动物细胞融合和单克隆抗体.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,人教版 高中生物,选修三 现代生物科技专题,专题二,细胞工程,2.2.2,动物细胞融,合,与单克隆抗体,那么,不同,动物,的体细胞,是否也能进行杂交呢,?,1970,年，有两位科学家,做了一个著名的实验：,人,鼠细胞融合的,实验。,人,鼠细胞是怎样实现融合的？动物,细胞融合的,过程、原理及意义,又是怎样的呢？,学生活动一,：,1,、认真阅读教材,52,页，参照,资料,32,页,。,2,、思考并讨论资料,33,页探究一中的,3,个问题。,一、,动物细胞融合,动物,细胞融合也称,细胞杂交,，,是指,两个或多个,动物,细胞结合形成,一个细胞,的,过程、这个细胞是个,单核细胞,、称为,杂交细胞,。,1,、什么是,动物细胞融合,？,2,、动物细胞融合与植物原生质体融合的,基本原理相同,：,原理：,细胞膜的流动性,一、,动物细胞融合,3,、人工,诱导,动物细胞融合,的,方法有,:,_,_,；与,人工诱导,植物体细胞杂交,的方法相比多,了,_.,化学法,（,PEG,）,物理法,（离心、震动、电激）,生物法,（灭活的病毒）,生物法,（灭活的病毒）,诱导,动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的,方法也类似：,灭活的病毒表面含有的糖蛋白和一些酶 能与细胞膜上,糖蛋白,发生作用、使,细胞相互凝集,、细胞膜上的,蛋白质分子和脂质,分子,重新排布，,细胞膜,打开，细胞发生融合,.,灭活,是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但是并不破坏这些病原体的抗原结构,4,、,意义：突破了有性杂交的局限、,使远缘杂交成为可能。,主要用途：,制造单克隆抗体,植物,A,细胞,植物,B,细胞,去壁,原生质体,A,原生质体,B,诱导融合,融合体,再生壁,杂种细胞,杂种植株,细胞培养,筛选,（,1,）动物细胞融合,不需要去除细胞壁,；,（,2,）动物细胞融合,常使用灭活的病毒,，而植物,细胞融合不用；,（,3,）植物杂交细胞可以培养成杂种植株，,动物细胞 融合形成杂交细胞即可,。,5,、动物,细胞融合与植物体细胞杂交有哪些不同？,项目,植物体细胞杂交,动物细胞融合,原理,融合前处理,诱导方法,结果,意义,用途,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性和植物细胞的全能性,分散成单个细胞,去除细胞壁,离心、振动、电激；,聚乙二醇；,灭活病毒,离心、振动、电激；,聚乙二醇,获得杂交细胞或细胞产物,获得杂种植株,使远缘杂交成为可能,克服远缘杂交障碍,制备单克隆抗体,培育作物新品种,抗原,吞噬细胞摄取处理,T,细胞,暴露、呈递,B,细胞,直接刺激,浆细胞,增殖、分化,抗体,从动物血清中分离,淋巴因子,单,克 隆,抗 体,二 单克隆抗体制备,：,缺点,：,产量,低、纯度低,，,特异性差。,抗原,反复注射动物,从动物的,血清中,分离抗体,（,1,）传统抗体的获得及特点：,1,、,B,淋巴细胞有什么特点？,2,、,若要想获得大量的单一抗体，如何做呢？,B,淋巴细胞（浆细胞）能产生抗体，但每,一个,B,淋巴细胞只分泌,一种,特异性抗体,。,必须,克隆,单个,B,淋巴细胞,形成,细胞群。,3,、在体外培养的条件下，一个,B,淋巴细胞是不可能无限增殖的，那么，怎样解决这一问题的呢？,1975,年英国科学家,米尔斯坦和科勒的设想,学生活动二,：,认真阅读教材,53,页，讨论如下问题,4,、制备单克隆抗体的依据,：,利用,产生特异性抗体的功能。,利用 无限增殖的特性,利用 技术将两种细胞融合获,得杂交瘤细胞。