CH50测定.ppt

,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,血清总补体溶血活性测定,补体是存在于血清中的一组不耐热的具有酶活性的球蛋白。,补体是抗体发挥溶细胞或溶菌作用的补充条件。,在正常情况下，补体含量相对稳定，但在某些疾病时可发生变化。,动态监测血清总补体的活性，对一些疾病有辅助诊断的意义。,概述,实验原理,绵羊红细胞（,SRBC,）与相应抗体结合形成的致敏红细胞可激活补体，从而导致,SRBC,溶解。,当致敏红细胞的浓度一定时，在规定的反应时间内，溶血程度与补体的活性成正相关，但不是直线关系，为典型的,S,形曲线。,在轻微溶血和接近完全溶血时，补体量的变化不能使溶血程度有显著改变，即溶血对补体量的变化不敏感。,在半溶血（,50,溶血）上下时曲线最陡，即使补体含量仅有较小变动时，溶血程度也会发生较大的改变，也就是说对补体量的变化非常敏感。,故采用,50,溶血作为终点指标要比,100,溶血敏感的多，这一方法称为补体,50,溶血试验（,complement,hemolysis,50,assay,），简称为,CH50,。,以引起,50%,溶血所需的最小补体量为一个,CH50,单位，由此可以计算出待测血清中总的补体溶血活性，以,U/ml,表示。,主要试剂与器材,溶血素,2,SRBC,pH7.4,巴比妥缓冲液（,BBS,）,待测血清、蒸馏水,离心机、试管、吸管、恒温水浴箱、分光光度计、比色杯等,实验步骤,1.,稀释待测血清：吸取待测血清,0.2ml,，加,BBS3.8ml,，将血清,1,：,20,稀释（已完成）。,2.,正式实验,取,10,只试管，分别编号，按照下表加入各试剂,试管号,BBS,1,：,20,稀释血清,2,SRBC,2U,溶血素,补体溶血活性,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,1.40,1.35,1.30,1.25,1.20,1.15,1.10,1.05,1.00,1.50,0.10,0.15,0.20,0.25,0.30,0.35,0.40,0.45,0.50,0.00,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,置,37,水浴,30min,200,133,100,80,66.6,57.1,50,44.4,40,-,3.,制备,50,溶血标准管,理论方法,代替方法,2,SRBC 0.5ml 4.5ml H,2,O,+,蒸馏水,2ml 2,SRBC 0.5ml,+,17g/L,高渗盐水,2ml,+,2,SRBC 0.5ml,以上两种方法效果相同，所以实验中采用后者。,使红细胞全部溶血,形成等滲,50,溶血管,结果判断方法,将各反应管经,2500r/min,、,5min,离心后，先用目测法观察其溶血程度，并与,50,溶血标准管比较，选择与标准管最接近的两管。,再用分光光度计于波长,542nm,进行比色测定。以,BBS,缓冲液为空白对照，校正零点，找出吸光度与标准管最接近的一管，根据该管的血清用量，求出总补体溶血活性。,总补体活性（,U/ml,）,1,血清用量（,ml,）,稀释倍数,实验结果,写出标准管和选出的两管的吸光度，判断哪一管与标准管的透光率接近。,计算总补体活性。,注意事项,待测血清必须新鲜，如放置室温,2h,以上，可使补体活性下降。,待测血清还应该无溶血、无污染等。,绵羊红细胞等试剂均应新鲜配制。,实验器材应该清洁，残留的酸碱等化学物质均可使补体受破坏。,补体的溶血活性可受多种因素的影响，如溶液的酸碱度变化、钙和镁离子增加等可使补体溶血活性降低。,应用与评价,本方法快速、简便，但敏感性较低，结果易受多种因素的影响。,主要用于测定补体经典激活途径的溶血功能，不能测定补体蛋白的绝对值,参考值：,50-100U/ml,增高：可见于急性炎症、组织损伤、恶性肿瘤,降低：多见于免疫复合物型超敏反应,