药物的含量测定方法与验证2021推选.ppt

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,药物的含量测定方法与验证,Section 1,定量分析方法,(,讨论,),Section 2,定量分析样品前处理方法,Section 3,药品质量标准分析方法验证,Section 1,Methods of,quantitative analysis,容,量,分,析,法,经典化学分析,重,量,分,析,法,现代仪器分析技术,光,谱,分,析,法,色,谱,分,析,法,电,化学,分,析,法,第一节 定量分析方法的分类与特点,（一）容量分析法的,特点：,方法简便易行；,方法耐用性高；,测定结果准确；,方法专属性差。,（二）适用范围：,适用于化学原料药物的含量测定，较少用于药物制剂的含量测定。,一、容量分析法,（三）容量分析法的,计算,问题,滴定度,（,T,）的概念：每,1ml,规定浓度的滴定液所相当的被,测药物的量,(mg),。,2.,滴定度的计算,aA,+,bB cC,+,dD,T,=,ma/bM,3.,百分含量的计算,（,1,）直接滴定法 含量（,%,）,=,V,F,T/W,100%,F,=,实际标定的浓度,/,规定的浓度,（,2,）间接滴定法（回滴定法；剩余滴定法）,含量（,%,）,=,（,V,O,V,B,),F,T,/,W,100%,P146,示例,二、光谱分析法,（一）紫外,-,可见分光光度法（,200nm,760nm),灵敏度高，可达,10,-4,g/ml,10,-7,g/ml,1.,特点 准确度高，,RSD,（,%,）为,2%,5%,仪器价格低廉，操作简单,专属性较差,2.,朗伯,-,比耳定律,A=ECL,3.,仪器校正和检定,波长校正用汞灯中较强谱线,237.38,253.65,275.28,296.73,与或用仪,器中氘灯的与进行校正。,吸收度的检定：用,K,2,CrO,72,SO,4,液至,1000ml,波长,(nm)235(,最小,)257(,最大,)313(,最小,)350(,最大,),E,1%,1,cm,杂散光检查：试剂 浓度,(g/ml),测定波长 透光率,(%),NaI 1.00 220nm,NaNO,2,5.00 340nm,4.,对溶剂的要求,:,220,240nm 241,250nm 251,300nm 300nm,以上,溶剂,+,吸收池,A,0.41,0.20,0.10,5.,测定方法,要求供试品溶液的,A,应在,0.3,对照品比较法：,C,x,=(,A,x,/,A,r,),C,r,;,含量,%=,C,x,D/W,100%,常用方法 吸收系数法：含量,%=(,E,1%,1,cm,),x,/(,E,1%,1,cm,),r,100%,计算分光光度法：,V,A,的三点校正法,（二）荧光分光光度法,灵敏度高,，可达,10,-10,g/ml,10,-12,g/ml,在,低浓度,进行测定，防止自熄灭,1.,特点,用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减,灵敏度高，但,干扰因素多,，必须做空白试验,制备荧光,衍生物,，可提高其灵敏度和选择性。,用样品,量少,，操作,简单,，方法,快速,，应用,范围,较,广,。,三、色谱分析法,按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色谱,按分离方法分为：,PC,；,TLC,；柱色谱；,GC,；,HPLC,。,（一）,HPLC,法,1.,对,HPLC,仪器一般要求 色谱柱、流动相按品种项下要求。,色谱柱的理论板数：,n,=5.54(,t,R,/,W,h/2,),2,2.,系统性试验 分离度：,R,=2,（,t,R1,t,R2,)/(,W,1,+,W,2,);,要大于,拖尾因子：,T,=,W,/2,d,1,应在,0.9,内标法加校正因子测定供试品中主成分含量,3.,测定方法,标准曲线法,外标法测定供试品中主成分含量,外标一点法,（二）,GC,法,1.,对,GC,仪器一般要求,载气为,氮气,；色谱柱为填充或毛细管柱,色谱柱的理论板数：,n,=5.54(,t,R,/,W,h/2,),2,2.,系统性试验 分离度：,R,=2,（,t,R1,t,R2,)/(,W,1,+,W,2,);,要大于,拖尾因子：,T,=,W,/2,d,1,应在,0.9,1.05,内标法加校正因子测定供试品中主成分含量,3.,测定方法,标准曲线法,外标法测定供试品中主成分含量,外标一点法,应用示例：,Ch.P(2000),收载的月桂卓酮、维生素,E,及其片剂、注射剂、,甲酚皂溶液等均采用,GC,法中的内标法加校正因子测定含量。