吸光光度法2.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第,9,章吸光光度法,定义,：是基于被测物质对光具有,选择性吸收的,特性而建立的分析方法。,包括,：比色法、可见及紫外吸光光度法、红外光谱法等。,本章我们重点讨论可见光区的吸光光度法。,吸光光度法,特点,灵敏度高,最低浓度一般可达1-10,-3,%的微量组分。对固体试样一般可测到10,-4,%。如果对被测组分事先加以富集，灵敏度还可以提高1-2个数量级。,准确度较高,相对误差为2-5%，但对微量成分来说，还是比较满意的，因为在这种情况下，滴定分析法和重量法也不够准确了，甚至无法进行测定。,操作简便,，测定速度快,应用广泛,几乎所有的无机离子和有机化合物,都可直接或间接地用吸光光度法进行测定。,光的基本性质,光的电磁波性质,射线,x,射线,紫外光,红外光,微波,无线电波,10,-2,nm 10 nm 10,2,nm 10,4,nm 0.1 cm 10cm 10,3,cm 10,5,cm,可 见 光,可见400800400 500 600 700 800,紫,蓝,绿,黄,橙,红,第一节 物质对光的选择性吸收和光吸收定律,光的波粒二象性,波动性,粒子性,E,光的折射,光的衍射,光的偏振,光的干涉,光电效应,E,：光子的能量（,J,焦耳）,：光子的频率（,Hz,赫兹）,：光子的波长（,cm,）,c,：光速,10,10-1,）,h,：Plank,常数（,10,-34,焦耳.秒,）,单色光、复合光、光的互补,单色光,复合光,光的互补,单一波长的光,由不同波长的光组合而成的光,若两种不同颜色的单色光按一定的强度比例混合得到白光，那么就称这两种单色光为互补色光，这种现象称为光的互补。,蓝,黄,紫红,绿,紫,黄绿,绿蓝,橙,红,蓝绿,吸收光谱,光作用于物质时，物质吸收了可见光，而显示出特征的颜色，这一过程与物质的性质及光的性质有关。,物质对光的吸收,物质对光的吸收满足Plank 条件,h,S,2,S,1,S,0,S,3,E,2,E,0,E,1,E,3,h,h,h,一、,物质对光的选择性吸收,1.吸收光谱的产生,(1),原子吸收光谱,(AAS)：由于原子外层电子选择性地吸收某种波长的电磁波，而引起的吸收光谱,（线光谱）,(2),分子吸收光谱,：是由分子中电子能级及分子的振动、转动能级吸收能量跃迁而产生的吸收光谱,（带光谱）,a),电子光谱,：由价电子跃迁而产生的分子光谱，且电子能级差 1-20eV，位于 UV-ViS波区200-750nm,（紫外可见吸收光谱）,b),振转光谱,m 研究分子结构，提供分子结构信息如C=O振动，=1600-1750cm,（红外光谱）,纯,电子能态,间跃迁,S,2,S,1,S,0,S,3,h,E,2,E,0,E,1,E,3,S,2,S,1,S,0,h,A,h,h,h,分子内电子跃迁,带状光谱,锐线光谱,A,为什么分子光谱是带光谱？,分子是处在基态振动能级上。当用紫外、可见光照射分子时，,电子可以从基态激发到激发态的任一振动（或不同的转动）能级上,。因此，电子能级跃迁产生的吸收光谱，,包括了大量谱线,，,并由于这些谱线的重叠而成为连续的吸收带,，这就是为什么分子的紫外、可见光谱不是线状光谱，而是带状光谱的原因。又因为绝大多数的分子光谱分析，都是用液体样品，加之仪器的分辨率有限，因而使记录所得电子光谱的谱带变宽。