ThermoULtimate3000高效液相色谱确认方案.doc

淮北智信堂生物科技股份有限公司
UL timate3000高效液相色谱仪确认方案
编号：VP-AI-2017001
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UL timate3000高效液相色谱仪确认方案
编号：VP-AI-2017001

*生物科技股份有限公司

确认方案审批表

验证项目名称：UL timate3000液相色谱仪确认方案
编 号：VP-AI-2017001
起 草 人： 日 期： 年 月 日
审 核

审核部门/职务
审核人
日 期
备 注
QC/主管

QA/主管

批 准 人： 日 期： 年 月 日
执行日期： 年 月 日

确认小组人员名单：

小组职务
姓 名
所在部门
职 务
组 长

质管部
经理
组 员

化验室
主管
组 员

QA
主管
组 员

化验室
QC

目 录
1.概述 4
2.确认目的 4
3.确认范围 4
4.确认小组人员及职责 4
5.验证相关文件依据 5
6.验证项目和时间安排 5
7. 安装确认 5
8 运行确认 7
9.性能确认 13
10. 确认过程中的偏差及处理措施 14
11．再确认周期 14
12.确认结果评定与结论 14
13.附件 14

1.概述
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种现代液相色谱法，其基本方法是用高压输液泵将流动相泵入到装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。
2.确认目的：
按照GMP的要求，对该仪器进行安装确认、运行确认、性能确认，以确定仪器是否有具有良好的检测性能，能否满足日常分析测试工作的需要。
3.确认范围：
本确认方案适用于本公司的UL timate3000高效液相色谱仪的确认。
4.确认小组人员及职责
4.1 确认小组
验证分工
所在部门
职 务
组长
质量部
经理
组员
质量部
QC主管
组员
质量部
QC
组员
质量部
QA主管
4.2 验证小组职责
组长：负责验证管理的日常工作和验证的协调，验证方案和报告的批准。
组员：QC，化验室。起草验证方案和验证报告，并参与实施验证。
组员：QC主管，化验室。审核验证方案和报告，协调与本次验证相关的化验室工作。
组员：QA主管，质量保证部。负责审核验证方案和验证报告，如果验证中出现偏差，应对偏差进行调查。
5.验证相关文件依据
参考文献
药品生产质量管理规范（2010年版）
药品生产验证指南（2003年版）
药品生产质量管理规范实施指南
液相色谱仪国标GBT26792-2011
液相色谱仪JJG 705-2002
6.验证项目和时间安排
计划于 年 月 日 - 月 日对UL timate3000高效液相色谱仪进行确认，内容严格按照本确认方案，检查UL timate3000高效液相色谱仪其安装确认、运行确认、性能确认达到规定的标准要求。确认开始前所有参与人员应经过本方案的培训，培训记录见附件1。
7.安装确认
7.1.概述
UL timate3000液相色谱仪由赛默飞公司提供，安装于质量控制室的仪器室，用于成品，原料，中间样品的含量和有关物质检测。
安装确认目的：证实所供应的设备规格符合要求,设备所应备有的技术资料齐全。开箱验收应合格，并确认安装条件（或场所）及整个安装过程符合设计要求。
7.2.安装确认内容
7.2.1.基本资料检查：检查是否有各种必需的书面资料，如表1。
表1 资料检查
确认项目
有
无
备注
采购定单

使用说明书

设备的合格证书

装箱单

保修卡

7.2.2.设备所需外部环境确认
目的：确认设备的安装是否符合原设计的条件，如表2。
表2 外部环境确认
确认项目
合格要求
是否符合要求
备注
温度
5-40℃
□是 □否

相对湿度
≤85%
□是 □否

地面
平滑、不易起尘
□是 □否

环境
无腐蚀性气体
□是 □否

7.2.3.设备型号确认
目的：确认设备各部件的型号，保证其与订单和装箱单所描述的一致，如表3。
表3 设备型号确认
部件
设备型号
序列号
是否一致
输液泵

□是 □否
自动进样器

□是 □否
柱温箱

□是 □否
紫外检测器

□是 □否
7.2.4.设备外观确认
目的：确认设备外观符合标准要求，如表4。
表4 设备外观确认
确认项目
合格要求
是否符合要求
设备外表面
仪器外表应光洁平整、字迹清晰，表面涂覆色泽均匀，不应有明显划伤、露底、裂纹、气泡等现象
□是 □否
各按键、旋钮、开关
各调节旋钮、按键、开关等工作正常，无松动；指示、显示清晰完整
□是 □否
7.2.5.公用设施确认
目的：确认公用设施，使其满足设计要求，如表4。
表5 公用设施确认
项目
设计要求
确认结果
备注
电压
220V
□是 □否