,高效液相色谱法,一 高效液相色谱法发展概况,高效液相色谱法（,high performance liquid chromatography,，,HPLC,）：采用高压输液泵将具有不同极性的流动相泵入装有固定相的色谱柱进行分离测定的色谱方法。,色谱柱的发展,检测器的发展,二,HPLC,分析系统的硬件组成,1,基本组成：,输液系统 进样系统 色谱柱 检测器 数据处理系统,输液泵,检测器,进样器,色谱柱,柱温箱,流动相,数据处理,高效液相色谱法,高效液相色谱仪的流程示意图,高效液相色谱法,（一）高压输液系统,应用最多的是往复式柱塞泵（恒流泵）。,1.,高压输液泵应具备如下性能：,有足够的输出压力,;,输出流量恒定无脉动；,输出流动相的流量范围广且流速可调。,2.,色谱泵的保养,流动相要过滤,;,常用缓冲液时，停泵前要用水冲洗，并用水冲洗柱塞杆清洗孔,;,更换流动相时，要保证两种溶剂的互溶性，如不互溶，要用一种中间溶剂过渡,;,使用前，应先确认泵头内没有气体，如有气体要排气。,3.,梯度洗脱：流动相中含有两种或两种以上的不同性极性的溶剂，在梯度过程连续或间断改变流动相的组成，将样品中的所有组分可在最短的分析时间内得到满意分离。,1.,手动进样器（六通阀）：,7725i,手动进样器,注入方式：,1,）全量注入：上样量必须大于,loop,体积的,3-10,倍,2,）部分注入：,定量管体积的一半以下,（二）进样系统,7725,手动进样器,背面,7725,手动进样器,前面,进样前,进样,进样后,2.,全自动进样器,平板式、圆盘式等,一次性注射器,针式（头）过滤器,样品瓶,3.,进样前准备,样品过滤,1.,标准柱型：内径为或，长为,15-30cm,的直形不锈钢柱。,柱填料,颗粒度,(dp),：颗粒度越小，柱效越高,(,传质好，涡流扩散小），但柱压越高,颗粒分布：颗粒分布越宽，柱效低,颗粒形状,球型柱效高、重现性好、柱床结构均匀,无定型：柱床结构不均匀、流动相线速度不均匀，谱带扩展,（三）分离系统,色谱柱,3.,色谱柱的使用范围,硅胶填料：,pH2-8,4.,色谱柱本身提高柱效的方法,减小填料的颗粒度,找到最佳的流速,合适的温度,降低溶剂的粘度,增加柱长,填料颗粒度对柱效的影响,5.,液相色谱柱的使用和保养,（,1,）新色谱柱,拿到一根新色谱柱时，先测柱效与柱压,保留在新色谱柱上测得的色谱图，并记录条件,定期检测柱效,（,2,）色谱柱的保养,样品方面,除去微粒及杂质,溶解性效应,:,了解样品在流动相中的溶解度，如样品的溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶解度，防止其在流动相中析出。,了解样品与色谱柱的基质,/,填料是否相互作用,流动相方面,除去微粒,纯度的要求,超纯水,溶剂：色谱纯，并与填料相匹配,缓冲液的,pH,值、浓度,流动相对样品的溶解度,流动相过滤器,流动相入口过滤头,在线的保护装置,给色谱柱提供物理的保护,除去样品及流动相中的颗粒,给色谱柱提供化学的保护,防止分析柱被化学污染,装置,在线过滤器,保护柱,预柱,在线过滤器,（,3,）色谱柱的清洗,盐的清洗,对所做的样品要有充分的了解,用对该样品洗脱能力最强的流动相清洗,硅胶柱的一般清洗方法,先用甲醇洗去极性杂质,用干燥的二氯甲烷、正庚烷,100-200ml,依次活化,键合相柱,(,烷基,),的一般清洗方法,20,倍柱体积的：水,-,甲醇,-,氯仿,-,甲醇,-,水依次冲洗,水,甲醇,异丙醇,二氯甲烷,异丙醇,甲醇,水,（,4,）色谱柱的存放,存放前的处理,除去杂质、盐,合适的存放溶剂,避免色谱柱床的干枯,防止细菌生长,避免机械震动,注意存放的温度,1.,对检测器的要求,高灵敏度,可重现的设置,宽的线性响应,容易使用及保养,自我诊断功能,（四）检测系统,液相常用检测器使用率,2.,液相常用检测器,（,l,）紫外检测器,（,ultraviolet-visible detector,，,UVD,）,工作原理：由光源产生波长连续可调的紫外光或可见光，经过透镜和遮光板变成两束平行光，无样品通过时，参比池和样品池通过的光强度相等，无信号产生；有样品通过时，由于样品对光的吸收，参比池和样品池通过的光强度不相等，有信号产生。,根据朗伯,比尔定律，样品浓度越大，产生的信号越大。,可调波长检测器光路示意图,种类：固定波长检测器、可调波长检测器、光电二极管阵列检测器,（,diode-array detector,DAD,）,DAD,光路示意图,（,2,）荧光检测器,（,fluorescence detector,FD,）,：适合于稠环芳烃、氨基酸、胺类、维生素、蛋白质等荧光物质的测定。