关爱生命呵护健康红细胞血型理论与技术.ppt

单击此处编辑母版标题样式,关爱生命 呵护健康,红细胞血型理论与实验技术,长春博德生物技术有限责任公司,童 军,主要内容,红细胞血型相容性检测,红细胞血型血清学检测方法,红细胞血型系统介绍,红细胞血型抗原为同种异型抗原，是人类遗传多态性标志之一。,自二十世纪初,Landsteiner,发现,ABO,血型以来，已陆续发现了许多新的红细胞血型抗原。国际输血协会（,ISBT,）,2008,年报告中已确认了,308,个红细胞血型抗原。并将其分为血型系统、血型集合和血型系列。,输血关系最大的是,ABO,及,Rh,血型系统,。,人类红细胞血型,研 究 背 景,血型系统,血型系统,ABO,血型发现历史,1901,年，,Landsteiner,把几份血液标本中的红细胞分别与他人的血清交叉混合后，发现有的血液之间发生凝集反应，有的则不发生。将人的红细胞血型分为,A,、,B,、,C(,后称为,O),三种类型。,1902,年他的学生,Decastello,及,Sturli,发现了第,4,种血型，即,AB,型。,ABO,血型的发现，开启了血液免疫学及免疫遗传学的新纪元。,ABH,抗原的生化结构,编 码,岩藻糖转移酶,添加岩藻糖到,血型多聚糖前体的终端半乳糖上,特异性,H,抗原,形成,编 码,A,或,B,转移酶,构建完成,A,或,B,抗原,H,基因,ABO,基因,ABO,抗原的发育,在胚胎早期,A,和,B,抗原就开始产生。但到,出生时，还没有完全发育，与抗,A,和抗,B,试剂,血清反应比成人弱，,2,4,岁时才能充分表现出,抗原性。,ABO,抗体的发育,出生时，正常的抗,A,和抗,B,还没产生或较弱，到三个月时，反应基本上与成年人的一样。5,10,岁时，抗体的产生达到高峰，具有较高效价。,孟买型与类孟买型,孟买型,Bombay phenotype,红细胞上没有,A,、,B,、,H,抗原，血清中存在,抗,-A,、抗,-B,和抗,-H,抗体。,表型标记为：,OhO,、,OhA,、,OhB,、,OhAB,类孟买型,Bombay-like phenotype,表型标记为,:Ah,、,Bh,、,ABh,ABO,血型的亚型,ABO,亚型（,subgroups),，也称变异型，红细胞同属于一种血型抗原，但在结构上有一定的差异，性能也不完全相同。由于抗原弱，在用已知抗体检测抗原和用已知抗原检测被检血清时不符合血清学反应特征。,A,亚型：,A1,和,A2,是血型血清学方法确定的最重要的,A,型红细胞亚型，一般认为有两种抗原,A,和,A1,，,A1,型人红细胞上有这两种抗原，,A2,型人红细胞只有,A,抗原。亚洲人中,A1,型约占,27%,；,A2,型人稀少。其它,A,亚型：,A3,、,Ax,、,Aend,、,Am,、,Ay,和,Ael,。,B,亚型一般比,A,亚型更少：,B3,、,Bx,、,Bm,和,Bel,几种,A,亚型红细胞上的,A,抗原,A1,与,A2,的区分,A1,型红细胞：,A,抗原和,A1,抗原,A2,型红细胞：,A,抗原,双花扁豆（,Dolichos biflous),种子提取液,Rh,血型系统,1939,Levine,及,Stetson,在一個新生,儿,溶血疾病的母,亲,的血清中，,发现,可凝集,85%,白种人,的,红,血球抗,体,。,1940,Landsteiner,及,Wiener,以,恒,河猴,(Rhesus monkey),的,红,血球免疫兔子,产,生抗,体,，也可凝集,85%,白种人,的,红,血球。因此命名,为,Rh,抗原。,（恒,河猴,LW,抗原）,Rh,血型系统抗原,RH,血型系统抗原,46,个，其中,D,、,C,、,E,、,c,、,e,为主要的血型抗原。,D,抗原：只存在与人红细胞膜，不存在与其它组织细胞中，体液分泌中也无,D,抗原。,D,抗原分类：根据,D,抗原的数量和质量不同以及抗原性不同，将,D,抗原分类为,5,种：常见,D,抗原、弱,D,、不完全型,D,、不完全型弱,D,及增强,D,。,Rh,血型系统抗原频率,D antigen,85%,C antigen,70%,c antigen,80%,E antigen,30%,e antigen,98%,Rh,血型系统抗体,Rh,抗体主要通过输血和妊娠免疫产生。一般在初次免疫后,2-6,个月内出现。对,Rh(D),初次免疫的人，经再次免疫后，在三周内抗体浓度可达最高峰。