电源适配
三孔插座
□是 □否

7.2.6.软件版本确认
目的：确认安装的软件与采购软件版本是相同的。
软件版本与采购版本 □相同 □不相同
7.2.7.硬件环境与安装确认
目的：根据生产商硬件和系统设计规格标准，确认仪器和控制器工作区域符合要求， 如表6。
表6 硬件环境与安装确认
序号
描 述
是否符合要求
1
仪器放在水平的工作台上，计算机在仪器旁边。
□是 □否
2
仪器各部件之间正确连接。
□是 □否
3
温度在10-30℃，湿度在20-85%之间。
□是 □否
4
室内无强电磁干扰源及有害有毒气体。
□是 □否
5
排风口和进风口对仪器和计算机无污染。
□是 □否
7.2.8.部件清单
目的：确认仪器日常维护和操作所需要的消耗品和备用品，如表6。
表7 部件清单
部件名称
数量
存放地点
备注

7.2.9.仪器、仪表、衡器的确认
目的：确认仪器、仪表、衡器经过校验，并在校验期内。如表8。
表8 仪器、仪表、衡器确认记录
仪器仪表衡器名称
仪器仪表衡器编号
校验周期
校验证书编号
有效期至

7.2.10.维修服务确认
目的：确认仪器出现故障后能及时的处理，不影响操作。
每本操作手册上都有简单的维护方法，经过仪器培训的操作人员可以根据说明书进行简单的维修和零部件的更换。
如果有其它比较大的问题，用户不能解决的，可以电话通知厂家的维修工程师。
维修电话：
7.3.安装确认结论及批准
结论：

检查人： 日期： 批准人： 日期：
8.运行确认：
8.1.测试项目和认可标准
验证部件
验证项目
合格标准
软件系统确认
见“高效液相色谱仪计算机化系统确认报告”VP-CS-2017001
输液泵
流量设定值误差SS
0.5ml/min:＜5%；1.0ml/min:＜3%；2.0ml/min:＜2%
流量稳定性误差SR
0.5ml/min:＜3%；1.0ml/min:＜2%；2.0ml/min:＜2%
梯度误差GC：
不超过±3 %
柱温箱
柱箱温度设定值误差ΔTS
≤±2℃
柱箱控温稳定性TC
≤1℃
检测器
基线噪声
≤20uv
最小检测浓度
≤1×10－7g/mL(萘的甲醇溶液)
基线漂移
≤200uv/h
8.2.运行确认所需的材料
8.2.1.玻璃仪器设备 计量玻璃仪器需彻底清洗并经检定，一般玻璃仪器要保证洁净。
8.2.2.试剂、标准溶液
a) 萘（AR）
b) 甲醇（色谱纯）
c) 丙酮（AR）
d) 去离子水:电导率不大于0.1μs/cm
e) 紫外波长标准物质
8.1.2.3 其它辅助设备
a) 玻璃仪器：经检定、其它玻璃器皿
b) C18色谱柱
c) 铂电阻温度计 （Pt100）准确度≤0.3℃
d) 秒表 分度值不大于0.1秒
e) 进样器 20μl
f) 分析天平
g) 游标卡尺 15cm/0.02mm
8.3.运行确认的实施
8.3.1.输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定
将仪器的输液系统，进样器、色谱柱和检测器联接好，以甲醇为流动相，流量设为1.0mL/min，按说明书启动仪器，待压力平稳后保持10分钟，按表7设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确地收集，称重。按式(1)、式(2)计算 SS和 SR。
表7
流量设定值（mL/min）
0.5
1.0
2.0
测量次数
3
3
3
流动相收集时间（min）
10
5
5
接受标准
SS
5%
3%
2%
SR
3%
2%
2%
SS＝(Fm－FS)/FS×100%……(1)
SR＝(Fmax－Fmin)/F×100%……(2)
式中：SS——流量设定值误差(％)；
SR——流量稳定性误差(％)；
Fm＝(W2－W1)/ （ρ·t），流量实测值(mL/min)；
W2——容量瓶＋流动相的重量(g)；
W1——容量瓶的重量(g)；
FS——流量设定值(mL/min)；
ρ——实验温度下流动相的密度(g/cm3)；
t——收集流动相的时间(min)；
Fmax——同一组测量中流量最大值(mL/min)；
Fmin——同一组测量中流量最小值(mL/min)；
F——同一组测量值的算术平均值(mL/min)。
输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定记录。见附件2。
8.3.2.梯度误差的检定
由梯度控制装置设置阶梯式的梯度洗脱程序，A溶剂为纯水，C溶剂为含0.1%丙酮的水溶液，C经由5个阶梯从0变到100%。将输液泵和检测器连接（不接色谱柱），开机以后以A溶剂冲洗系统，基线平稳后开始执行梯度程序，画出梯度变化曲线。求出A，C溶剂不同比例时的输出信号值（或记录仪读数），重复测量2次，计算平均值。从C溶剂的含量及对应的输出信号值（或记录仪读数），按式（3）计算梯度误差Gci，取Gci 最大者作为仪器梯度误差，应不超过±3%。波长为254nm，检定记录见附件3。
梯度洗脱表
时间
A通道：超纯水
C通道：0.1%丙酮水溶液
0.00min
100%
0%
3.00min
100%
0%
3.01
80%
20%
13.00min
80%
20%
13.01min
60%
40%
23.00min
60%
40%
23.01min
40%
60%
33.00min
40%
60%
33.01min
20%
80%
43.00min
20%
80%
43.01min
0%
100%
53.00min
0%
100%
53.01min
100%
0%
58min
100%
0%
Gci =（ –）/ ×100%
式中：Gci —— 第i段梯度误差 ( % ) ；
—— 第i段输出信号值（或记录仪读数）增量平均值；
—— 各段输出信号（或记录仪读数）增量平均值的平均值。