灵敏度非常高，检出限可达,10,-12,-10,-13,g/ml,，比紫外检测器高,2-3,个数量级，选择性高，适合于痕量分析。,FD,与,UVD,灵敏度比较,FD,光路示意图,FD,与,UVD,选择性比较,（,3,）示差折光率检测器,（,Differential Refractive Index Detector,RID,）,：通过连续检测参比池和测量池中溶液的折射率之差来测定试样浓度的检测器。属于通用型检测器。折光率较高的成分如糖类、皂苷类成分常采用此种检测器。但灵敏度较低，要求样品浓度较高。,RID,光路示意图,（,4,）蒸发光散射检测器,（,Evaporative Light Scattering Detector,，,ELSD,）,原理,第一步：雾化；,第二步：蒸发；,第三步：检测。,蒸发光散射检测器的优点,灵敏度高。,对流动相系统温度变化影响不敏感。,可进行梯度洗脱。,通用型检测器,没有流动相和杂质的紫外吸收干扰。,限制因素：受样品组分和流动相挥发性的影响,ELSD,示意图,3.,常用检测器性能比较,HPLC,通用检测器：,RID,、,ELSD,、,MSD,三,.,化学键合相色谱法,（,Chemical bonded phase chromatography,，,BPC,）,化学键合相：固定液与载体间通过化学反应键合成固定相。,1.,分类（按键合的有机分子官能团的不同）,非极性键合相,极性键合相,离子性键合相,2.,特点：柱子不,“,娇,”,；耐溶剂冲洗；热稳定性好。,高效液相色谱法,3.,非极性键合相色谱（又称反相键合相色谱）,（,1,）常用固定相,十八烷基硅烷键合硅胶（,ODS,，,C,18,）,辛烷基硅烷键合硅胶（,C,8,）,pH,稳定范围：,2-8,（,2,）流动相,标准溶剂系统：水甲醇,4.,极性键合相,高效液相色谱法,5.,离子对色谱,离子抑制技术,有机弱酸，弱碱物质,离子对技术,强酸（碱）性物质,（,1,）分离原理,流动相中加入反离子，使与组分离子形成疏水离子对，在固定相上有适宜的保留。,A,+,+B,-,（,A,+,B,-,）,A,+,组分离子，,B,-,反离子，,A,+,B,-,离子对,高效液相色谱法,（,2,）反相离子对色谱条件选择,固定相：,C18,、,C8,柱,流动相：含一定反离子、一定,pH,值的水,-,甲醇,反离子的选择,酸性药物（,A,-,）：选用季胺盐作为离子 对试剂（左右）,碱性药物（,A,+,）：选用烷基磺酸,/,硫酸 盐作为离子对试剂（左右）,高效液相色谱法,四,.,基本参数,色谱峰示意图,高效液相色谱法,五、,HPLC,定量方法,Section 2,样品分析的前处理方法,含卤素有机药物,（,Halogen-containing drugs,）：指药物分子结构中所含,卤素直接与芳环或脂肪链相连,者，而,不包括,某些有机药物的卤酸盐或氢卤酸盐，结构特点：,CX,。,含金属有机药物（,Organo-metal drugs,）,：包括,有机金属药物（,Organic metals,）、,有机金属盐（,Organic metallic salts,）等。,前处理方法,不经有机破坏的分析方法,经有机破坏的分析方法,诺氟沙星,醋酸氟轻松,磺溴酞钠,含卤素有机药物,含卤素有机药物的分析方法,直接回流后测定法,碱性或酸性还原后测定法,氧瓶燃烧分解后测定法,含卤素有机药物,含金属有机药物,结构与分类,含金属的有机药物：,金属原子不与碳原子直接相连,，通常为有机酸及酚的金属盐或配位化合物。,如酒石酸锑钾、葡萄糖酸锑钠、富马酸亚铁,有机金属药物：金属原子,直接与碳原子以共价键相连,，结合比较牢固。,如卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利,酒石酸锑钾,葡萄糖酸锑钠,含金属有机药物,卡巴胂,汞撒利,含金属有机药物,富马酸亚铁,含金属有机药物定量分析前的处理方法,不经有机破坏的分析方法,直接测定法；经水解后测定法；经还原,-,汞齐化后测定法,经有机破坏的分析方法,湿法破坏,(,硝酸,-,高氯酸法,;,硝酸,-,硫酸法,;,硫酸,-,硫酸盐法等,),；干法破坏,含金属有机药物,1.直接测定法：适用于金属原子不直接与碳原子相连的含金属有机药物或某些CM键结合不牢固的有机金属药物。,例 富马酸亚铁的含量测定 Ch.P.