LC6_QUT[1].ppt

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,液相色谱的定性及定量技术,Waters LC School,培训教材,色谱峰定性,鉴别每个色谱峰,通过比较保留值(通常是保留时间)的方法，找到各色谱峰所对应的组份,大多数情况下用比较保留时间来定性,即所谓：,保留时间相同，可能是同样的组份,保留时间不同，肯定不是同样的组份,用保留时间定性,用,“,标样,”,的保留值定出被测组份的位置,进一步的确认,标准加入,同时用其他方法,其他色谱方法（改变机理，如：用不同的色谱柱）,其他检测器,PDA，,光谱图比较、谱库检索,MS，,质谱图解析、谱库检索,其他仪器方法,标准加入法举例,废水样品中五氯苯（,PCP）,的分析,梯度曲线,梯度曲线,PCP,4,ppm,3,ppm,2,ppm,1,ppm,峰一致性的确认,确认色谱峰的纯度,保证每个色谱峰下只有一个被测的组份,检查是否有共流出的物质（杂质）干扰,色谱峰纯度确认的方法,用光电二极管矩阵检测器比较光谱图,峰纯度鉴定，双波长,Ratio,996,的纯度角理论,用二极管矩阵检测器比较光谱图,苯的色谱及光谱图（,Index）,996的纯度角理论,996的纯度角理论可快速得到纯度结果,定量分析的具体内容,确定样品的类型，主要成分/痕量成分,使分析条件的分离度（,R）,大于：1.5,色谱峰的定性，峰一致性测定,检测限及定量限：确定灵敏度及线性范围,用标样建立标准曲线,检查方法的准确度及精确度,用标样定期检查方法,痕量分析,如信/噪比不够，定量的精确度会受影响，因此要：,分析前浓缩样品,选择高灵敏度检测器,用衍生法,使色谱体系最优化,使用短的微径柱（减少样品的稀释）,使用高效色谱柱,使,k,值尽可能小,增加进样体积和浓度,使用低流速（,N,增加）,采用梯度淋洗,液相色谱定量的精度,测量的精度,定量的准确度,误差,E=O-T,O,观测到的值,T,真值,液相色谱定量精度的计算,测量精度的计算,准确度的衡量,色谱方法是相对定量方法，如不考虑损失及杂质干扰等的因素，其结果同,“,标样,”,的准确程度关系密切,一般的衡量方法是做回收率实验或不同方法之间的比较：相关系数,相关系数：,其中，,X,及,Y,分别代表不同方法的实验值及平均值,准确度的影响因素,标样的可靠性及其配制的准确度,色谱方法的可靠性,色谱泵的精确度（,GPC,的影响更大）,进样器的准确度，进样技术,流速与检测面积的关系,如在不改变系统效率的情况下，流速降低峰高几乎不变，然而峰面积与流速相应成反比增加。,溶剂强度、,K,及峰高的关系,柱效和峰高的关系,如其他因素不变，如：,K，,a,，,流速等，柱效增加峰面积基本不变，而峰高增加。,常用的定量方法,峰面积百分比法,由于检测技术的影响，在液相色谱中不常用,外标法,在液相色谱中用的最多,内标法,准确，但是麻烦,在标准方法中用的最多,外标法定量,配制一系列已知浓度的标样,外标法定量（二）,实际色谱图,标准曲线,外标法定量（三）,计算公式,特点,无需各组份都被检出、洗脱,需要标样,标样及样品测定的条件要一致,进样体积要准确,进样技术对定量结果的影响,固定体积定量管（,loop）,的进样器精度最好，其准确度取决于进样器的结构,可变体积进样器的精度取决于操作者的技术，准确度通常更高，因为进样用的注射器结构的准确度高，操作者的技术水平也有影响，但不大,WISP,自动进样器精确度及准确度都可达到定量管进样器的水平，因为其每一微升分27步以上。然而它又保留了可变体积进样器的优点,内标法定量（一）,配制一系列浓度的标样，其中加有内标样,内标法定量（二）,实际色谱图,标准曲线,内标法定量（三）,计算公式：,特点：,无需各组份都被检出、洗脱,需要标样，需要内标样,结果与进样体积无关,内标法定量（四）,对内标物的要求,化学结构与待测组分相似(同系物、异构体),在样品中不存在,不与样品中组份发生任何化学反应,保留值与待测组分接近,浓度（响应值）与待测组分相当,其色谱峰与其他色谱峰分离好,峰面积百分比法定量,公式：,特点：,各组分要全部流出、全部被检测，并对检测器的响应值一样简单，液相色谱目前很难做到这点,与进样量无关,不需标样,简单,可接收的检测范围,校正曲线只有在建立这条曲线的浓度范围内有效，高或低于这些点都可能引起计算错误,定量校正曲线,曲线,A：,因在零浓度时仍有色谱峰，可能有杂质未分开,曲线,B：,在此浓度内，检测器的响应值是非线性的,曲线,C：,可接受的理想状态，实际情况应是其延长线到零点,曲线,D：,表明有样品的损失，可能是色谱柱的非特征吸附，也 可能是样品制备时的损失,