记
录
仪
读
数
时间 t
0%A
100%C
20%CCC
40%C
60%C
80%C
100%C
0%A

8.3.3.前后进样带入量的确认
方法：选用4.6mm×250mm的C18或C8柱，流动相：甲醇：水=75：25，检测器254nm，流速1.0ml/min,进样量5ul，使用下列商业标准品进样。
标准溶液(a):咖啡因溶液100ug/ml
标准溶液(b):咖啡因溶液1ug/ml
空白溶液:水
备注：标准溶液的分析证书必须作为附件以证明标准溶液是适用的。
进以下序列样：
——咖啡因溶液100ug/ml，1针
——水，1针
——咖啡因溶液1ug/ml，1针
记录色谱并对咖啡因峰进行积分。
可接受标准
空白溶液中相应的峰面积百分比不超过标准溶液(a)中咖啡因峰面积的0.1%；标准溶液(b)中咖啡因的峰面积是标准溶液(a)中咖啡因峰面积的0.9%-1.1%。
记录见附件4.
8.3.4.柱温箱柱箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定
将数字温度计探头固定在柱温箱内，选择20℃和50℃进行检定。按仪器说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录一次读数，共计7次，求出平均值。平均值与设定值之差为ΔTS，7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性TC。
柱温箱柱箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定原始记录见附件5。
8.3.5.检测器的检定
a.检测器基线噪声和基线漂移的测定
取C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，检测器波长设定为254nm,开机预热，待仪器稳定后（约60min）记录基线60min，从30min内基线上读出噪音值；从60min基线上读出基线漂移值。
接受标准：基线噪音应不超过5×10-4 AU；基线漂移应不超过5×10-3AU/h。
记录见附件6。
b.检测器最小检测浓度的测定
取C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，检测器波长设定为254nm,开机预热，待仪器稳定后取1×10-7g/ml的萘/甲醇溶液进样20μl，记录色谱图，由色谱峰峰高和基线噪声峰峰高计算最小检测浓度CL。公式如下：
CL=(2×Nd×C)/H
式中 CL——最小检测浓度，g/ml；
Nd——基线噪声峰峰高，mm；
C ——标准溶液浓度，g/ml；
H ——标准溶液峰峰高，mm。
接受标准：应不超过1×10-7g/ml
检测器的最小检测浓度原始记录。见附件7。
8.4.运行确认结论及批准
结论：

