粪便检验 (keyonh).ppt

单击此处编辑母版文本样式,粪 便 检 验,第八组,粪便检查主要用于协助诊断消化道疾病：,1、肠道感染性疾病；,2、肠道寄生虫感染；,3、消化道出血鉴别与肿瘤筛检；,4、了解胃肠道消化、吸收功能；,5、黄疸的鉴别诊断。,粪便成分主要有：,1、未被消化的食物残渣；,2、已被消化但未被吸收的食糜；,3、消化道分泌物；,4、分解产物；,5、肠壁脱落的上皮细胞；,6、细菌，如大肠埃希氏菌、肠球菌,和一些过路菌；,第一节 标本采集和处理,一、标本容器,盛标本的容器应清洁、干燥、有盖、无吸水和渗漏。细菌学检查，粪便标本应采集于灭菌、有盖的容器内。,二、标本采集,标本新鲜，盛器清洁、干燥。,选取有病理意义的标本，多点取样。,及时检测，标本采集后于,1,小时内检测 完毕。,寄生虫检测应多次取样，并注意取样方式。,阿米巴滋养体等原虫检测，应及时、保温送 检。,粪便隐血检测应于试验前素食三天，并禁服 铁剂、及维生素。,第二节 理学检查,1、粪便量,2、,粪便外观,颜色,：正常人粪便呈黄褐色，婴,儿粪便呈黄绿色或金黄色糊状。,常见颜色的改变见下表：,颜色,生理性况,病理性况,黄褐色,金黄色,灰白色,绿色,红色,酱色,黑色,成人正常颜色,哺乳儿正常颜色，食物中有较多奶类，服用山道年、大黄等药物,服用钡剂后,食用大量含叶绿素蔬菜,食用大量红色食物后,饮食大量咖啡、可可、巧克力等食物,服用活性炭、铁剂、饿剂、中药或猪血等,存在未经改变的胆红素,胆汁减少或缺如，脂肪过量存在,乳儿消化不良,下消化道出血,阿米巴痢疾,上消化道出血,性状,：正常人粪便为成形软便，婴儿为糊状便。病理状态时，粪便性状可发生改变。,（,1,）,稀糊状或稀汁样便,：常因细菌肠毒素、内源性促分泌物质、致泻物质等物质刺激肠道，导致肠蠕动亢进或肠液分泌增多所致。多见于各种感染和非感染性腹泻，尤其是急性胃肠炎。,（,2,）,脓性及脓血便,：常见于下消化道病变、各种肠炎、痢疾、急性血吸虫病，结肠或直肠癌，慢性溃疡性结肠炎、肠结核。,（,3,）,米苷样便,：呈白色陶米水样，多见于霍乱、副霍乱，为白色淘米水样。,（,4,）,柏油样便,：因上消化道出血所致，隐血试验强阳性。,（,5,）,白陶土样便,：主要见于阻塞性黄疸及钡餐造影术后。,（,6,）,鲜血便,：见于直肠息肉，结肠癌、肛裂、痔疮。,（,7,）,胨状便,：见于慢性菌痢及过敏性肠炎。,（,8,）,黏液便,：粘液混匀于粪便中，见于小肠病变；粘液非混匀于粪便中且较集中，见于大肠病变；粘液粘附于粪便表面，常见于直肠炎；透明胶冻样粘液附于粪便表面时，见于粘液性肠炎、痉孪性便秘、情绪激动等。,3、寄生虫虫体,粪便中如有虫体较大的肠道寄生虫蠕虫，如蛔虫、蛲虫、绦虫等或其片段，肉眼可见。钩虫虫体需筛洗粪便后才见。,4,、气味,粪便的臭味与进食的种类，疾病的性质有关。,病理情况：粪便恶臭一般见于慢性肠炎、胰腺疾病、消化道大出血、结肠或直肠癌；粪便鱼腥臭味见于阿米巴性肠炎；粪便酸臭味见于消化、吸收不良。