抗埃博拉核蛋白人鼠抗体研究.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,抗埃博拉核蛋白 人鼠嵌合抗体的研究,-,病原生物学文献阅读报告,埃博拉病毒简介,:,埃博拉出血热（,Ebola Haemorrhagie Fever,EBHF,）是由埃博拉病毒（,Ebola virus,EBOV,）引起的动物疫源性传染病，死亡率可高达,90%,。,形态与性状：,埃博拉病毒可呈杆状、丝状；直径约为,7090nm,，为中 型病毒；单股负链,RNA,病毒；有包膜,病毒的蛋白：糖蛋白（,GP,）、核蛋白（,NP,）、,VP35,、,VP40,、,VP30,、,VP24,、,RNA,聚合酶（,L,蛋白）,病毒的生活周期：吸附、穿入、脱壳、生物合成、装配、成熟和释放,病毒的传染源和宿主动物：感染,EBOV,的患者，以及猴子、黑猩猩等灵长类动物,传播途径：接触传播，注射传播，性传播，气溶胶传播,主要临床特征：,一,.,早期主要为全身性病毒血症的症状和体征。,a.,症状：早期多急性发病，表现为一系列非特异性症状；,b.,体征：体温以高热为主，波动较大；重症患者会出现低血压；脉搏,-,体温分离早期较为常见。,二,.,晚期表现为全身多脏器的广泛出血和肝肾功能的严重受损。,NP,抗体研究目的、原因,！,由于埃博拉出血热在我国境内尚无病例出现，尤其需要储备血清学检测阳性质控物。,NP?,获得抗体？,通过基因工程抗体技术构建并表达抗埃博拉病毒核蛋白,NP,人,-,鼠嵌合抗体，为埃博拉出血热血清学检测做人源阳性对照储备。,人,基因,鼠,基因,+,新基因,抗体,如何制备人鼠嵌合抗体,工程,基因,目的基因的获取,1,1,从分泌抗,ebov np,抗体的鼠杂交瘤细胞中提取相应,RNA,，逆转录合成,cDNA,，然后通过,PCR,技术扩增该目的基因。,表达载体的构建,2,将鼠抗体轻重可变区基因和人抗体轻重链恒定区基因插入到,HL51-14,质粒上，成功构建重组,DNA,分子。,检测抗体是否成功表达：,ELISA,检测,293T,细胞是否成功表达人,-,鼠嵌合抗体,包被,ebove np,抗原,4,过夜,次日加入一抗为收获的嵌合抗体上清,二抗为,HRP,标记的抗人,Fc,抗体,4.,加底物显色，底物降解的量即为嵌合抗体的生成量,结果及其意义：,结果,：,改造过的人鼠嵌合抗体能与埃博拉病毒核蛋白抗原结合表明其具有抗体的生物学活性。这些均说明人鼠嵌合抗体的构建是成功的。,意义：,作为,Ebola,血清学检测中人源阳性对照储备在埃博拉病毒检测上起到一定作用。对于抗埃博拉核蛋白抗体的研究，也为以后抗埃博拉病毒抗体的研究提供了一定的基础。,预防埃博拉,勤洗手,加强锻炼,避免与感染者直接接触,注意饮食卫生,身体不适立即去医院,不去有感染报道和怀疑的地方,参考文献,埃博拉出血热,，第四军医大学出版社，第一版。,周荣平，孙丽娜，刘洋，芜为，李川，梁米芳，仇佩虹,.,抗埃博拉病毒核蛋白,NP,人,-,鼠嵌合抗体的研究,.,病毒学报（,32,），,2016,，,1,：,14-18,。,Thank You!,