选修一2.2土壤中分解尿素的细菌的分离和计数.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,课题2土壤中分解尿素的细菌的分离和计数,课题2 微生物的培养与应用,一、课题背景,1,、尿素的利用,尿素,是一种重要的,农业氮肥。,尿素,不能直接,被农作物,吸收。,土壤中的细菌将尿素,分解成氨,之后才能被植物利用。,2,、细菌利用尿素的原因,土壤中的细菌分解尿素是因为它们,能合成脲酶,CO(NH,2,),2,脲酶,+CO,2,NH,3,+,H,2,O,3,、常见的分解尿素的微生物,芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。,4,、课题目的,从土壤中分离出能够分解尿素的细菌,统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌,一,.,研究思路,.,筛选菌株,.,统计菌落数目,1,、实例：,启示：,寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。,原因：,因为热泉温度,70,80,0,C,，淘汰了绝大多数微生物只有,Taq,细菌被筛选出来。,DNA,多聚酶链式反应,是一种在体外将,少量,DNA,大量复制,的技术，此项技术要求使用,耐高温（,93,0,C,）的,DNA,聚合酶。,.,筛选菌株,2,、实验室中微生物的筛选原理：,人为提供有利于,目的菌株,生长的条件,(,包括营养、温度、,pH,等,),，同时抑制或阻止其他微生物生长。,15.0g,琼脂,1.0g,尿素,10.0g,葡萄糖,0.2g,MgSO,4,7H,2,O,2.1g,NaH,2,PO,4,1.4g,KH,2,PO,4,3,、,土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：,从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上,属于哪类培养基？,固体培养基,在此培养基中哪些作为碳源、氮源？,碳源：,葡萄糖、尿素,氮源：,尿素,选择培养基,培养基的,唯一氮源为尿素,，只有能合成,脲酶,的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。,缺乏,脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。,4,、培养基选择分解尿素的微生物的原理,选择培养基：,在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。,back,1,、显微镜直接计数：,利用,血球计数板,，在显微镜下计算一定容积,里,（,0.1mm,3,）样品中微生物的数量。,.,统计菌落数目：,左边和顶边及左边的两个顶点,缺点,不能区分死菌与活菌；,个体小的细菌在显微镜下难以观察；,2.,间接计数法（,活菌计数法）,（,1,）常用方法：,每克样品中的菌落数,(C,V),M,其中，,C,代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，,V,代表涂布平板时所用的稀释液的体积,(ml),，,M,代表稀释倍数。,1,个,活菌,1,个,落,菌,（,2,）原理：,稀释涂布平板法。,注意事项,为了保证结果准确，一般选择菌落数在,30,300,的平板上进行计数。,为使结果接近真实值可将,同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中,，经涂布，培养计算出菌落平均数。,统计的菌落往往比活菌的实际数目低。,设置对照的主要目的,是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。,.,设置对照：,A,同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。,一是由于土样不同,；,二是由于培养基污染或操作失误,。,小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。,方案一：,由其他同学用与,A,同学相同土样进行实验,方案二：,将,A,同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。,结果预测：,如果结果与,A,同学一致，则证明,A,无误；如果结果不同，则证明,A,同学存在操作失误或培养基的配制有问题。,二,.,实验的具体操作,.,土壤取样,取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。,.,制备培养基：,制备以尿素为唯一氮源的,选择培养基,。,从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土,3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好,的信封中。,应在火焰旁称取土壤,10g,。,在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行,分离不同的微生物采用不同的稀释度,三,样品的稀释,（二）样品稀释,（,1,）测,细菌,数：一般用,10,4,、,10,5,、,10,6,稀释液,（,2,）测,放线,菌：一般用,10,3,、,10,4,、,10,5,稀释液,（,3,）测,真菌,数：一般用,10,2,、,10,3,、,10,4,稀释液,原则：确保平板上的菌落数在,30300,之间。,.,取样涂布,实验时要对培养皿作好标记。注明培养时间、稀释度、培养物等。,如果得到了,2,个或,2,个以上菌落数目在,30,300,的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果,同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确,，需要重新实验。,.,微生物的培养与观察,在菌落计数时，每隔,24h,统计一次菌落数目。,选取菌落数目稳定时的记录作为结果，,以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。,培养不同微生物往往需要不同培养温度。,细菌：,30,37,培养,1,2d,放线菌：,25,28,培养,5,7d,霉菌：,25,28,的温度下培养,3,4d,。,微生物的培养与观察,关注菌落的形态、大小、边缘、隆起程度,、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。,关注菌落的,形态、大小、边缘、隆起程度,、颜色、质地,等等，都是区分细菌的重要手段。,三、通过,对照试验,进行结果分析与评价,对照组,现象,结论,未接种的选择培养基,对照的培养皿中无菌落生长,未被杂菌污染,牛肉膏蛋白胨培养基,牛肉膏培养基上的菌落数目大于选择培养基上的数目,选择培养基具有筛选作用,四,.,课题,延伸,在以尿素为唯一氮源的培养基中加入,酚红,指示剂。培养某种细菌后，如果,PH,升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素,。,大肠杆菌呈 黑色中心,有或无金属光泽,大肠杆菌在,伊红美蓝琼脂,(EMB),上典型特征,1.,使用选择培养基的目的是（）,A.,培养细菌,B.,培养真菌,C.,使需要的微生物大量繁殖,D.,表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别,2.,能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是,(),A.CO,2,和,N,2,B.,葡萄糖和,NH,3,C.CO,2,和尿素,D.,葡萄糖和尿素,实践训练,C,D,3.,下列说法不正确的是（）,A.,科学家从,70,80,度热泉中分离到耐高温的,TaqDNA,聚合酶,B.,统计某一稀释度的,5,个平板的菌落数依次为,M1,、,M2,、,M3,、,M4,、,M5,，以,M3,作为该样品菌落数的估计值,C.,设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度,D.,同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。,4.,为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（）,A.,较多的氮源物质,B.,较多的碳源物质,C.,青霉素类药物,D.,高浓度食盐,B,C,