,第三节 显微镜检查及其临床意义,显微镜检查内容主要包括寄生虫虫卵、原虫、细胞、真菌、结晶、食物残渣等。,（二）粪便中各有形成分的形态和意义,1、,细胞,1）红细胞：正常粪便无红细胞。上消化道出血时，红细胞被破坏，粪便中难以见到。下消化道炎症或出血时可出现数量不等的红细胞，如痢疾、溃疡性结肠炎、结肠癌、直肠息肉、痔疮、急性血吸虫病等。,消化道疾病时由于炎病损伤出血，白细胞、红细胞同时存在。,细菌性痢疾时红细胞少于白细胞，多分散存在且形态正常；,阿米巴痢疾者红细胞多于白细胞，多粘连成堆存在并有残碎现象。,2）,白细胞,（脓细胞）粪便中的白细胞常见中性粒细胞。病理情况下，中性粒细胞呈灰白色，胞体肿胀、坏死、破碎、结构不完整，胞质内充满细小的颗粒，核不清楚的中性粒细胞，常成堆出现，此时称为,“,脓细胞,”,正常粪便，无或偶见白细胞。,结肠炎，白细胞分散存在，一般少于15个/,HFP；,细菌性痢疾、溃疡性结肠炎时，可见大量的白细胞或成堆出现的脓细胞以及吞有异物的小吞噬细胞；,肠易激综合症、肠道寄生虫病时可见较多的嗜酸性粒细胞，可伴有夏科-莱登结晶。,3）,巨噬细胞,：常随脓细胞出现于急性菌痢的粪便中，溃疡性结肠炎时，亦可偶见。,4）肠黏膜上皮细胞：见于结肠炎症、伪膜性肠炎。,5）肿瘤细胞：乙状结肠癌、直肠癌病人的血性粪便，及时涂片染色（瑞氏或,HE,染色）可找到成堆体积大，形态异常的肿瘤细胞。,2、寄生虫卵、原虫、滴虫,寄生虫卵：粪便中检查寄生虫卵是诊断肠道寄生虫感染的最常用的指标。,粪便中常见的寄生虫卵有：蛔虫卵、钩虫卵、鞭虫卵、蛲虫卵、华枝睾吸虫卵、血吸虫卵、姜片虫卵和带绦虫卵等。原虫和滴虫：肠寄生原虫包括阿米巴原虫、隐孢子虫、鞭毛虫、纤毛虫和人芽囊原虫等。,3、结晶,粪便中检出夏科-雷登结晶，主要见于阿米巴痢疾、钩虫病以及过敏性肠炎，并同时见到嗜酸性粒细胞。,4,、食物残渣,在正常粪便中，食物残渣均系已充分消化后的无定形细小颗粒。未经充分消化的食物残渣，常见的有以下几种：,脂肪小滴,淀粉颗粒,肌肉纤维,结缔组织,植物纤维及植物细胞,第四节 化学检查及其临床意义,一、隐血试验,概念,：隐血是指上消化道有少量出血时（每日出血量少于5,ml），,而且红细胞因被消化分解,肉眼不见粪便改变颜色，并且粪便涂片显微检查未能检出红细胞。而需用其他间接方法才能证实的出血。,隐血试验的方法有化学法和免疫法两种。,1、化学法隐血试验（,OBT）,试验原理：血红蛋白中含铁血红素具有过氧化物酶的活性，能分解过氧化物，催化色原物质而呈色，呈色的深浅反映了血红蛋白的含量，即出血量的多少。,常用方法：主要有邻联甲苯胺法，联苯胺法，匹拉米洞法，愈创木酯法等。,假阳性,情况：如外源性干扰；,假阴性,情况：如外源性与内源性干扰,联苯胺法,【,原 理,】,于粪便内加入易被氧化的物质（联苯胺等）及放氧的物质（,H,2,O,2,）,经粪便内血,液的作用（血色素中的铁卟啉环有过氧化酶作用）分解过氧化氢放出,O,2,-,，使联苯胺被氧化而致颜色。