,颜色,溶液颜色,与,吸收光颜色,及,波段,的,关系,黄绿 紫 400-450,黄 蓝 450-480,橙 绿蓝 480-490,红 蓝绿 490-500,紫红 绿 500-560,紫 黄绿 560-580,蓝 黄 580-600,绿蓝 橙 600-650,蓝绿 红 650-750,吸收光谱曲线：,物质能选择性地吸收某种波长的光，,但并不是它只对某一波长的光吸收，而对其它波长的,光一点不吸收，对任何一种物质，它对任一波长的光,都有一定的吸收，只是吸收的程度不同，物质呈现的,颜色是由最大吸收波长的光的互补光决定的。,测量某物质对不同波长单色光的吸收程度，以波长,(,),为横坐标，吸光度(A)为纵坐标，绘制吸光度随波,长的变化可得一曲线，此曲线即为吸收光谱曲线。,当一束平行单色光通过,任何均匀、非散射的固体、液体或气体介质时,，一部分被吸收，一部分透过介质，一部分被器皿的表面反射。如图6-3所示，设入射光强度为,I,0,，吸收光强度为,I,a,，透过光强度为,I,t,，反射光强度为,I,r,。,二、光吸收定律,朗伯-比耳定律,在吸光光度分析法中，,试液和空白溶液分别置于同样质料及厚度的吸收池中,，然后让,强度为,I,0,的单色光分别通过这两个吸收池,，再测量其透过光的强度。此时反射光强度基本上是不变的，且其影响可以相互抵消,。,入射光强与吸收和透过光强关系为下式:,透过光强度,I,t,与人射光强度,I,o,之比称为透射比或透光率（度），用,T,表示。,溶液的透射比愈大，表示它对光的吸收愈小;,相反，透射比愈小，表示它对光的吸收愈大。,透射比或透光率（度）,T 取值为0.0%100.0%,全部吸收,T=0.0%,全部透射,T=100.0%,1.Lambert-Beer Law 数学表达式：,A=Kbc,=lgI,0,/I,t,定义：,当一束单色光通过含有吸光物质的溶液后，溶液的吸光度A与吸光物质的浓度c及吸收层厚度成正比,A,1,b,1,若：c 一定时 =.Lambert Law,A,2,b,2,A,1,c,1,b一定时 =.Beers Law,A,2,c,2,朗伯-比尔定律适用于任何均匀、非散射的固体、液体或气体介质,2.吸光度A的加和性,若溶液中含有不止一种吸光物质，则总吸光度等于各个组分吸光度之和：,A=A,1,+A,2,+.+A,n,根据这一规律，可以进行多组分的测定及某些化学反应平衡常数的测定,3.A与T之间的关系：,则：,A=,-,lgT 或 T=10,-,A,=10,-,bc,吸光系数 Absorptivity,b,：,吸光液层的厚度，光程，,cm,c,：,吸光物质的浓度，,g/L,mol/L,K,：比例常数,入射光波长,物质的性质,温度,取值与浓度的单位相关,c,：,mol/L,K,摩尔吸光系数，,L,mol,1,cm,-1,c,：,g/L,K,a,吸光系数，,L,g,1,cm,-1,c,：,g/100 mL,K,比,吸光系数,相互关系,在一定的实验条件下，物质对光的吸收与物质的浓度成正比。,灵敏度和选择性不高,1）选择合适的显色反应和显色条件,对固体试样一般可测到10-4%。,光作用于物质时，物质吸收了可见光，而显示出特征的颜色，这一过程与物质的性质及光的性质有关。,若溶液中含有不止一种吸光物质，则总吸光度等于各个组分吸光度之和：,做法：固定 cM，改变 cR，就可得一系列 cR/cM值不同的溶液，测A作图,c：吸光物质的浓度，g/L,mol/L,104,第二节 分光光度计及吸收光谱,S=g/cm2,A A,=,当b=1时：=,.