mL,浓硫酸，振荡,30s,，静置使溶液分层，弃去下层酸液。重复上述操作,3,5,次，直至下层酸液变为无色。用,200mL,硫酸钠溶液（,20g/L,）分,2,次洗涤，石油醚层过无水硫酸钠柱，收集于,100mL,鸡心瓶中，于,40,水浴中减压旋转蒸发至近干，再通入氮气吹干，准确加入,1.0mL,石油醚，旋涡振荡,30s,，溶解残留物，供气相色谱测定。,（,4,）定量,取相同体积的样品提取液和多氯联苯标准使用液，在同一色谱条件下进样，进行色谱分析，记录峰面积或峰高。采用标准使用液色谱图中各多氯联苯组分的出峰时间定性，确定被测试样中的组分数目及组分名称，外标法定量。,注意事项,本方法灵敏度高，对样品净化程度要求较高。特别是污染严重的样品，既要保证有较高的回收率，又要使注入仪器的样品干净，不然，就会污染毛细管柱，降低柱效，影响分离度。在实际检测中，应根据样品的具体情况，对萃取液采取不同程度的净化处理。校准标样与试样尽可能同时进行分析，否则，将使结果不准确。检测为阳性的样品，需采用另一极性的色谱柱定性确证。,