,【,检查方法、结果及优缺点,】,1.,方法 联苯胺法 无色孔雀绿法 单克隆抗体,OB,试验,取联苯胺粉少许置于玻片上，滴加冰醋酸,2-3,滴，再加,3%H,2,O,2,2,滴，取粪便少许与,以上试剂混匀，观察结果,。,2.,结果,2,分钟兰色 （,+,）,1,分钟兰色 （,+,）,1/2,分钟兰色 （,+,）,立即兰色 （,+,）,2,分钟以上兰色（,-,）,2、免疫法隐血试验,原理：该试验所有的抗体可分为两类，一种为抗人血红蛋白抗体，另一种为抗人红细胞基质抗体。,常用方法有免疫单扩法、对流免疫电泳、免疫扩散法、酶联免疫吸附试验、反向间接血凝法等。,免疫法不必控制饮食，且敏感性和特异 性都高于化学法。,假阳性情况：高灵敏度可造成假阳性，故不宜用于日常筛检。,假阴性情况：主要检测下消化道出血，以及带现象。,临床意义：粪便隐血试验主要用于消化道出血、消化道肿瘤的筛检和鉴别。,隐血阳性：,1、,见于消化道出血、药物致胃粘膜损伤（如服用阿司匹林、糖皮质激素）、肠结核、克罗思病、胃病（胃溃疡、胃炎）、溃疡性结肠炎、结肠息肉、钩虫病及肾病综合症出血热、消化道恶性肿瘤等。,2,、消化性溃疡与肿瘤出血的鉴别：隐血试验对消化道溃疡的阳性诊断率为40-70，呈间断性阳性；而消化道恶性肿瘤诊断阳性率可达95，且呈持续性阳性。,第五节 粪便的细菌学检查,正常人的肠道中栖居大量的不同种类的微生物，组成人类健康极为重要的体内微生态环境,参与营养、消化、吸收及清洁肠道，维护健康的作用。,腹泻因病原菌或病毒在在肠道繁殖引发，引起,腹泻细菌种类多。,本实验主要介绍疑为沙门菌或志贺菌属感染者,或带菌者的粪便标本（或直肠拭子）中致病菌,的分离和鉴定。,由于肠道中存在大肠埃希菌等很多条件致病菌，其与肠道致病菌的主要区别之一是：大多数条件致病菌可分解乳糖，而绝大多数肠道致病菌则不分解乳糖。,分离肠道致病菌多用含乳糖的弱选择性鉴别培养液（如麦康凯琼脂等）以及对大肠埃希菌等条件致病菌有较强抑制作用、而又有利于肠道某些致病菌（如沙门菌及志贺菌属）生长繁殖的强选择性鉴别培养液。,粪便标本常见的病原菌：,G,菌：葡萄球菌属、白色假丝酵母菌、艰难梭菌、结核分枝杆菌、蜡样芽孢杆菌,G,菌：志贺菌、沙门菌、致病性大肠埃希菌、霍乱弧菌、亲水气单胞菌、类志贺邻单胞菌、弯曲菌、小肠结肠炎耶尔森菌,试剂与器材,菌株：伤寒沙门菌,培养基：麦康凯和,SS,琼脂平板,各种生化反应培养液及革兰氏染液等试剂（可参见微生物的自动分析及附录）,沙门菌多价,“,O,”,（,A-F,组）及单价,“,O,”,诊断血清、,“,H,”,因子诊断血清,标本的采集,由于粪便中细菌种类很多，故应根据检查目的的不同选择适宜的培养液或用适当方法处理，尽可能地抑制杂菌，以利于病原菌的检出。,不能认为粪便中细菌含量多，粪便标本的采集就无须无菌操作。粪便标本的采集也应遵循无菌操作的原则。若便器或标本容器不洁而污染了变形杆菌，就可能影响病原菌的分离检出，甚至把污染菌误报，造成误诊。,标本的采集,采样的时期应合适。疑似痢疾患者应在发病初期、用药前采取标本。