标准曲线的斜率,b c c,朗伯-比尔定律一般适用于,浓度较低,的溶液，因此在分析实践中，,不能直接取浓度为1mol/L的有色溶液来测定值,，,在适当的低浓度时测定该有色溶液的吸光度，通过计算求得值；,摩尔吸光系数反映,吸光物质对光的吸收能力，,也,反映用吸光光度法测定该吸光物质,的,灵敏度,，在,一定条件下,它是,常数,。,显色时间：有的要10-30min，有些瞬间完成；,显色反应酸度由实验测得：,当b一定时，两边微分得：dA=bdc,设1和2两束单色光强度相等，则有：,显色温度：许多反应室温完成，有些要加热,H+A-AHA-A,定义：当一束单色光通过含有吸光物质的溶液后，溶液的吸光度A与吸光物质的浓度c及吸收层厚度成正比,滤光片或单色器的质量差(谱带过宽),2 1 1,对固体试样一般可测到10-4%。,1104Lmol-1cm-1,Fe2+=cFe=/=,使用两个参比溶液的精密示差吸光光度法,两组分共存时的分别测定：,3,第二节 分光光度计及吸收光谱,光电管，光电倍增管，光电二极管,3.影响值大小的因素,(1),入射光波长,(2)与被测物质有关 (,FeSCN,，,=200,；,Fe phen,1.1,10,4,),(3)温度，酸度，介质，有色物结构,(,4),不随 c或A值变化,4.值的计算,A A,=,当b=1时：=,.标准曲线的斜率,b c c,小结：,a，,与c或A无关,max,10,4,L,mol,-1,cm,-1,用光度法测定具有较高的灵敏度,max,10,3,L,mol,-1,cm,-1,不宜用光度法测定,例如,已知含Fe,2+,12.5g/25mL，用邻二氮菲显色后形成Fe(Phen),3,用2cm比色皿在,508nm,测得A=0.19，求=？,解,g,10,-6,10,-6,(g)Fe(g/mol)25,Fe,2+,=c,Fe,=,/,=,25mL 1000 M,1000,10,-6,mol/L,A 0.19,=,=,=1.110,4,Lmol,-1,cm,-1,bc 28.95 10,-6,5.桑德尔灵敏度S,当,光度，,单位截面积光程内,所能检测出来的,吸光物质最低含量,（单位：,g/cm,2,）。,A=0.001=,bc cb=,0.001 M,S=,M,10,3,=(g/cm,2,),所以上式中的灵敏度：,S=,=,g/cm,2,1.110,4,单位：,Lmol,-1,cm,-1,第二节 分光光度计及吸收光谱,0.575,光源,单色器,吸收池,检测器,显示装置,A,0,A,t,参比,样品,A=A,t,-A,0,一、分光光度计,分光光度计组件,光源,单色器,样品池,检测器,信号输出,钨灯，360 800,nm.,同时配有稳压器,基本要求：光源强，能量分布均匀，稳定,作用：将复合光色散成单色光,棱镜,光栅,玻璃，350 2500,nm,石英，185 4500,nm,平面透射光栅，反射光栅,玻璃，光学玻璃，石英,作用：将光信号转换为电信号，并放大,光电管，光电倍增管，光电二极管,表头、记录仪、屏幕、数字显示,二、吸收光谱,I,t,将不同波长的单色光,依次通过某一固定浓度的有色溶液，测量每一波长下，有色溶液对光吸收的强度(A)，作 