(),Fe,2+,+Ce,4+,Ce,3+,+Fe,3+,O,O,C,C,H,O,H,C,C,O,+,Fe,2+,Fe,2+,+e,-,Fe,3+,红色,浅蓝色,不经有机破坏的分析方法,经水解后测定法,例 硬脂酸镁的测定 Ch.P.（）,-用硫酸水解后测定,Mg(C,17,H,35,COO),2,+H,2,SO,4,MgSO,4,+2 C,17,H,35,COOH,2NaOH+H,2,SO,4,Na,2,SO,4,+2H,2,O,不经有机破坏的分析方法,对所做的样品要有充分的了解,但灵敏度较低，要求样品浓度较高。,芳酸类药物的含量测定,F=实际标定的浓度/规定的浓度,保留在新色谱柱上测得的色谱图，并记录条件,（一）紫外-可见分光光度法（200nm760nm),(CH3)2-CO+3NaCl+HCOONa+2H2O,Requirements,-用硫酸水解后测定,NaIONaIO3+2NaI NaI+Br2NaIO3,（2）荧光检测器（fluorescence detector,FD）：适合于稠环芳烃、氨基酸、胺类、维生素、蛋白质等荧光物质的测定。,经有机破坏的分析方法,溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等的测试方法。,Section 1 Methods of quantitative analysis,日间精密度：是不同次测定的精密度。,例 三氯叔丁醇的测定 Ch.P.（）,-间接银量法，适用于卤素原子结合不牢固的药物（如卤原子和脂肪碳原子相连）。,NaCl,+AgNO,3,AgCl,+NaNO,3,AgNO,3,+,NH,4,SCN,AgSCN +,NH,4,NO,3,（淡棕红色）,Fe,3+,+SCN Fe(SCN),2+,CCl,3,-,C(CH,3,),2,-,OH+4NaOH,回流,(CH,3,),2,-,CO+,3NaCl,+HCOONa+2H,2,O,不经有机破坏的分析方法,例 泛影酸的测定 Ch.P.(),-银量法测定，适用于测定结构中碘与苯环直接相连，且一个苯环上含多个碘原子的含卤素有机药物。,C,O,O,H,I,N,H,C,O,C,H,3,I,I,H,3,C,O,C,H,N,+11NaOH +3Zn,回流,C,O,O,Na,N,H,2,H,2,N,+3NaI+2CH,3,COONa+,NaI+AgNO,3,AgI+NaNO,3,(,曙红指示剂显桃红色,),3.,碱性或酸性还原后测定法,不经有机破坏的分析方法,1.,凯氏定氮法,(,湿法破坏,),经有机破坏的分析方法,(1),原理,含氮供试品与浓硫酸共热，供试品中所含氮转变成氨，并与硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸铵，用氢氧化钠碱化后，释出氨，随水蒸气馏出，用硼酸溶液或定量的酸吸收后，用标准酸液或标准碱液滴定，用空白试验校正。,(2),实验步骤,消解,(,凯氏烧瓶中进行,),将样品、,H,2,SO,4,、,K,2,SO,4,、,CuSO,4,放入凯氏烧瓶中一起加热，有机含,N,化合物中的,N,全部转变成,NH,3,并以铵盐的形式固定。,H,2,SO,4,：氧化剂和炭化剂。产生,SO,2,和,SO,3,，,消解一般在通风橱中进行。,K,2,SO,4,：提高,H,2,SO,4,沸点，缩短消解时间。,CuSO,4,：催化剂，使消解速度加快。,消解产物：,(NH,4,),2,SO,4,、,NH,4,HSO,4,经有机破坏的分析方法,蒸馏与吸收,加入,NaOH,后蒸馏,第一法（常量法）,第二法（半微量法）,吸收液：,2%,硼酸溶液。,(NH,4,),2,SO,4,+2NaOH,Na,2,SO,4,+2NH,3,+2H,2,O,NH,4,HSO,4,+NaOH,NaHSO,4,+NH,3,+H,2,O,NH,3,+H,3,BO,3,NH,3,.H,3,BO,3,经有机破坏的分析方法,凯氏定氮法常量法试验仪器图,经有机破坏的分析方法,凯氏定氮法半微量法试验仪器图,蒸馏装置,经有机破坏的分析方法,经有机破坏的分析方法,测定,滴定液：,2,SO,4,液,每,1ml,的,2,SO,4,液,=,的,N,指示剂：甲基红,-,溴甲酚绿混合指示剂,终点颜色：灰紫色,2NH,3,.H,3,BO,3,+H,2,SO,4,(NH,4,),2,SO,4,+2H,3,BO,3,经有机破坏的分析方法,2.,氧瓶燃烧分解后测定法（干法破坏）,（,1,）原理,Oxygen flask combustion method,：,氧瓶燃烧法，将,有机药物,放入充满,氧气,的,密闭,燃烧瓶中进行,燃烧,，并将燃烧所产生的欲测物质,吸收,于适当的吸收液中，采用适宜的,分析,方法进行鉴别、检查或含量测定。