微生物检测技术--金黄色葡萄球菌检测课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,食品的微生物学检验,致病菌,主要内容,金黄色葡萄球菌（GB4789.10-2010）,大肠杆菌（GB 4789.38-2012）,沙门氏菌（GB 4789.42010）,副溶血性弧菌（,GB 4789.72013）,金黄色葡萄球菌检验 p153,1,、生物学特性（重点）,2,、致病性,3,、流行病学,4,、国标检验方法（重点）,5,、快速检测方法,1.2,培养特征,易培养，,对营养要求不高，,在普通培养基中生长良好。,需氧或兼性厌氧，在好氧条件下生长最好；,大多数菌株能生长在6.5-46之间（,最适温度30-37,）能在pH4.2-9.3之间生长,（最适pH为6-7）；,耐盐性强，,在含715%的氯化钠培养基中仍能生长，可用于,筛选菌种,。,在普通营养琼脂平板上培养1824，可形成圆形、表面光滑、不透明的菌落。可产生,金黄色色素,，色素为脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落内，不渗至培养中。,溶血：红细胞破裂，血红蛋白逸出称红细胞溶解，简称溶血。,溶血素是细菌分泌的一种毒性因子,血平板：,可形成,完全透明溶血环,（,溶血,）,可产生,卵磷脂酶,，在卵黄高盐培养基上形成周围有,白色沉淀环,的菌落。,2、致病性,金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，为条件致病菌。可引起局部,化脓,感染，也可引起肺炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。,菌株致病力的强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：,a.,溶血素,：,外毒素，分、多种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死；,b.,杀白细胞素：,可破坏人的白细胞和巨噬细胞；,c.,血浆凝固酶,：,当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关；,d.,脱氧核糖核酸酶,：,金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌；,e.,肠毒素,：,金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E五种。,2、致病性,+,当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经8-10小时即可相当数量的肠毒素。,肠毒素,可耐受100度煮沸30min而不被破坏。人摄食该污染产品后,2-3h,便可出现中毒症状。其引起的食物中毒典型症状为呕吐和腹泻。,3、流行病学,在自然界中广泛存在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。,作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。,因而，食品受其污染的机会很多。,一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品,食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染,食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；,熟食制品包装不严，运输过程受到污染；,奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。,金黄色葡萄球菌的流行病学,近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，,仅次于大肠杆菌。,+,金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。,金黄色葡萄球菌的流行病学,检验前准备工作,采集与送检,预处理,菌落总数,大肠菌群,致病菌,纯化,分离培养,前增菌,多项鉴定及检测实验,分析、报告,食品微生物检验的一般程序,检测步骤,-增菌,利用金黄色葡萄球菌,耐盐,的特性（可耐受15%的氯化钠），用含,7.5%氯化钠肉汤,蛋白胨 10.0 g,牛肉膏 5.0 g,氯化钠 75 g,蒸馏水 1 000 mL,检测步骤,-分离,血平板,：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血平板上产生明显的溶血环。,血平板上其,典型菌落,呈,金黄色,，有时也为白色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血圈。,血平板,检测步骤,-分离,BP平板,：,胰蛋白胨,、,牛肉膏,和,酵母膏,提供碳源、氮源、硫、维生素和痕量矿物元素,丙酮酸钠、甘氨酸,和,氯化锂,是一种生长促进剂,亚碲酸盐,对除金黄色葡萄球外的其他能分解卵黄的菌株有毒性，并使菌落产生黑色,卵黄,提供营养和有利于观察卵磷脂环,检测步骤,-分离,在BP平板上其典型菌落为：圆形，光滑突起，湿润，直径2-3mm，颜色呈,灰色到黑色,，边缘常为淡色（米黄色或灰白色略带灰色或黄色的白色），周围为一,混浊带(沉淀环),，在其外缘,常有一透明圈,。用接种针接触菌落似有黄油树胶的粘稠感。,B-P平板,血浆凝固酶试验：,吸取1:4新鲜兔血浆0.5 mL，放入小试管中，再加入培养24 h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物0.5 mL，振荡摇匀，,置 361温箱或水浴内，,每半小时观察一次，观察6 h,，如呈现凝固,即将试管倒置或 倾斜时，呈现凝块者，被认为阳性结果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉汤作为对照。,结果报告,如血浆凝固酶试验阳性，可判定为金黄色葡萄球菌。,报告在,25g（mL）,样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。,361,18 h24 h,GB 4789.10-2010,第一法,BHI 肉汤和营养琼脂小斜面,血浆凝固酶试验,检样:25 g(mL)样品+225 mL 7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤，均质,Baird-Parker 平板,血平板,涂片染色,观察溶血,报告结果,36 1 18 h24 h,增菌,分离,鉴定,1,关于金黄色葡萄球菌,下列哪种说法是错误的,A.,耐盐性强,B.,革兰阳性菌,C.,在血琼脂平板上形成完全透明的溶血环,D.,分解葡萄糖产酸产气,2,以下属于,金黄色葡萄球菌的特点,有,A.,血浆凝固酶试验阳性,B.,产生溶血素,C.,分解甘露醇,D.,产生耐热核酸酶,3,金黄色葡萄球菌的培养特性是,A.,营养要求高，必须在血平板上才能生长,B.,均能产生金黄色色素,C.,耐盐性强,可在含,7%,15%NaCL,的培养基中生长,D.,专性需氧,课堂练习,4,金黄色葡萄球菌,定性试验中,所用的增菌液是,(),。,A 7.5%,氯化钠肉汤,B 10%,氯化钠胰酪胨大豆肉汤,C,蛋白胨水,D.PDA,5,金黄色葡萄球菌,在,BP,平板中的典型菌落特征有,A.,颜色呈灰色到黑玉色,B.,有,混浊带,C.,常有一透明圈,D.,较干燥,课堂练习,