A-曲线图,吸收光谱,反应了,不同物质,的,不同特征吸收,：,(1),同一物质对不同波长的光,的,吸收强度不,同,，吸收,最强,对应的波长称为,max,;,(2),同一物质浓度一定时,，在,某波长下吸收强度一定,，,浓度不同,吸收强度不同,，c愈大，A愈大，c,3,c,2,c,1,是光谱定量的依据;,(3),同一物质分子运动的形式相同，结构相同,，吸收曲线的,形状相同,，且,max,位置不变,.,(4),不同物质的吸收曲线形状不同,，决定了物质的,结构分析,的依据,，,即定性依据,(5)若选择在,max,处测量A，则灵敏度高,(6)从吸收光谱曲线得出,结论,：,c愈大，颜色愈深，吸收光愈强，I,a,愈大，透光I,t,愈弱,；c愈小，则相反,c增大A增加T减小,值不变 ,max,不变,定性分析与定量分析的基础,定性分析基础,定量分析基础,物质对光的选择吸收,A,B,A,在一定的实验条件下，物质对光的吸收与物质的浓度成正比。,A,C,增大,选择参比的原则：,(1)当,试液及显色剂均无色,时，可用,蒸馏水,作参比；,(2),显色剂为无色,，而,被测试液,中存在,其他有色离子,，可用,不加显色剂的被测试液,作参比溶液,；,(3),显色剂有颜色,，可选择,不加试样溶液的试剂空白,作参比溶液；,(4),显色剂、待测物有颜色,，应掩蔽待测组分，使其不与显色剂作用，以加入显色剂的溶液做参比；,(5),改变加入试剂的顺序,，使,被测组分不发生显色反应,，可以此溶液作为参比溶液消除干扰。,第三节 显色反应及其影响因素,一、显色反应和显色剂,1.显色反应的选择,1).,灵敏度高，应大于10,4,；,2).选择性好，干扰小，或干扰容易消除,3).,有色化合物组成恒定，符合一定的化学式,4).有色化合物性质稳定,5).,有色化合物与显色剂之间的颜色差较大,max,大于60nm,1)无机显色剂：,SCN,-,Fe,3+,，Mo,V,，Co,2+,MoO,4,2-,Si，P，V，Ge，As,H,2,O,2,Ti TiO(H,2,O,2,),2+,黄,应用不多，原因：生成的,络合物不稳定,灵敏度和选择性不高,2)有机显色剂,应用多，原因 灵敏度高，,max,10,4,稳定性好,选择性好,扩大应用范围,生色团,：分子中含不饱和键基团，吸收200nm的光,N=N ;C=O；C=S;NO,2,;N=O,助色团,：含有,孤对电子的基团,，,与生色团上的不饱和键作用,，影响化合物对光的吸收，使颜色加深,NH,2,；RNH ；R,2,N ；OH,配合物显色原因:,(,b,)丁二铜肟，NN型,10,4,(,c,)1，10-二氮菲，NN型,=1.,1,10,4,(,a,)磺基水扬酸，OO型螯合显色剂,.,ssal,10,3,L,mol,-1,cm,-1,(,d,)二苯硫腙：,10,4,(,e,)偶氮胂III(铀试剂)，变色酸偶氮类螯合剂,(,f,)铬天青S(三苯甲烷类螯合剂),测Al,3+,的重要试剂,=530nm,=5.910,4,L/mol cm,(,g,)结晶紫:,三苯甲烷类碱性染料,R,+,+TlBr,4,-,有色离子缔合物,a 混配合物：,由,一种金属离子,与,两种不同配体,通过,共价键,结合成的三元络合物。,V(V)/H,2,O,2,/吡啶偶氮间二苯酚,b 离子缔合物：,金属离子首先与配体生成配阴离子或配阳离子,，然后,再与带反电荷的离子生成离子缔合物，,Ag,+,/1，10-邻二氮菲,/溴邻苯酚红阴离子,c 金属离子-配体-表面活性剂体系,：某些金属离子与显色剂反应时，加入表面活性剂，可以形成胶束化合物，测定的灵敏度显著提高,T,稀土元素/二甲酚橙/十六烷基吡啶,蓝色络合物,二、影响显色条件的因素,剂,7.干扰离子的影响,1.