,同种异型抗体：,RhD,阴性人输用,D,阳性血而产生的抗,-D,抗体。绝大部分人血清同种异体抗体都是,IgG,类抗体，多数在盐水介质中不发生直接凝集。,单克隆抗,-D,：人鼠或人人淋巴细胞杂交瘤制备而成。,红细胞血型相容性检测,交叉配血,血型检测,抗体筛检及鉴定,红细胞血型血清学反应,已知红细胞：,反定型红细胞,不规则抗体检测红细胞,谱红细胞,已知抗体：,抗,A,抗,B,抗,D,抗,M,、抗,N,AHG,用已知的检测未知的,血型检测,血型检测：确定待检者的,ABO,、,RhD,血型。,ABO,血型定型：,正定型：是用已知特异性抗体来测定红细胞上有无相应的抗原。,反定型：是用已知抗原的红细胞来测定血清中有无相应的抗体。,ABO,血型定型,抗,A,抗,B,A,细胞,B,细胞,结果,(,试剂,),(,待检者,),A,B,ABO,血型定型,正定型,反定型,血型,比例,%,（亚洲）,抗,-A,抗,-B,A,细胞,B,细胞,-,-,+,+,O,43,+,+,-,-,AB,5,+,-,-,+,A,27,-,+,+,-,B,25,RhD,抗原检测,抗,D,结果,(,试剂,),(,待检者,),D,阳性,我国临床常规,RhD,血型的检测，应用不识别,D,VI,型,D,抗原的单克隆抗体。对不出现凝集的标本判断为,RhD,阴性；对出现弱反应（凝集反应强度,2+,）的病人（受血者），将其视为,RhD,阴性，只能输用,RhD,阴性的红细胞；对弱反应的献血者视为,RhD,阳性。,初筛,RhD,阴性和弱反应的标本，应该进一步研究确定其,RhD,表型，应用能够识别,D,VI,型的单克隆抗体；同时进行吸收放散实验，以排除,D,el,型。,亚型鉴定方法,凝集抑制试验：可溶性抗原与相应已知抗体结合能够全部或部分抑制抗体活性，通过此试验可确定抗原的特异性。又称唾液分泌试验。,吸收放散试验：抗体与相应抗原在适合条件下发生凝集或致敏，但这种结合是可逆的，如改变某些物理条件时，抗体又可以从结合的红细胞上解脱下来，这种试验方法叫做吸收放散试验。,放散技术,放散试验种类,酸放散,热放散,ZZAP,放散,二磷酸氯喹放散,ABO,亚型的血清学特征,A A B B TE C H N I C A L MANUA L 16th edition P366,各种,A,亚型的鉴别,红细胞,弱凝集,A3 Ax,Aend,混合视野凝集,(Mf,），唾液中含有,A,物质,A3,与抗,A,10,红细胞呈十分弱的,mf,凝集,Aend,及,/,或抗,只与抗,AB,呈弱凝集,Ax,A1B,反应,不凝集,能吸附,及放散,抗,A,Am Ay,Ael,容易吸附放散抗,A,Am,分泌型唾液中有一定量的,A,物质,不容易吸附放散抗,A,Ay,分泌型唾液含少量的,A,物质,吸附放散抗,A,Ael,分泌型唾液只含,H,物质无,A,物质,抗,D,单克隆抗体,抗体筛检及鉴定,用已知抗原的,O,型红细胞（筛检细胞及谱细胞），检测病人血清中是否含有抗体及对所检测到的抗体特异性进行鉴定。,抗体定义,不规则抗体的含义：通常把抗,A,、抗,B,以外的所有红细胞血型抗体称为不规则抗体。如抗,D,、抗,N,、抗,M,抗体。,完全抗体或不完体抗体：,与相应抗原红细胞在盐水介质中或在中性微柱凝胶中出现凝集反应的抗体称为完全抗体。完全抗体大部分是,IgM,类抗体，但非所有,IgM,类抗体都是完全抗体。大部分,IgG,抗体为不完全抗体，但一些,IgG,抗体也是完全抗体。,临床有意义和临床无意义抗体：,能引起新生儿溶血病（,HDN,）和血型不相容输血免疫溶血的抗体为临床有意义抗体。如母体免疫,IgG,抗体抗,-D,能够穿过胎盘进入胎儿体内，引起胎儿溶血。反之为临床无意义抗体，如,Lewis,血型同种异型抗体常是,IgM,抗体，但极少见溶血性输血反应和引起,HDN,，故该血型抗体为临床无意义抗体。,检测方法,方法,原理,局限性,酶检测技术,破坏红细胞表面的唾液酸，降低其表面电荷，减少红细胞间斥力，使得红细胞靠拢，在不完全抗体的作用下，红细胞便出现凝集。,改变其他系统,(,尤其是,M,，,N,，,Fy,a,，,Fy,b,),抗原的构型破坏其抗原性。酶还可能改变细胞悬液的物理性质，可导致红细胞的非免疫性聚集。,凝聚胺法,凝聚胺是一种多价阳离子氨基聚合物，它可以引起正常红细胞的可逆性凝集，如果被抗体致敏的红细胞与凝聚胺连在一起，就会发生不可逆凝集。