实验三 微生物血球计数板直接计数法.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,实验三,血球计数板的使用及酵母菌的直接计数,微生物血球计数板直接计数法,一、目的要求,二、基本原因：,此法是利用血球计数板在显微镜下直接进行测定。它观察在一定的容积中的微生物的个体数目，然后推算出含菌数，,包括死活细胞均被计算在内，还有微小杂物也被计算在内。,这样得出结果往往偏高。这种方法常用于形态个体较大的菌体或孢子。,计数板是一块特制的厚玻璃片，玻片上有四个槽构成三个平台，中央平台又由一短槽隔成两半，其上各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为,计数室,。,计数室,刻度有,2,种：一种是,25,中格,X16,小格，而另一种为,16,中格,X25,小格，它们都是由,400,个小格组成。每个大方格边长为,1mm,，则每个大方格面积为,1,X,1=1mm,2,。盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间高度为,0.1mm,所以每个计数室的体积为,0.1,X,1,X 1=0.1,mm,3,每个大格有,400,个小格，所以每个小方格体积为,0.1/400=1/4000mm,3,=1/4000,000ml,。,血球计数板的分区与分格,例一 例二,1,大格,=16,中格,1,大格,=25,中格,=16,X,25,小格,=25,X,16,小格,=400,小格,=400,小格,*,*,*,*,#,#,#,#,#,三、材料与仪器：,1,、待测样品：酵母菌悬液,2,、显微镜，血球计数板，接种环,盖玻片等。,四、方法与步骤,:,1,、取洁净的血球计数板，在计数室上面盖上盖玻片。,2,、取稀释到一定程度（,510,个酵母,/,小格）酵母液，从盖片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不能有气泡。先在低倍镜下找到小方格网后，再转换高倍镜观察并计数。,四、方法与步骤,:,3,、如用,16,X,25,计数板，只计四个角上中方格的菌数。若是,25,X,16,的计数板，除计数四个角上的中格菌数外，还要计算中央中格的菌数。每个样品重复计数,23,次。计数时应不时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体。,4,、位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方线及左方线上的菌体。,5,、计数方法：,样品中菌数,/ml=,每小格平均菌数,x 4000,000 x,稀释倍数，本实验采用,25 x 16,规格，要求数这些方格中的全部小格即,80,个小格。,设：每个中方格的菌数为,A,，则,每小格平均菌数,=,（,A,1,+A,2,+A,3,+A,4,+A,5,)/80,A,1,+A,2,+A,3,+A,4,+A,5,样品中的菌数,/ml=X 4000,000 X,稀释倍数,80,结果记录：,微生物名称 总菌数 个,/ml,第一个,中格,第二个,中格,第三个,中格,第四个,中格,第五个,中格,第一次,测定,第二次,测定,平均,四、测定注意事项,:,1,、测定时，酵母菌液要摇匀，防止酵母凝聚沉淀。,2,、活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时，即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为,1,个酵母细胞。,3,、位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方线及左方线上的菌体。,五、思考题：,1,、用血球计数板计数时，哪些步骤易造成误差？,2,、血球计数板测定原理是什么？它有哪些优点？,