,适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析。,特点：简便、快速、破坏完全，适用于微量样品。,经有机破坏的分析方法,（,2,）仪器与材料,仪器装置,燃烧瓶为,500,、,1000,或,2000ml,无色、磨口、厚壁、硬质玻璃锥型瓶,；瓶塞空心，底部熔封,铂丝,一根，下端呈螺旋状或网状。,经有机破坏的分析方法,铂金丝,硬质玻璃燃烧瓶,样品,称样用材料及称样,A.,固体样品：无灰滤纸,B.,液体样品：纸袋,C.,软膏类样品：蜡油纸，外层用无灰滤纸,经有机破坏的分析方法,氧气,吸收液,作用：将样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒等，定量地吸收并转变为一定的便于测定的价态。,B.,吸收液的选择：多为水或,NaOH,溶液，少数为,NaOH,硫酸肼饱和溶液、硝酸溶液、,H,2,O,2,等,经有机破坏的分析方法,（,3,）操作方法,样品的准备,取样品适量，精密称定后按规定方法包裹，固定于铂丝下端的网内或螺旋处。,燃烧瓶燃烧前的准备,洗净后，按各药品项下的规定加入吸收液，将瓶口用水湿润，小心急速地通入氧气,1min,，立即用表面皿覆盖瓶口。,经有机破坏的分析方法,样品的燃烧,点燃包有供试品的滤纸尾部，迅速放入燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少量,封闭瓶口,，待燃烧完毕，充分,振摇,，使生成的烟雾,完全,吸入吸收液中，,放置,15min,，用水少量,冲洗,瓶塞及铂丝，,合并,洗液及吸收液，同法另做,空白试验,。,采用适宜的方法进行鉴别、检查或含量测定。,经有机破坏的分析方法,（,4,）注意事项,根据样品量选用适宜大小的燃烧瓶。,待分解样品量,燃烧瓶的体积,35mg,（微量分析）,150250ml,2030mg,（半微量分析）,300500ml,5060mg,1000ml,0.60.7g,或更多,2000ml,或特殊结构的燃烧瓶,经有机破坏的分析方法,测定含氟有机药物时，用石英制燃烧瓶。,铂丝起催化作用。,应同时做空白试验。,注意防爆。,燃烧要完全。,烟雾完全被吸收。,经有机破坏的分析方法,（,5,）应用,例 碘苯酯的含量测定,原理,碘苯酯用氧瓶燃烧分解，转变为碘化物，继而氧化为游离的碘，并被定量地吸收于吸收液中，和氢氧化钠反应，生成碘化物与碘酸盐；,2,碘苯酯,I,2,NaIO+NaI,加入溴,-,醋酸溶液，使全部转变为碘酸盐；,NaIONaIO,3,+2NaI NaI+Br,2,NaIO,3,过量的溴以甲酸及通空气去除；,Br,2,+HCOOH HBr+CO,2,加入碘化钾，使与碘酸盐反应析出游离碘；,NaIO,3,+5I,-,3I,2,用硫代硫酸钠液滴定，碘与淀粉结合所显的蓝色消失即为终点。,I,2,+2Na,2,S,2,O,3,2NaI+Na,2,S,4,O,6,经有机破坏的分析方法,应用示例：碘苯酯的测定,1.,选择氧瓶燃烧法所必备的实验物品,A.,磨口硬质玻璃锥形瓶,B.,铂丝,C.,普通滤纸,D.,氢气,E.,无灰滤纸,习 题,2.,氧瓶燃烧法可用于,A.,含卤素有机药物的含量测定,B.,醚类药物的含量测定,C.,检查甾体激素类药物中的氟,D.,检查甾体激素类药物中的硒,E.,芳酸类药物的含量测定,3.1 Objective,证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求，方法验证过程和结果均应记载在药品标准起草和修订说明中。,药品质量标准起草时，分析方法需经验证。,药物合成方法变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，分析方法需经验证。,Section 3 Validation of analytical method,需验证的分析项目,1.,鉴别试验；,2.,杂质定量或限度检查；,3.,原料或制剂中有效成分含量测定；,4.,制剂中其它成分（降解产物、防腐剂等）的测定；,5.,溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等的测试方法。,Section 3 Validation of analytical method,3.2,验证内容,准确度、精密度（重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。