在使用凝聚胺检测抗体活性时，抗原抗体在低离子介质中孵育，可促进红细胞与相应抗体的反应，使得抗原抗体更有效的结合。经再悬液中和后，抗体介导的特异性凝集仍然存在，而非特异凝集的细胞散开。,破坏,Kell,系统抗原,抗人球蛋白法,一些,IgG,类抗体,(,主要是免疫抗体，如,Rh,血型抗体,),是一种,7s,球蛋白，分子量小，分子长度只,250,A,，与红细胞相应抗原结合后，在盐水介质中不出现肉眼可见的凝集反应，但在加入抗,-IgG,的抗体后，以其搭桥则可出现凝集反应,操作繁琐，耗时长,酶作用缩短红细胞间距离,酶对红细胞抗原的作用,抗原增强,抗原性破坏,Kidd,Rh,Lewis,I,P,Fy,a,Fy,b,M N,S s,抗人球蛋白检测技术,分类：,直接抗人球蛋白实验（,DAT,）,间接抗人球蛋白试验,(IAT),试剂：,多特异性抗人球,(,抗,-IgG+,抗,-C3),单特异性抗人球,(,抗,-IgG,或抗,-C3),Sensitization,Agglutination by,Anti-human Globulin,DAT,Pt.RBCs,+AHG,观察凝集并判读结果,IAT,RBCs+,血清,+AHG,观察凝集并判读结果,抗人球蛋白检测技术,抗人球蛋白试验应用,直接抗人球蛋白试验在临床上主要应用于：,胎母血型不合新生儿溶血病（,HDN,）,免疫溶血性输血反应（,LHTR,）,自身免疫溶血性贫血（,AIHA,）,药物导致的免疫溶血性贫血,间接抗人球蛋白试验应用于：,红细胞血型定型；,相容性配血实验；,产前检查；,弱,D,抗原检测,洗涤,加入,AHG,离心,阳性,直接抗人球蛋白,间接抗人球蛋白,+,离心,孵育后洗涤,阳性,阴性,阳性,阴性,加入,AHG,加入对照细胞后离心观察结果,Coombs,对照细胞,(CCC,CC),假阴性结果,阴性结果,阳性,阴性,洗涤,加入抗人球蛋白试剂后离心,阳性,未洗涤,假阴性,False Negative Tests,抗体筛检,筛检红细胞,IS,3730,AHG,CC,OI,1+,-,-,2+,OII,3+,-,-,2+,1,、表明抗体为,IgM,抗体,2,、存在剂量效应,剂量效应,Kidd,、,Duffy,、,Rh,及,MN,（,MNSs,）系统中抗原存在剂量效应。,抗体筛检,筛检红细胞,IS,37,30,AHG,CC,OI,-,-,3+,NT,OII,-,-,-,2+,表明筛检的抗体为,IgG,类抗体,抗体鉴定,D,C,c,E,e,K,k,AHG,1,+,+,-,-,+,+,+,3+,2,+,-,+,+,-,-,+,-,3,+,-,+,-,+,+,-,3+,4,-,+,+,-,+,-,+,-,5,-,-,+,+,+,-,+,-,6,-,-,+,-,+,+,+,3+,Anti-K,抗体鉴定,D,C,c,E,e,Jk,a,Jk,b,AHG,1,+,+,-,-,+,+,+,W+,2,+,-,+,+,-,-,+,-,3,+,-,+,-,+,+,-,2+,4,-,+,+,-,+,+,+,W+,5,-,-,+,+,+,-,+,-,6,-,-,+,-,+,+,-,2+,Anti-Jka,交叉配血试验,相容性配血试验，检测受血者血清中抗体和献血者红细胞抗原是否相合试验为主侧交叉配血试验，检测受血者红细胞和献血者血清中抗体是否相合试验为次侧交叉配血试验，对其中是不完全抗体的，应用间接抗人球蛋白试验确定其相容性。,目 的,防止发生输血反应,增加体内红细胞的存活率,进一步确定,ABO,血型定型正确,检测抗体的另一方法,血型检测常规方法,玻片法,试管法,微板法,固相凝集法,微柱凝胶法,孵育,洗涤,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,LISS,+,Sample,+,固相凝集实验技术,阳性,离心,弱阳性,阴性,指示细胞,+,微柱凝胶检测,加入血清及红细胞,凝胶,离心力,反应腔,分 类,中性胶：微柱腔内及凝胶中不含特异性抗体,也不含抗人球蛋白。,抗人球胶：微柱腔内及凝胶中含抗人球蛋白。,特异性胶：微柱腔内及凝胶中含特异性抗体。,应 用,ABO,、,RhD,血型定型,抗人球蛋白检测,抗体筛检及鉴定,交叉配血,新生儿溶血病检测,Thank you,联系方式：,办公：,0431-87027886,手机：,15584447528,E-mail:tongjun666,