革兰氏阴性球菌.ppt

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second Level,Third Level,Fourth Level,Fifth Level,Taizhou,University,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,Taizhou,University,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,*,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,革兰阴性球菌,奈瑟菌属,Neisseria,医学检验系,姚军,脑膜炎奈瑟菌,N.meningitis,meningococcus,奈瑟菌属,（Neisseria）,奈瑟氏菌属是一群革兰阴性球菌，常成双排列，无鞭毛，无芽胞，有菌毛,人类为奈瑟氏菌属的自然宿主，对人致病的只有脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌，两种细菌DNA序列有70的同源性,主要,区别点,：,淋病奈瑟菌寄居于尿道黏膜，引起泌尿生殖系统疾病,而脑膜炎奈瑟菌和其他奈瑟菌和其他奈瑟菌均存在于鼻咽腔黏膜。脑膜炎奈瑟菌有多糖成分,脑膜炎双球菌,形态与染色,G,-,，0.6-0.8m,肾形或豆形，成双排列，凹面相对,病人脑脊液（CSF）中典型，多位于,中性粒细胞内,无鞭毛和芽胞,新分离株具有荚膜和菌毛,培养特性与生化反应,培养特性,专性需氧,营养要求高,最常用的培养基是巧克力色培养基,生化反应,可产生自溶酶，人工培养时若不及时移种，数日后菌体自溶,抗原构造、抵抗力,致病性与免疫性,致病物质,荚膜,菌毛,内毒素,所致疾病,流行性脑膜炎（简称流脑）,人类是唯一的易感宿主,免疫性,6月2岁年龄组婴儿免疫力最低，是易感人群,脑膜炎奈瑟菌,鼻咽腔繁殖,繁殖入血,菌/败血症,中枢神经系统,主要侵犯蛛网膜,暴发型脑膜炎,微循环衰竭,、,内毒素休克,、,DIC,儿童和成人的脑膜炎症状,微生物学检查法,标本,直接涂片镜检,如镜下见到中性粒细胞内、外有革兰阴性双球菌，即可作出初步诊断,分离培养与鉴定,巧克力色血琼脂平板,快速诊断法,对流免疫电泳SPA协同凝集试验,脑膜炎奈瑟菌（N.meningitidis),脑膜炎奈瑟菌（N.meningitidis),革兰阴性双球菌,肾形或豆形,生物学性状,形态染色：,G,-,，呈肾型，成双排列（凹面相对，凸面相背），有荚膜及菌毛,培养特性,营养要求较高，血平板或巧克力平板或卵黄双抗平板，形成光滑透明“露滴样”菌落,专性需氧，,510%CO2，,35-,37（40 30均不生长）pH7.47.6,易产生自溶酶,生物学性状,生化反应：,氧化酶及触酶（+），分解葡萄糖和麦芽糖,抗原和分类：,根据荚膜多糖群特异性抗原的不同可分为13个血清群，根据膜蛋白不同，各血清群又可分为若干血清型,抵抗力：,很弱，对热、冷、干燥和消毒剂极度敏感,脑膜炎奈瑟菌（N.meningitidis),氧化酶试验,阳性,：,紫红色,阴性：无色,生化鉴定（光滑露珠样菌落）,脑膜炎奈瑟菌的鉴定,氧化酶：,+,DNA,酶：,-,营养琼脂生长：,-,葡萄糖：,+,麦芽糖：,+,脑膜炎奈瑟氏菌的几种菌落形态,血平板,血平板菌落特写,光滑透明“露滴样”菌落,M-H琼脂,M-H琼脂菌落特写,此菌株为10月份自患者脑脊液分离，经市CDC回报为C型脑膜炎奈瑟氏菌,光滑透明“露滴样”菌落,防治原则,综合性预防措施,隔离病人、检查带菌者、预防性投药，室内通风,流脑疫苗,：,6个月-2岁接种两次，间隔1月,A群脑膜炎球菌多糖抗原。制备疫苗,青霉素、磺胺大剂量治疗,脑膜炎接种,淋病奈瑟菌，淋球菌,Gonococcus,脑膜炎奈瑟菌,淋病奈瑟菌,相似点：,生物学性状,差异：,荚膜：有荚膜（,脑,），分离初期有荚膜（,淋,）,质粒：很少有质粒（,脑,），有质粒（,淋,）；,所致疾病：引起脑膜炎（,脑,），引起泌尿生殖系统疾病（,淋,）。,感染部位不同，标本取材部位不同,两者关系,形态与染色,革兰染色阴性，0.6,-,0.8m,肾形、成双排列,有菌毛，无芽胞和鞭毛，新分离株有荚膜,男性急性淋病患者尿道分泌物涂片（革兰染色）,男性慢性淋病患者尿道分泌物涂片（革兰染色）,女性急性淋病患者阴道分泌物涂片（革兰染色）,培养特性 生化反应,培养特性,需氧，营养要求高。