,1.Accuracy,Accuracy,：,准确度，是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示。,测定回收率,R,（,recovery,）的具体方法可采用,“,回收试验法,”,和,“,加样回收试验法,”,。,数据要求：规定的范围内，至少用,9,次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次。,Section 3 Validation of analytical method,（一）含量测定方法的准确度,1.,原料药,可用已知纯度对照品或样品进行测定；,或与已建准确度的另一方法测定的结果进行比较。,2.,制剂,要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入原料对照品的方法作回收率试验，然后计算,RSD,。,具体做法：测定高、中、低三个浓度，,n=3,共,9,个数据来评价，回收率的,RSD,2%,；用,UV,和,HPLC,发时，一般回收率可达,98%,102%,；容量法可达,99.7%,100.3%,。,Section 3 Validation of analytical method,（二）杂质定量测定方法的准确度,杂质定量：向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定，如果不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较。多采用色谱法测定。,Section 3 Validation of analytical method,2.,Precision,Precision,：,精密度，是指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。,用偏差（,d,）、标准偏差,(,SD,),、相对标准偏差,(,RSD,),（变异系数，,CV,）表示。,Section 3 Validation of analytical method,偏差（,d,）：,测量值与平均值之差,标准（偏）差（,SD,或,S,）：,相对标准（偏）差（,RSD,），也称变异系数（,CV,）：,Section 3 Validation of analytical method,（,1,）,重复性,在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度。,在规定的范围内，至少用,9,次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次或把被测物浓度当作,100%,，至少测,6,次进行评价。,Section 3 Validation of analytical method,（,2,）,中间精密度,同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果的精密度。考察随机变动因素的影响。,（,3,）,重现性,不同实验室，不同分析人员测定结果的精密度。当分析方法将被,法定标准,采用时，应进行重现性试验。,Section 3 Validation of analytical method,3.,Limit of detection,，,LOD,Limit of detection,：,检测限，系指试样中被测物能被检测出的最低量。是限度试验参数，无需定量测定。,常用,%,、,ppm,、,ppb,表示。,（,1,）非仪器分析目视法,（,2,）信噪比法：,用于能显示基线噪音的分析方法（仪器分析方法），将已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠检测出的最低量。一般以,信噪比（,S/N,）,31,或,21,时,的相应浓度或注入仪器的量确定检测限。,Section 3 Validation of analytical method,4.Limit of quantitation,，,LOQ,Limit of quantitation,：,定量限，,指样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精密度。,常用,%,、,ppm,、,ppb,表示。,常用信噪比法确定定量限，一般以,信噪比（,S/N,）为,101,时,相应的浓度或注入仪器的量进行确定。