检查人： 日期： 批准人： 日期：
9.性能确认
9.1.取C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，检测器波长设定为254nm,柱温设定为40℃。开机预热待仪器稳定后取0.1mg/ml的萘/甲醇溶液进样20μl，连续进样6次，记录其峰面积和保留时间，以保留时间计算其定性测量重复性误差，以峰面积计算其定量测定重复性误差，以保留时间计算其定性重复性误差。接受标准：定量重复性RSD≤1.0%，定性重复性≤0.5%。
性能确认记录见附件8
9.2.性能确认结论及批准
结论：

检查人： 日期： 批准人： 日期：
10.确认过程中的偏差及处理措施：见附件9。
11.再确认周期：
11.1.正常情况下每年做一次确认。
11.2.发生了影响仪器性能的部件改变或维修后，应进行再验证。
12.确认结果评定与结论：见附件10.
13.附件
附件1：人员培训、参与情况确认记录
附件2：输液泵确认记录
附件3：梯度误差检定记录
附件4：前后进样带入量确认记录
附件5：柱温箱确认记录
附件6：基线噪声、基线漂移测定记录
附件7：最小检测浓度测定记录
附件8：性能确认结果记录
附件9：偏差处理审批表
附件10：验证结果综合评价表

附件1
人员培训、参与情况确认记录
日 期
年 月 日
课 时
1
授课方式
面授
授课地点
会议室
授课人

部门
岗位
培训人
质量部
QC主管

质量部
QA人员

质量部
QC人员

确认标准
确认结果
确认所有参与执行本确认的人员已经得到培训，并在培训记录中签字。

确认结论：

备注或附件：

检查人/日期

复核人/日期

附件2
输液泵确认记录
流量（ml/min）
收集时间min
次数
W1
W2
W2-W1
接受标准
SS
SR
0.5
10
1

SS≤5%

SR≤3%

2

3

1.0
5
1

SS≤3%
SR≤2%

2

3

2.0
5
1

SS≤2%
SR≤2%

2

3

结果评定：

检定人

日 期

复核人

日 期

附件3
梯度误差确认记录
次数
第一阶段读数
第二阶段读数
第三阶段读数
第四阶段读数
第五阶段读数

1

2

Li

-

Gci

可接受标准：Gci≤±3%
结果评定：

检定人

日 期

复核人

日 期

附件4
前后进样带入量确认记录
溶液名称
标准溶液(a)
空白溶液
标准溶液(b)
咖啡因峰面积(mAu*S)

结果
空白溶液/标准溶液(a)=
标准溶液(b)/ 标准溶液(a)=
接受标准
空白溶液中相应的峰面积百分比不超过标准溶液(a)中咖啡因峰面积的0.1%；标准溶液(b)中咖啡因的峰面积是标准溶液(a)中咖啡因峰面积的0.9%-1.1%。

结果评定：

检定人

日 期

复核人

日 期

附件5
柱温箱设定值误差记录
设定温度
实测温度
平均值
ΔTS
TC
结 果
20℃
1

2

3

4

5

6

7

50℃
1

2

3

4

5

6

7

接受标准：ΔTS≤±3℃，TC≤±1℃
结果评定：

检定人

日 期

复核人

日 期

附件6
基线噪声、基线漂移值记录
30min基线噪声值
接受标准
60min基线漂移值
接受标准

≤ 20uv

≤ 200uv/h
结果评定：

检定人

日 期

复核人

日 期

附件7
最小检测浓度测定
萘的称样量
稀释倍数
萘的色谱峰高
平均峰高
噪声
最小检测浓度

结果评定：

检定人

日 期

复核人

日 期

附件8
性能确认结果记录
样品名称

浓度

波长

流动相

柱温

流速

序号
1
2
3
4
5
6
平均
RSD
保留时间

峰面积

接受标准：定量重复性RSD≤1.0%，定性重复性RSD≤0.5%
结果评定：

检定人

日 期

复核人

日 期

附件9
偏差处理审批表
偏差
描述

填写人/日期： 复核人/日期：
偏差
原因
分析

填写人/日期： 复核人/日期：
偏差
处理

填写人/日期： 复核人/日期：
处理
结果

填写人/日期： 复核人/日期：
附件10
验证结果综合评价表
项目名称
UL timate3000高效液相色谱仪确认方案
方案编号
VP-AI-2017001
验证结果综合评价：

结论：
验证小组成员签字：

年 月 日
验证负责人批准意见：

签名/日期：