第二章抗原抗体反应-.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,临床免疫学,Clinical Immunology,免疫学,(Immunology)：,是研究机体免疫系统的组织结构,和生理功能，了解免疫应答效应机制，,研究免疫防治措施的一门现代医学学科。,免疫学的分类,：,基础免疫学,研究免疫系统的组织结构,生理功能,信号传导及其调节等,临床免疫学,应用免疫学理论与技术,研究疾病的免疫病理机制、诊断、治疗和预防的多个分支学科的总称。,1,、基础免疫学：,分支学科,免疫化学,免疫遗传学,免疫生物学,分子免疫学,2、,临床免疫学：,主要包括,免疫病理与免疫性疾病,：免疫缺陷病、,超敏反应性疾病、自身免疫病等。,移植免疫学,肿瘤免疫学,感染免疫学,免疫学检验,还包括：血液免疫学、老年免疫学、,生殖免疫学、神经免疫学等。,目的要求,掌握抗原体反应的概念,原理,熟悉抗原抗体反应的特点,了解影响抗原抗体反应的因素,体外的抗原抗体反应亦称为,血清学反应,抗原抗体反应,:,抗原与相应抗体之间的特异性结合反应。,基本原理,第一节 抗原抗体反应原理,Ag,决定簇和,Ab,分子超变区相互,作用,(,具有互补性与亲和性,),分子表面特异的可逆的弱结合力,在极短距离内才能发生,基本条件：,结合力,亲和力,亲水胶体转,化为疏水胶体,抗原和抗体的结合是互补性的特异性结合,不形成牢固的共价键，通过非共价键结合,这种弱的结合力涉及几种分子间的作用力,一、抗原抗体结合力,一、抗原抗体结合力,*1静电引力,*2范德华引力,*3氢键结合力,*4疏水作用力,静电引力（,库伦引力）,（,electrostatic forces）,（coulombic forces）,概念：,抗原和抗体分子带有相反电荷的,氨基和羧基基团之间相互的引力。,引力的大小与两个相互作用基团间的距,离的平方成反比；平均键能约为,20.9kJ/mo1,。,范登华引力,（,Van der Waals forces）,概念：,抗原和抗体相互接近时，由于分子的,极化作用而产生的引力。,结合力的大小与两个相互作用基团的极化程,度的乘积成正比、与它们之间距离的,7,次方,成反比，键能约为,4.2,12.5kJ,mol,。,这种引力的能量小于静电引力。,概念：,供氢体上的氢原子与受氢体原子,间的引力。,氢键结合力,(hydregen bond,forces),供氢体：,羧基、氨基和羟基（上的氢原子）,受氢体：,羧基氧、羧基碳和肽键氧等,CO-O-H,-,O=C-NH,CH,氢键结合力与供氢体和受氢体之间距离的,6,次,方成反比，键能约,20.9kJ/mol,。,疏水作用力（,疏水键）,概念：,两个疏水基团在水溶液中相互接触时，由于对水分子排斥而趋向聚集的力。,抗原决定簇与抗体上的结合点靠近，互相间,正、负极性消失，亲水层立即失去。,此力在抗原抗体反应中的结合是很重要的。,提供的作用力最大，约占总结合力的,50,。,完,抗原抗体结合力示意图,抗原,抗体,氢键结合力,O,N,O,N,H,H,静电引力,-,-,+,+,范得华力,-,+,+,-,+,-,-,+,疏水作用力,排斥的水,二、抗原抗体亲和力与亲合力,*,亲和力,（,affinity）,是抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原决定簇之间的相适应性而存在着的引力，这是抗原与抗体之间固有的结合力。,亲和力越大，抗原抗体结合越牢固。,*亲合力,（,avidity),是指反应系统中复杂抗,原与相应抗体之间的总体结合能力。,亲合力与亲和力、抗体的结合价和抗原的有,效决定簇数目相关。,亲和常数,亲和常数,K=,K,值大的抗体与抗原牢固结合，不易,解离，说明该抗体有高亲和力。,抗体与抗原结合是可逆的反应，在平衡时其,血清学反应条件下，蛋白质抗原抗体均带负电荷，使极化的水分子在其周围形成水化层，成为亲水胶体。,三、亲水胶体转化为疏水胶体,当抗原与抗体结合后，表面电荷减少，水化,层变薄；而且由于抗原抗体复合物形成后，,与水接触的表面积减少，由亲水胶体转化为,疏水胶体。,在电解质作用下，各疏水胶体之间靠拢，形,成可见的抗原抗体复合物。