常用的培养基为,巧克力色血液琼脂平板,生化反应,除,葡萄糖,外，,不分解其它糖类,与脑膜炎奈瑟菌相似，营养要求更高，只能在巧克力平板及专用培养基上生长，形成灰白色细小S型,呈滴露样,菌落,主要菌体表面抗原构造,菌毛,与粘附有关，免疫原性不强,脂多糖抗原,经常变异，相应抗体不能防止再感染,外膜蛋白,PI：主要外膜蛋白，将淋病奈瑟菌分为,18个血清型,PII：吸附易感细菌的蛋白,致病物质,菌毛,脂多糖（内毒素）,IgA1蛋白酶,所致疾病,淋病,人类是淋球菌唯一的天然宿主,成人淋病绝大多数通过性接触感染，是重要的,性传播疾病,（sexually transmitted disease，,STD,）,新生儿淋球菌性结膜炎,“脓漏眼”,微生物学检查法,标本,保暖,（运送时35,C保温,）,、保湿、立即送检,直接涂片镜检,分离培养与鉴定,巧克力色培养基快速诊断法,ELISA法、核酸杂交、PCR技术,生物学特性,形态染色：与脑膜炎奈瑟菌相似，,G,，双球菌，咖啡豆状，有荚膜和菌毛，无芽胞，无鞭毛,脓汁,标本中,急性病人,：细菌位于中性粒细胞,内,慢性病人：细菌位于细胞,外,培养特性：,与脑膜炎奈瑟菌相似，营养要求更高，只能在巧克力平板及专用培养基上生长，形成灰白色细小S型菌落,生化反应：,氧化酶（+），只分解葡萄糖，不分解麦芽糖,（,脑膜炎奈瑟菌分解麦芽糖,）,等其它糖类,抗原及分类：,以外膜蛋白抗原分16个血清型,抵抗力：,极弱（与脑膜炎奈瑟菌相似）,淋病奈瑟菌,淋病奈瑟菌鉴定依据,：,1.,涂片染色为革兰阴性双球菌,2.巧克力平板上为,半,透明、灰白色、凸 起,滴露状,菌落,3.氧化酶及触酶均阳性,4.只分解葡萄糖，产酸不产气,5.血清学试验阳性,防治原则,预防淋病应取缔娼妓、防止不正当的两性关系,新生儿1%硝酸银滴眼，或红霉素、四环素眼药膏,药物首选,青霉素,，但多有耐药性，应用,新型青霉素族抗生素,比 较 内 容,脑膜炎奈瑟菌,淋病奈瑟菌,生物学性状,形态结构,G,双球菌；有荚膜、菌毛(新),同左,培养特性,高营养、5%CO,2,露滴状、自溶酶,高营养、5%CO,2,生化反应,分解葡萄糖、麦芽糖,只分解葡萄糖,抗原,与,分类,荚膜多糖群特异Ag外膜蛋白型特异Ag脂多糖Ag,核蛋白Ag,菌毛蛋白Ag,脂多糖Ag,外膜蛋白Ag,(P、P、P),抵抗力,冷、热、干燥、消毒剂均敏感,同左,致病性,致病物质,荚膜、菌毛、内毒素,荚膜、菌毛、外膜蛋白、IgA1,所致疾病,流行性脑脊膜炎,淋病,防治原则,荚膜多糖疫苗,洁身自好,脑膜炎奈瑟菌与淋病奈瑟菌比较,小 结,化脓性球菌,革兰阳性菌：葡萄球菌，链球菌，肺炎链球菌,革兰阴性菌：脑膜炎奈瑟菌，淋病奈瑟菌,N.gonorrhoeae,N.meningitidis,S.pneumoniae,staphylococcus,Streptococcus,脓汁或,喉拭子,涂片、革兰染色、镜检,血琼脂平板,观察菌落特征,及溶血情况,生化反应、致病力试验及药敏试验,病原性球菌的鉴别,由脑脊液标本中发现中性粒细胞内外有,G,-,双球菌,，可初步诊断为,脑膜炎球菌,由泌尿、生殖系统来源的标本中分离出的,G,-,双球菌,，可初步诊断为,淋球菌,37 24h,葡萄球菌鉴别,金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌,色素,金黄色 白色,-,溶血素,+-,血浆凝固酶试验,+-,耐热,DNA,酶试验,+-,甘露醇发酵试验,+-,致病力,强 弱或无,脓汁标本 找出两种菌落,Gram,染色,甘露醇发酵试验,菌落小、半透明、表面光滑、边缘整齐,G+,、链状,完全溶血,乙型链球菌,不溶血,丙型链球菌,草绿色不完全溶血环,甲型链球菌 肺炎链球菌,菊糖发酵试验,-,（紫色）,+,（黄色）,胆汁溶菌试验,-,（混浊）,+,（澄清）,喉拭子标本 找出两种菌落,Gram,染色,球菌检验全程报道,临床微生物检验,1.痰涂片,（镜下）,:,1.痰涂片,（镜下）,:,2.原始培养物18h后菌落,（菌落）,:,2.原始培养物18h后菌落,（菌落）,:,3.传代后的纯培养物:,3.传代后的纯培养物:,传代后的菌落直径较首代有些缩小了,菌落湿润程度也有些降低,但仍然很湿润.,4.,O,ptochin抑制试验:,抑菌环中也微弱的生长了些菌落,但经过涂片发现是口腔球菌.可能是做该试验的同事挑菌落的时候,没把握好.把杂菌带进去了.尽管如此,抑菌环还是非常明显而宽大(22mm).,5.生化反应:,用的就是普通微量管,在接种前滴加小牛血清1滴.5%CO2,35培养1824h后读取并记录结果.,6,.?,菌乳胶凝集试验：左边是测试，右边是阴性对照：,7.,药敏试验（K-B法）：,7.,药敏试验（K-B法）：,思考题,一、填空题：,一、填空题：,二,、选择题：,二,、选择题：,二,、选择题：,二,、选择题：,三,、名词解释：,1、血浆凝固酶,2、葡萄球菌A蛋白,四、问答题,1、如何从脓汁标本中检出金黄色葡萄球菌，请写出检验程序，鉴定依据？,2、肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌的主要区别有那些？,3、简述下列细菌的形态特征、首选培养基及主要菌落特点？金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、霍乱弧菌。,4、流脑患者脑脊液革兰氏染色的镜下特征，如何分离培养及菌落特点？,5、如何从脓液中检出乙型溶血性链球菌？,6、简述下列细菌的形态特征、首选培养基及主要菌落特点？肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、铜绿假单胞菌。,