粪便标本采集时应挑取无尿液污染的有脓血、黏液部分的粪便,23g,（液状粪便可挑取絮状物），盛于无菌容器内送检。,在无法获得粪便时，可采用直肠拭子，即用灭菌棉拭子经,0.9%,氯化钠溶液或增菌培养液湿润后，插入肛门内,)45cm,处，轻轻转动一圈后取出，插入无菌试管（,Cary Blair,系统运送管）或保存液中送检；,疑似伤寒患者应在发病,23,周内采集粪便标本。,标本的采集,在无法获得粪便时，可采用直肠拭子，即用灭菌棉拭子经,0.9%,氯化钠溶液或增菌培养液湿润后，插入肛门内,)45cm,处，轻轻转动一圈后取出，插入无菌试管（,Cary Blair,，卡,布系统运送管）或保存液中送检；应采集可疑粪便，如立即患者粘液脓血便、霍乱患者的米泔水样便等。以为换乱患者，硬质碱性蛋白胨水中。,除婴幼儿外，不推荐用棉拭子做常规病原菌培养。,粪便标本如不能立即送检，可将标本放入甘油盐水保存液中，或保存于冰箱内（勿超过,2,小时）。,粪便标本的细菌学检验程序,粪便标本或肛拭子道标本,涂片,增菌培养,直接分离,报告,革兰染色；动力学观察与制动试验（,KIA,、,MIU,）,初步报告,需氧培养,GN,增菌液或亚硒酸增菌液,碱性蛋白胨,TCBS,平板或其它碱性平板分离,SS,平板,MAC,平板,EMB,平板,副溶血性弧菌选择平板,菌落形态生化反应,菌落形态、生化反应、抗血清凝集药敏,菌落形态、生化反应、抗血清凝集药敏,步骤与方法,革兰氏染色,志贺菌与沙门菌：急性腹泻患者的粪便标本划线接种于,SS,平板和,MAC,平板。,慢性腹泻患者志贺菌或携带者应接种,GN,增菌液，沙门菌接种亚硒酸盐增菌液，再转种,SS,平板与,MAC,平板，观察小的、透明或半透明、无色或浅黄色的可以菌落生长，有时,SS,平板可见中心黑色菌落（,H2S,）。,挑选三个可疑菌落分别接种三支,KIA,、,MIU,培养基，观察结果。,挑取菌落进行革兰氏染色，观察细菌形态、排列。,采用伤寒沙门菌诊断血清进行血清学鉴定。,步骤与方法,生化反应鉴定第,2,日观察平板上有无可疑菌落，用接种针于上述平板中挑取单个可疑菌落（无色、半透明、光滑、较小）,23,个，分别接种至,23,管双糖培养液内，置,37,培养,1824h,。第,3,日观察细菌生长情况，根据表,102,初步鉴定细菌种类，然后取双糖培养液上 的菌落进行系列生化鉴定。,表 不同肠道细菌在双糖培养液培养结果（教学实验模拟标本的结果）序号 上层（乳糖）下层（葡萄糖）动力 可能结果,1 +,有 大肠埃希菌,2 +,有 伤寒沙门菌,3 +,无 痢疾志贺菌,步骤与方法,血清学最终鉴定根据双糖培养液及系列生化反应结果判断，最后利用血清学实验对细菌进行最后的确定。,如果初步鉴定结果为沙门菌属，则取双糖培养液斜面上菌苔与沙门菌多价“,O”,（,A-F,组）诊断血清作玻片凝集实验，如凝集即为沙门菌属，然后分别与,A-F,组的单价“,O”,诊断血清作玻片凝集实验定组，最后以,H,因子诊断血清作玻片凝集实验以定型（种），必要时可用因子诊断血清定型。