,Section 3 Validation of analytical method,5.Specificity,S,pecificity,：,专属性，指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下，采用的方法能准确测定出被测物的特性。,反映该方法在有共存物时对供试物准确而专属的测定能力，即为该法用于复杂样品分析时相互干扰程度的度量。,鉴别反应、杂质检查、含量测定方法，均应考察其专属性。,Section 3 Validation of analytical method,（一）鉴别反应,应能与其它共存的物质或相似化合物区分，不含,被测组分的样品均应呈现负反应。,（二）含量测定和杂质测定,色谱法和其他分离法，应附代表性的图谱，以说,明专属性。图中应注明各组分的位置，色谱法中分离,度应符合要求。在能获得杂质的情况下，可加到试样,中，考察对结果的干扰。在杂质和降解物不能获得的,情况下，可用以验证方法和药典方法进行对照；也可,用对试样加速破坏的方法，比较两种方法。,6.,Linearity,Linearity,：,线性，在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。,数据要求：应列出回归方程、相关系数和线性图。,Section 3 Validation of analytical method,7.,Range,Range,：,范围,，,指达到一定精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。,8.Robustness,Robustness,：,耐用性,，,指测定条件稍有变动时，结果不受影响的承受程度，为常规检验提供依据。,是衡量实验室和工作人员之间在正常情况下实验结果重现性的尺度。,Section 3 Validation of analytical method,9.Applications,鉴别试验除专属性、,检测限、,耐用性外，其它都不,要求。,杂质的限量检查除专属性、检测限、耐用性外，其它都不要求。杂质的定量测定除检测限外，其它都要求。,原料药、制剂中主成分及有效成分含量测定及溶出量测定中，除检测限、定量限外，其它都要求。,Section 3 Validation of analytical method,10.Requirements,（,1,）容量分析法：,用原料药精制品,(,含量,),或对照品考察方法的精密度，相对标准差一般应不大于；进行回收率试验，回收率一般在之间。,Section 3 Validation of analytical method,（,2,）,UV,法：,用适当浓度精制品测定，,RSD,一般不大于,1,。制剂的测定，回收率一般应在,98,102,之间。,线性：吸光度,A,一般在，浓度点,n,5,。,Section 3 Validation of analytical method,（,3,）,HPLC,法：,要求,RSD2,，回收率,98,102,之间。,专属性：要考查辅料、有关物质或降解产物对主药的色谱峰是否有干扰，如有干扰应设法排除。,（,4,）,生物样品分析,日内精密度：是同一次测定的精密度。所得,RSD,应争取达到,5,以内，但不能超,10,。,日间精密度：是不同次测定的精密度。所得,RSD,应控制在,15,以内。,药典附录,药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则,规定一般,RSD,应小于,15%,，在,LOQ,附近,RSD,应小于,20%,。,Section 3 Validation of analytical method,3.,精密度是指,A.,测得的测量值与真值接近的程度,B.,测得的一组测量值彼此符合的程度,C.,表示该法测量的正确性,D.,在各种正常试验条件下，对同一样品分析所得结果的准确程度,E.,对供试物准确而专属的测定能力,习题,4,药物杂质检查所要求的效能指标为,A.,准确度,B.,精密度,C,选择性,D.,检测限,E.,耐用性,习题,5.,相对标准差表示,A.,准确度,B.,回收率,C.,精密度,D.,纯净度,E.,限度,习题,6.,用信噪比法表示检测限时，信噪比一般应为,A.11,B.21,C.31,D.41,习题,7.,测定药物片剂的溶出度或释放度时，对所用测定方法应要求,A.,精密度,B.,定量限,C.,耐用性,D.,回收率,E.,检测限,习题,8.,药物鉴别试验所要求的效能指标为,A.,准确度,B.,精密度,C.,选择性,D.,检测限,E.,耐用性,习题,本章小节,掌握凯氏定氮法、氧瓶燃烧法。,掌握药品质量标准分析方法验证的各项内容及要求。,自学内容。,