,利用 技术大量培养,杂交瘤细胞,B,淋巴细胞,骨髓瘤细胞,动物细胞融合,动物细胞培养,原理：,免疫、细胞膜的流动性、细胞增殖,1,、为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白,(,羊的红细胞,),？,2,、（只考虑两两融合）融合细胞有几种类型？,3,、本过程中进行了两次筛选、目的分别是什么？,如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？,4,、杂交瘤细胞有何特点？,（,2,）,：单克隆抗体制备的过程,学生活动三,：,认真阅读教材,53-54,页，,分组讨论以下问题及资料,34,页探究二相关问题,B,淋巴细胞,注射特定抗原蛋白,骨髓瘤细胞,培养骨髓瘤细胞,融合,在,具有筛选,作用,的,培养基上培养,获得产生相应抗体的,B,细胞,BB,、,B,瘤,、,瘤,瘤,（,B,、瘤）,第一次筛选出,杂交瘤细胞（多种）。,1,、正常小鼠的免疫处理,2,、动物细胞融合,3,、杂交瘤细胞的筛选与培养,B,和,B-B,细胞,瘤,和瘤,-,瘤细胞,杂交瘤细胞,在培养液中,加入,氨基蝶呤,不能无限增殖,不能,合成,DNA,能利用,S,途,径合成,DNA,死亡,增殖,细胞合成,DNA,有,D,和,S,两条途径，,其中,D,途径能被,氨基嘌呤,阻断、,B,细胞,有,D,和,S,两条途径、,骨髓瘤细胞只,有,D,途径,第一次筛选出,能产生多种杂交细胞,B,淋巴细胞,注射特定抗原蛋白,骨髓瘤细胞,培养骨髓瘤细胞,融合,在具有筛选,作用的,培养基上培养,专一抗体检验阳性,克隆上述杂交细胞,分开不同杂交细胞，克隆专一抗体,，检验阳性细胞,获得产生相应抗体的,B,细胞,第一次筛选出,杂交瘤细胞（多种）。,克隆化培养和抗体检测,克隆化培养和抗体检测：,将杂交瘤细胞稀释、用,多孔细胞培养板,，,在每孔,只有一个,杂交瘤细胞的情况下开始培养,，,检测各孔上清液中的抗体、那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔,、再将阳性孔的细胞进,行,克隆化培养和抗体检测、,继续进行,3-4,次稀释培养、,直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的,克隆化培养。,第二次筛选出,能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞,杂交瘤细胞特点：,既能迅速大量繁殖、又能产生专一的抗体,体外培养,小鼠腹腔内培养,4,、扩大培养,单,-,指单个的,B,细,胞,(,即和骨髓瘤细胞,杂,交,的那一个,B,细胞,);,克隆,-,指骨髓瘤细胞的大量快速的分裂,.,（,3,）单克隆抗体优点,:,特异性强,灵敏度高、,可大量制备,该抗体是由,一,个,(,种,)B,细胞,产生的,一,种,抗体,只针对,一种,抗原,发生,作用,.,1,、,作为诊断试剂,：,用于,多种,人类疾病和动植物,病害,的,诊断,及,病原,鉴定,利用,同位素标记的单克隆抗体,、在,特定的组织中成,像,的技术、可,定位,诊断肿瘤、心血管畸形等疾病,（,4,）：,单抗隆抗体的应用,具有,准确、高效、简易、快速,特点,.,2,、,用于治疗,疾病和,运载药物,：,主要,用于癌症治疗,。,生物导弹：,抗癌细胞的,单克隆抗体,+,放射性同位素或化学药物或细胞毒素,。,（,单克隆抗体：导向、准确找到癌细胞位置,，,原位杀死癌细胞。）,优点：,疗效高、毒副作用小,两个过程,动物细胞培养过程,单克隆抗体制备过程,三个“一”,一个诱导细胞融合的新方法,灭活病毒,一个新细胞杂交瘤细胞,一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势,本节小结,