,如果根据双糖培养液及系列生化反应结果判断，初步鉴定结果为志贺菌属，则取菌苔与志贺菌属多价诊断血清作玻片凝集实验以定组，必要时可用因子诊断血清定种或型。,步骤与方法,若为较典型的沙门菌生化反应，但与,A-F,组多价“,O”,诊断血清又不发生凝集反应，应考虑可能为有,VI,抗原的沙门菌，可将菌制成悬液以,100,加热,30,分钟以除去,VI,抗原后，再做血清学鉴定。,如为较典型的志贺菌生化反应又不与其多价诊断血清发生凝集，则可用同样方法加热,1001,小时以破坏其,K,抗原，再做玻片凝集反应鉴定之。,在细菌的血清鉴定中，最常使用的方法是凝集反应，其基本原理是细菌为颗粒性抗原，当与相应的抗体混合时，在一定浓度的电解质条件下，可出现肉眼可见的凝集现象。,步骤与方法,取一洁净载玻片，用记号笔划两个,11.5cm,的圆圈。,取,1,：,5,或,1,：,10,诊断血清一接种环置于玻片左侧圈内，在右侧圈内放一接种环,0.9%,氯化钠作为对照。如天气炎热，环境温度高，则应适当多取血清及,0.9%,氯化钠，以防试剂短时间内干涸，影响结果的观察。,用接种环取待鉴定的新鲜细菌少许，分别研磨乳化于诊断血清及,0.9%,氯化钠内使之均匀混合。旋转摇动玻片数次，,13,分钟后观察结果。,按上述操作方法，依次分别做,A-E,多价血清定属，特异性,O,因子血清定群，,H,因子血清定型（或种）。,结果,阴性：对照侧及实验侧均匀混浊不出现凝集。,阳性：盐水对照侧呈现均匀混浊，实验侧明显凝集。,自凝：对照侧及实验侧均出现凝集。,步骤与方法,取一洁净载玻片，用记号笔划两个,11.5cm,的圆圈。,取,1,：,5,或,1,：,10,诊断血清一接种环置于玻片左侧圈内，在右侧圈内放一接种环,0.9%,氯化钠作为对照。如天气炎热，环境温度高，则应适当多取血清及,0.9%,氯化钠，以防试剂短时间内干涸，影响结果的观察。,用接种环取待鉴定的新鲜细菌少许，分别研磨乳化于诊断血清及,0.9%,氯化钠内使之均匀混合。旋转摇动玻片数次，,13,分钟后观察结果。,按上述操作方法，依次分别做,A-E,多价血清定属，特异性,O,因子血清定群，,H,因子血清定型（或种）见,p119,。,注意事项,在细菌的血清鉴定中，最常使用的方法是凝集反应，其基本原理是细菌为颗粒性抗原，当与相应的抗体混合时，在一定浓度的电解质条件下，可出现肉眼可见的凝集现象。,玻片法凝集实验是用诊断血清在玻片上与待测细菌相混合，在电解质,存在下，若出现肉眼可见的凝集小块即为阳性，表示该菌为所用抗体的相应细菌。此法是一种定性实验，方法简便快速，特异性强。可用于鉴定菌种及菌型。用于鉴定细菌的诊断血清有以下几种：,多价诊断血清：即混合诊断血清。该血清含有两种（或型）以上细菌的相应抗体。一般用于细菌定群或初步分型。,单价诊断血清仅含一种（或型）细菌的相应抗体。可用于细菌的定种（或型）。,因子诊断血清细菌含有多种抗原成分，而且不同菌群细菌之间可有共同的抗原成分。因此，通过凝集吸收实验，将抗血清中的共同抗体除掉，仅含一种特异性抗体的诊断血清称为因子血清。可用于细菌分型。,