显色剂用量：,为保证反应完全，R过量，,且不宜过多,用量范围,宽,用量范围,窄,严格控制,R,量,(1)影响显色剂的平衡浓度和颜色,c,R,R=,R(H),(2)影响金属离子的存在状态,c,M,影响显色的同时降低M=,M(OH),(3)影响络合物的组成,显色反应,酸度,由实验测得：,2 9,3.显色温度：,许多反应室温完成，有些要加热,红色,蓝色,温度,选择由,实验确定：,1,2,3,10 20,4.显色时间：,有的要10-30min，有些瞬间完成；稳定性30min，有的稳定60-120min,时间/min,（,介质不同，溶解度不同,）,6.干扰离子的影响,(2)本身有色：,Fe,3+,，Ni,2+,，Cr,3+,，Cu,2+,，Co,2+,等,第四节 吸光光度分析及误差控制,1）入射光波长的选择：,无干扰-,最大吸收的原则,max，,灵敏度高,有干扰-“吸收最大，干扰最小”的原则。,一、测定条件的选择和标准曲线的制作,4）,吸收池校正：参比池、样品池交换。,A 1%,2）,控制吸光度读数范围：调 c或b，使A介于,之间，测量的准确度较高,。,3）,参比溶液的选择:选合适的参比溶液,调仪器,A,=0，T=100%,。,1）选择合适的显色反应和显色条件,2）绘出被测组分的吸,收光谱曲线(用标液),3）在,max,下测一系列标准溶液,的A值，绘制工作曲线A-c,4）与工作曲线相同的方法，测未知物A,X,，从,工作曲线上查c,X,Ax,Cx,2.标准曲线的制作,A,A,标准曲线不过原点的原因:,1）参比溶液选择不当,2）吸收池厚度不同,3）吸收池位置不妥,4）吸收池透过面不清洁,5）显色不完全,二、对Lambert-Beer Laws的偏离,对吸收光谱而言，,b,和,c,固定，,反映了,随波长变化的情况，单一波长，,固定；不同波长，,不同。因此，,非单色光将导致对吸光定律的偏离。,A或,1,2,在实际工作中，入射光通常具有一定的通带。为了避免非单色光带来的影响，,一般选用峰值波长进行测定，较高的灵敏度,。,1 对应的 ,1较小,2 对应的 ,2较大,使用比较好的单色器,非单色光,引起的,偏离,1）解离:,如有机酸碱的解离,2）络合反应:,如铁的多级络合现象,3）其他反应：,如酸性条件下CrO,4,-,与Cr,2,O,7,2-,的转化,产生胶体或发生浑浊，会有部分光强因散射等原因而损失,试样中存在干扰物质会影响被测组分的测定，使得标准曲线严重偏离朗伯-比尔定律,消除方法,1）控制溶液酸度,2）加入掩蔽剂,3）改变干扰离子的价态,4）选择合适的参比溶液,5）增加显色剂用量:,存在耗显色剂的离子时,6）分离,显色反应的干扰及其消除方法,例如：用二苯硫腙法测定Hg,2+,时，多种干扰离子均可能发生反应，但如果在稀酸介质中进行萃取，则上述离子不再与二苯硫腙作用。,例如：用二苯硫腙法测定Hg,2+,时，即使在稀酸介质中进行萃取，仍不能消除Ag,+,和大量Bi,3+,的干扰，加入KSCN掩蔽Ag,+,，EDTA掩蔽Bi,3+,例如：用铬天青S测定Al,3+,时，Fe,3+,有干扰，加入抗坏血酸将Fe,3+,还原为Fe,2+,后，干扰消除。,三、吸光度测量的误差,误差来源,各种,化学因素,所引入的误差，,仪器精度不够,，测量不准所引入的误差。,仪器测量误差,光源的发光强度不稳定,光电效应的非线性,电位计的非线性、杂散光的影响,滤光片或单色器的质量差(谱带过宽),比色皿的透光率不一致,透光率与吸光度的标尺不准,对给定的光度计来说,，,透光率,或,吸光度的读数的,准确度,是,仪,器精度,的,主要指标之一,，也是衡量测定结果准确度的重要因素。