,亲水胶体转化为疏水胶体示意图,亲水胶体,疏水胶体,转化,NaCl,可见反应,第二节 抗原抗体反应的特点,*1.特异性 *2.比例性 *3.可逆性,*4.阶段性,一、,特异性,（,specificity）,*,概念：某种,抗原分子，只能与由它刺激所产生,的抗体结合而起反应的专一性能。,一、特异性,*,决定因素：,由抗原决定簇和抗体分子超变区之,间空间结构的互补性决定的。,抗体分子,N,端可变区形成,3nm1.5nm0.7nm,的槽沟，只有与其空间结构互补的抗原决定簇才能如楔状嵌入。,*,交叉反应,(cross reaction),两种不同的抗原,物质具有部分相同或类似结构的抗原决定簇，,则可与彼此相应的抗体反应。,特异性示意图,*,特异性：某种,抗原分子，只能与由它刺激所产,生的抗体结合而起反应的专一性能。,*,交叉反应,(cross reaction),两种不同的抗原,物质具有部分相同或类似结构的抗原决定簇，,则可与彼此相应的抗体反应。,*最适比,(optimal ratio),或等价点,(equivzlence,point),最迅速出现沉淀时的抗原抗体的浓度,比或量比。,二、比例性,（,proportionality）,等价带,(zone of equivalence),抗原与抗体分子比例合适的范围。,带现象：,Ag,与,Ab,比例不适而不出现可见反应。,*,前带,(prezone),抗体过量时。,*,后带,(postzone),抗原过量时。,比例性示意图,抗体过量,比例合适,抗原的量,抗原过量,免疫复合物沉淀的量,前带,等价带,后带,三、可逆性（,reversibility),概念：,是指抗原与抗体结合成复合物后，在,一定条件下可解离为游离抗原与抗体的特性。,后抗原抗体仍保持原有特性。,解离条件：低,pH,、高浓度盐等。,常用于解离抗原抗体复合物的物质有：,3mol/L,硫氰化钾、,pH2.4 0.1mol/L,甘氨酸、,7mol/L,尿素等。,抗体,混有,SPAg,抗体,-SPAg,抗体,-SPAg,分离剂,一、抗原抗体结合,二、分离抗体,可逆性示意图,抗体,四、阶段性：,第一阶段,-,抗原抗体特异性结合,第二阶段,可见反应：,凝集,沉淀,细胞溶解,第三节 抗原抗体反应影响因素,一、反应物自身因素,*抗原：,1.理化特性,2.Ag决定簇数量,3.Ag决定簇种类,*抗体：,1.来源,2.特异性与亲和力,3.浓度,二、环境条件：,*,电解质：,0.85%NaCl,*酸碱度：pH69,*温度：1540,*酸凝集：,当,pH为3左右时，接近细菌Ag的等电点，可出现非特异性凝集。,抗原,-,抗体反应受多种因素影响,1.,电解质,：抗原,-,抗体反应通常应用,0.85%,的氯化钠作为 稀 释液，以供给适应浓度的电解质。,2.,温度,：一般反应在,22,室温，,37,水浴 或孵育箱中进行，,4,过夜。,3,.,酸碱度,：抗原,-,抗体反应适应的酸碱度 为,PH68,。,抗原,-,抗体反应受多种因素影响,第四节 抗原抗体反应类型,1.沉淀反应,2.凝集反应,3.补体参与的反应,4.中和反应,5.标记免疫技术,表,抗原抗体反应的基本类 型,表,反应类型 实验技术 检测方法 敏感度,沉淀反应 液相沉淀试验 观察沉淀、检测浊度,+，+,琼脂凝胶扩散 观察扫描沉淀线或环 +,凝胶电泳技术 或峰或弧 +,补体参与反应 补体溶血试验 以裸眼或光电比色仪,+,补体结合试验 观察测定溶血现象 +,免疫标记技术 荧光免疫技术 检测荧光现象,+,放射免疫技术 检测放射性 +,酶标免疫技术 检测酶底物显色 +,发光免疫技术 测定发光强度 +,生物素-亲合素技术 结合其它标记技术 +,金标免疫技术 检测金颗粒沉淀 +,凝集反应,直接凝集试验 用裸眼、放大镜或显,+,间接凝集试验 微镜观察红细胞或胶 +,凝集抑制试验 乳等颗粒和各种凝集 +,协同凝集试验 现象 +,抗球蛋白试验 +,中和反应 病毒中和试验 病毒感染性丧失,+,毒素中和试验 外毒素毒性丢失 +,思考题,上页,下页,返回,结束,1.名词解释：抗原抗体反应、带现象,2.简述AgAb反应的原理及影响因素。,3.试述抗原抗体反应有哪些特点?,