淋巴细胞的分离、计数.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,淋巴细胞的分离、计数,中山医学院免疫学教研室,201,3,-04,实验目的和要求,掌握,外周血单个核细胞分离的方法,掌握,细胞计数的方法,实验原理,外周血中细胞种类,细胞,密度,红细胞和多形核白细胞 1.092,淋巴细胞和单核细胞,（,PBMC,）,1.075-1.092,血小板,1.030-1.035,葡聚糖泛影葡胺密度梯度离心法：,根据外周血中各种血细胞比重不同使不同密度的,细胞呈梯度分布，从而分离出,PBMC,。,实验材料,1.,肝素抗凝血,2.,Hanks,液,3.,淋巴细胞分离液（,F-H,),4.,水平离心机，加样枪,5.,显微镜，吸管,6.,细胞计数板，台盼蓝计数液,实验方案,抽取外周血,分离,单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）（,PBMC,）,细胞计数,实验步骤,肝素抗凝静脉血,1.,5ml,加,1.,5ml,Hanks,液稀释,置于,2,ml,淋巴细胞分离液上,(交界液面：一定,不要打乱),稀释后的抗凝血,淋巴细胞分离液,注意,：稀释的肝素抗凝血，,沿管壁轻轻叠加于,分离液上，使两者形成一个清晰地界面。,细胞计数板,细胞计数,原则：,数上不数下，数左不数右,长,1mm,宽,1mm,结果计算,2,2个大方格内细胞总数,单个核细胞浓度,（细胞数/ml),10,4,10,=,(,稀释倍数,）,活细胞百分率,=,活细胞数,细胞总数,100%,细胞活力检测：,（,死细胞被染成蓝色，活细胞不着色,）,细胞数量：,方法评价,纯度在90%以上,淋巴细胞约占90-95%,细胞收获率可达80-90%,活细胞百分率在95%以上,密度梯度离心法,分离外周血单个核细胞：,细胞计数的仪器,血细胞分析仪，临床常用,装有自动显微镜观察系统,自动细胞计数仪,Thanks!,注意事项,请将,带血,的试管，吸管收集放置于实验室后的,红色消毒盆,中。,值日生负责收集加样枪，计数板，洗耳球，台盼蓝计数液，,Hanks,液。打扫实验室卫生。,