组织学与胚胎学_65页.ppt

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,组织学与胚胎学,组织学,Histology,胚胎,学,Embryology,组织胚胎学的两端：,组织学之细胞学，,cytology,，现在发展成细胞生物学。,胚胎学，现在发展成发育生物学。,都是前沿学科。,课程安排,细胞,cell-,细胞学,cytology,组织,tissue-,基本组织学,器官,organ-,器官组织学,胚胎学,组织学,histology,主要方法,固定组织研究,活组织研究,观察手段,光学显微镜,电子显微镜,光学显微镜石蜡切片法,石蜡切片：,paraffin section,固定,fix,切片,section,染色,dye,固定,：,将组织用化学试剂浸泡，使组织内蛋白质等成分凝固或沉淀,。,染色,：组织中某些成分与染料化学结合或物理吸附而显色。,固定到切片（常用）,固定,脱水,-,梯度乙醇,透明,-,二甲苯,透蜡,-,石蜡,包埋（,蜡块）,切片,（,5m,）,切片到观察（常用）,脱蜡,-,二甲苯,入水,-,梯度乙醇,苏木精染色,梯度乙醇到,95%,伊红染色,脱水,透明,封片,观察,HE,染色,用苏木精与伊红染色，是最常用的组织学，病理学染色方法。,H,：苏木精,Hematoxylin,碱性，蓝色,E,：伊红,eosin,酸性，红色,嗜碱性:染成蓝色,如:细胞核（核酸，酸性）,嗜酸性:染成红色,如细胞质 （碱性蛋白），,HE,染色的肾小管,红色为嗜酸性的胞浆，蓝色为嗜碱性的核,冰冻切片,1,冰冻（常用液氮）,2,切片,优点：,保存酶活性，,抗原保存好，免疫组化应用较多。,缺点：,形态不如石蜡切片。,要求有冰冻切片机。,其他光镜可用制片方法：,简单，实用，不需要特殊设备，有时候必须用,涂片,（血液，体液）,触片,撕片,装片、磨片。,光学显微镜的结构,机械系统,光学系统,目镜（10,x,5x,16x）,物镜 （4,x,10 x,20 x,40 x,60 x,100 x),聚光器,光源,物镜,最重要，最贵的部位。,物镜上数字，以,40,倍为例：,40/0.65，,放大倍数，镜口率（数值孔径，,N.A),160/0.17,机械管长，允许盖玻片厚度。,分辨率的问题,分辨率,（,Resolving power,）又称分辨本领，是用来表示,人眼或仪器能够区分开的被观察物体上两点间的最小距离。,所能分辨的两点间距离越小，见到的细节就越多，分辨率就越高。,人眼在,25cm,明视距离分辨率为,0.2mm,，,光镜分辨率为,0.2m,，电镜的分辨率比光镜的分辨率大约提高,1000X,。,D=0.61/(N*sin(/2),：为入射孔径角，即光线从样品进入透镜的张角,：,450nm,N,：折光率，空气,N=1,香柏油（,N=1.5),光镜最大分辨率，,D,最小值,0.2m,光学显微镜种类,普通光镜（明视野）。,暗视野（,dark field,）显微镜。,相差显微镜。,荧光显微镜。,激光共焦扫描显微镜（,Laser Scanning,Confocal,Microscopy,）,微分干涉显微镜（,differential-interference microscope,）,明视野效果，无标本处最亮,暗视野效果，无标本处最暗，（花粉管）,相差效果，可以观察透明（不染色）标本。,用于观察活细胞,荧光效果，,用各种不同的荧光染料,万能显微镜，其实是将几种功能通过配件集中在一台显微镜上,倒置显微镜，其实是将标本置于物镜上方，细胞培养常用,显微摄影，现在更多利用了数码相机,电子显微镜,透射电镜,TEM(transmission electron microscope),电子束代替光线,，波长短，,电磁透镜代替光学透镜,。,超薄切片，重金属染色,（铅，铀盐），吸收电子。,光学显微镜下结构,电子显微镜下结构,透射电子显微镜。,分辨率,1.44,埃，,放大倍率,80,万倍,超薄切片制作过程,电镜与光镜的比较,显微镜,分辨本领,光源,透镜,真空,成像原理,LM,TEM,200nm,0.1nm,可见光（,400-700,）,电子束,（,0.01-0.9,）,玻璃透镜,电磁透镜,不要求真空,要求真空,1.33x10,-5,1.33x10,-3,Pa,利用样品对光的吸收形成明暗反差和颜色变化,利用样品对电子的散射和透射形成明暗反差,电镜与光镜光路图比较,扫描电镜(,scanning electron microscope),扫描电镜下的结构,切片上还可以做：,组织化学,免疫组织化学,原位杂交,放射自显影,组织化学（切片上的化学反应）,PAS,反应显示多糖,perioldic,acid,shiff,reaction,切片上多糖,HIO4（,氧化）多醛；多醛无色品红（,shiff,试剂）紫红色沉淀（显示多糖存在）,PAS,反应,紫红色沉淀（显示多糖存在）,其他一些特殊染色：胭脂红染色,粘液染色,类淀粉染色,含铁血黄素,银染，黑色为银颗粒位置,免疫组织化学：,immunohistochemistry,利用抗原抗体特异性结合而显示抗原存在。,利用标记技术，如将荧光素（酶）与抗体结合（钥匙），,如果切片上某个部位有抗原（锁），当抗原抗体结合后，洗去多余抗体，荧光显示部位即是抗原（某种蛋白）部位。,细胞浆弥漫性阳性反应（细胞角蛋白,CK,）,DAB,显色，甲基蓝复染。,原位杂交,in situ hybridization,利用核酸碱基互补的特性。,原理跟免疫组化类似。,实验要求更高。,CG,AT,碱基互补原理,Hela,细胞（左）、,CHO,细胞（右）的培养,细胞培养,计量单位,组织学常用的计量单位：,10,-3,，,m,毫,10,-6,，,微,10,-9,，,n,纳 (埃,10,-10,m,10,-12,，,p,皮,如,m(,微米），11000,mm。,光镜常用，如细胞大小,nm（,纳米），1/1000,m。,电镜常用，如细胞膜厚度,放大倍数问题,粗略的估算：,物镜放大*目镜放大。如,40*10,问题,如洗出照片时，如上是否放大倍数就是,400,。,参照物的使用。,切面方向与立体结构,横切、纵切。,考虑鸡蛋的几个切面,考虑其他可能的切面。掌握切面对于我们了解器官立体结构的重要性。,以管状结构为例，同一器官可能有哪些不同切面。,