实验九_过氧化氢酶(CAT)活性的测定.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验九,过氧化氢酶的活性测定,紫外吸收法,原,理：,H2O2,在,240nm,波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度,(A240),随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。,材料与设备,实验材料,:,海桐叶,实验器材：紫外分光光度计；离心机；研钵；,0.5ml,刻度吸管,2,支，,2ml,刻度吸管,1,支；,10ml,试管,3,支；恒温水浴；,试,剂：,O.1mol/L,过氧化氢；,，,0.1mo1/L,磷酸缓冲液,pH7.0,、,pH7.8,操作步骤：,1,称取植物材料,0.3,g,，,加入,，,0.1mo1/L,磷酸缓冲液,(pH7.0),6ml,(,分三次加入，最后两次用于洗研钵,),，在研钵中研磨成匀浆，以,6000r,min,离心,15,分钟，倾出上清液。,操作步骤：,2.,测定：取,10ml,试管,3,支，其中,2,支为样品测定管，,1,支为空白管，按下表顺序加入试剂。,紫外吸收法测定,H,2,O,2,样品液配置表,管 号,S1,S2,S3,粗酶液,(ml),0.2,0.2,0.2,pH7.8,磷酸,(ml),1.5,1.5,1.5,蒸馏水,(ml),1.0,1.0,1.0,操作步骤：,3,测定,25,预热后,逐管加入,0.3ml 0.1mol/L,的,H,2,O,2,，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，,240nm,下测定吸光度，每隔,1min,读数,1,次，共测,2min,，记录数据。,4.,按下式计算酶活性,。,结果计算：,以,1min,内,A,240,减少,0.1,的酶量为,1,个酶活单位（,u,）。,过氧化氢酶活性,(u/gFW/min)=,式中：,A,240,=A,S0,-,A,S0,加入煮死酶液的对照管吸光值；,A,S1,A,S2,样品管吸光值；,Vt,粗酶提取液总体积（,ml,）；,V,1,测定用粗酶液体积（,ml,）；,FW,样品鲜重（,g,）；,0.1A,240,每下降,0.1,为,1,个酶活单位（,u,）；,t,加过氧化氢到最后一次读数时间（,min,）。,作 业：,1.,写实验报告,2.,问题：,（,1,）影响过氧化氢酶活性测定的因素有哪些,?,（,2,）过氧化氢酶与哪些生化过程有关,?,