,若测A时产生微小的绝对差dA，,则相对误差Er为：,Er=dA/A；,A=,bc,当b一定时，两边微分得：d,A,=,bd,c,dA/A=dc/c=Er,仪器测量误差,与T的关系如何？,透射比的读数误差。,光度计的读数标尺上,透射比T的刻度是均匀,的，故透射比的读数误差T（绝对误差）与T本身的大小无关，对于一台给定仪器它基本上是常数，一般在之间。,在实际测定中，只有使,待测溶液的透射比T在15%-65%之间,，或使，才能保证测量的相对误差较小，当A=0.434或T=36.8%时，测量的相对误差最小。,可通过,控制溶液的浓度,或,选择不同厚度的吸收池,来达到目的,。,第五节 其他吸光度法,一、,目视比色法,步骤：,1.用同质材料的比色管,2.配制不同量的标准溶液,3.同量的显色剂，相同的实验条件，配成一套标准色阶,4.待测物与标准色阶的配制条件相同，置于色阶中比较,颜色度,方法优点,：,简便，野外、现场操作；,不符合朗伯-比尔定律的也可测,方法缺点：,准确度不高。,不可分辨多组分,定义：,用眼睛观察、比较溶液颜色深度以确定物质含量的方法,二、示差吸光光度法,低浓度示差吸光光度法,高浓度示差吸光光度法,使用两个参比溶液的精密示差吸光光度法,以高浓度示差吸光光度法为例,原理：,以稍低于待测组分浓度的标准溶液作为参比溶液,，然后测试液的吸光度，再从A求c，从而提高准确度参比液 c,S,T,x,I,0,I,s,有,结论：示差法提高了准确度,示差吸光光度法的误差,如果参比T=10%，现调成至100%(A=0)，等于把仪器透光率扩10倍，测量误差变小了。,c,x,c,s,例题,已知 d,T,=0.01,样品,T,x,=2.00%,标准,T,s,=10.0%,示差法,常规法误差,示差法误差,已知 d,T,=0.01,样品,T,x,=2.00%,标准,T,s,=5.00%,示差法提高准确度的实质,常规法,T,x,T,0,5,10,50,100,落在测量,误差,较,大,的范围,示差法,T,0,5,10,50,100,T,r,T,s,T,s,落在测量,误差,较,小,的范围,结论：示差法通过提高测量的准确度提高了方法的准确度,双光束光度计：折光器将一束光分成两束，分时交替地照射样品池（,克服光源不稳定而引起的测量误差,）,1.双波长光度法作用原理：,三、双波长分光光度法,设,1,和,2,两束单色光强度相等，则有：,A,1,=,1,bc ，A,2,=,2,bc,所以 A=A,1,-A,2,=(,1,-,2,)bc,单波长单光束分光光度计,0.575,光源,单色器,吸收池,检测器,显示,单波长双光束分光光度计,比值,光源,单色器,吸收池,检测器,显示,光束分裂器,单波长吸光光度法：,采用双光束光路，用溶剂或空白溶液作参比调零位,双波长吸光光度法：,只用一个样品池。,参比和试样的,液池位置,、,液池常数,、,溶液浑浊度,及,溶液组成,等任何差异都会直接导致误差,以,试液本身对某一波长的光的吸光度,作参比，不仅避免了试液与参比溶液或两吸收池之间的差异引起的误差，还可提高测定的,灵敏度和选择性。,2,.双波长吸光光度法的应用：,测量波长,：配合物吸收峰对应的波长,参比波长,：显色剂的吸收峰对应的波长,等吸收点处的波长,有色络合物吸收曲线下端的某一波长,a).单组分测定：,两组份的三种叠加情况,b).,两组分共存时的分别测定：,选择参比波长和测定波长的条件是：待测组分在两波长处的吸光度之差要足够大，,干扰组分在两波长处的吸光度应相等,，这样测得的,吸光度差,只与,待测组分的浓度成线性关系,，而与干扰组分无关，从而消除了干扰。,等吸收点,-作图法,2,1,1,Y,X,A,相等,1,：参比波长,2,：测量波长,消除Y干扰,c）,混浊试液中组分测定：,试液为参比（不同波长,=40-60nm）消除试液中散射光的影响。,四、,导数分光光度法,导数分光光度法是利用自动电路对光谱进行求导，其,导数信号与浓度成正比,，即,同样,高阶导数光谱信号也与浓度成正比,。,提高分辨率,去除背景干扰,第六节 吸光光度分析法的应用,一、痕量金属分析,对,痕量金属元素,的定量分析是吸光光度法的一个重要应用领域；,几乎所有的金属离子,都能与特定的化学试剂作用形成有色化合物，通过吸光光度法可对金属离子进行测定。,二、临床分析,传统的比色反应技术，在临床分析中得到广泛应用。,例如：血清中的尿素或葡萄糖、酶或胆甾醇,三、食品分析,水果汁中果糖的测定,研究发现:果糖在盐酸的作用下可生成甲基糠醛，通过对,果糖,在盐酸介质中的吸收光谱进行扫描，发现在波长,291 nm处有最大吸收,;,果糖浓度在0一30,g/mL范围内服从朗伯-比尔定律,。利用该方法用紫外分光光度法可以测定苹果鲜汁、鸭梨鲜汁和橘子鲜汁中的果糖含量。通过研究发现该方法具有很好的选择性和较高的灵敏度，适用于组成较复杂的分析对象中的果糖含量测定。该方法具有简便、快速、灵敏，对环境不造成污染，样品无需预处理等特点。,运用一阶导数紫外分光光度法直接测定食品中的硝酸盐，以,干扰物亚硝酸盐的一阶导数值为0处的波长,作为,待测物硝酸盐的测定波长,。结果表明，硝酸盐浓度在,0一5,g/mL范围内符合朗伯-比耳定律,;以一阶导数值对硝酸盐浓度作线性回归，回归系数在0.9983一0.9998之间。该法最低检出限为,2ng/mL,，灵敏度较高.,食品中硝酸盐的测定,1.,弱酸和弱碱解离常数的测定,例如,一元弱酸 K,a,的测定,H,+,A,-,K,a,=,HA,做法,：先配 c,总,=c,HA,+A,相等而pH不同的HA溶液，用pH计测各个溶液的pH值，然后在,max,HA，,Max,A,-,用b=1cm，测定各溶液的A值,HA=H,+,+A,-,四、其他应用,A=,HA,HA+,A,-,A,-,=,HA,c,HA,+,A,-,c,A,-,H,+,K,a,=,HA,c+,A,c (1),H,+,+K,a,H,+,+K,a,设：,高酸度,，pH小，弱酸全部以酸的形式存在，即 c=HA，从而测A,HA,=,HA,c,低酸度,，pH大，弱酸全部以共轭碱形式存在，即 c=A,-,，从而测A,A,=,A,c,(1)式整理：,A,HA,H,+,A,A,-,K,a,A=+.(2),H,+,+K,a,H,+,+K,a,故：,H,+,A,-,A,HA,-A,K,a,=H,+,.(3),HA A-A,A,-,(3)取负对数：,A-A,A,-,pK,a,=pH+lg .(4),A,HA,-A,2.配合物组成的测定,1.,摩尔比法（饱和法）,做法：固定 c,M,，改变 c,R,，就可得一系列 c,R,/c,M,值不同的溶液，测A作图,n,A,曲线转折点不敏锐，是由于络合物解离造成的,2.,等摩尔连续变换法,做法：c,M,+c,R,=c，改变 c,M,与 c,R,的相对比值，使 c,M,:c,R,=10:0，9:1，8:2.1:9，0:10,n,此,法适用于只形成一种组成且解离度较小的稳定络合物,精品课件,！,精品课件,！,3.,斜率比法,感谢观看,