实验七：植物染色体压片技术.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验 七,植物有丝分裂染色体压片技术,一、实 验 目 的,了解植物细胞周期中染色体的动态变化,学习植物染色体压片方法的基本技术。,二、实验原理,有丝分裂是体细胞分裂的主要方式，一般发生在植物根尖或茎尖的分生组织中。在有丝分裂时，细胞核与细胞质有很大的变化，,但以细胞核内染色体的变化最为明显,，而且是有规律地进行。各种生物染色体在数目上和形态上是相对恒定的，并随科属种的不同而具有一定的特征。洋葱和大蒜体细胞中有,8,对共,16,条染色体，在有丝分裂过程中，每个染色体能复制一份，然后分配到两个子细胞中，所以两个子细胞与母细胞所含的染色体在数目、形态和性质上都是相同的。在细胞遗传学研究中，人们常常需要了解某一物种的染色体数目，而最有效的方法就是观察细胞有丝分裂的中期，这样能得到较为准确的结果。,（一）实验材料,大蒜（,Aillum,sativum,）根尖,洋葱（,Aillum,cepa,）根尖,蚕豆（,Vicia,faba,）根尖。,（二）实验器具,显微镜、培养箱、恒温水浴锅、温度计、镊子、解剖针、刀片、载玻片、盖玻片、烧杯、量筒、滴瓶、大培养皿、纱布、吸水纸、铅笔、吸管等等。,（三）药品试剂,卡诺氏固定液（甲醇或,95%,乙醇,3,份，冰醋酸,1,份）、改良苯酚品红染色液、,0.002M8-,羟基喹啉水溶液、,0.050.2%,秋水仙素溶液,、对二氯苯饱和水溶液、,1N,HCl,、,95%,乙醇、正丁醇、加拿大树胶。,三、实验材料、器具与试剂,四、实验方法,（一）材料准备,选取,大蒜或洋葱,放在培养盘或烧杯中，使幼根长出后，在,20,25,继续培养。当根尖长,1,3cm,时，即可以进行预处理。,（二）预处理,为利于有丝分裂中染色体的观察和计数，固定之前进行预处理，这样可改变细胞质的粘度，抑制或破坏纺锤丝的形成，促使染色体缩短和分散等。一般在分裂高峰前处理,1.5,小时以上，方法如下：,1,秋水仙素水溶液,常用浓度为,0.05,0.2%,，室温下处理,2,4,小时。对抑制纺锤体活动的效果明显，易于获得较多的中期分裂相，并且染色体收缩较直，有利于对染色体结构的研究。,2,对二氯苯饱和水溶液,室温下处理,3,5,小时，对阻止纺锤体活动和缩短染色体效果也较好，对染色体小而多的植物中，计数染色体制片效果最好。,3,低温处理,将材料如小麦，浸入蒸馏水内，放置到,1,4,冰箱中（玉米及水稻,6,8,）处理,20,24,小时，也起到良好的效果。时间一般为上午,7,9,时，固定保存方法同上。,植物,名称,染色体,数,(2n,）,处,理,因,素,处理时间,温,度,效,果,*,小麦,42,0.2%,秋水仙素水溶液,9:00-11:00,25,+,小麦,42,对二氯苯饱和水溶液,10:00-14:00,室温,+,小黑麦,56,对二氯苯饱和水溶液,10:00-14:00,室温,+,大蒜,豌豆,16,14,对二氯苯饱和水溶液,8:30-11:30,室温,+,烟草,48,对二氯苯饱和水溶液,8:30-11:30,室温,+,蚕豆,12,0.05,0.1%,秋水仙素水溶液,20:00-23:00,室温,+,洋葱,16,0.05,0.1%,秋水仙素水溶液,7:30-11:30,15,+,大麦,14,0.05,0.1%,秋水仙素水溶液,8:00-11:00,25,不同材料采用不同预处理方法获得的效果,*,+,优,+,良。,（三）固定,通常采用的是卡诺氏固定液。,目的是用化学的方法把细胞迅速杀死，使蛋白质变性，并尽量保持原来的分裂状态，同时更易于着色,。固定时，将根尖投入固定液中室温处理,4,24,小时。材料若不及时用，可经过,90%,酒精和,70%,酒精浸洗一次，再换入新的,70%,酒精中，置于冰箱内,0,4,保存备用,。,（四）解离,目的是使分生组织细胞之间的果胶质层解掉，并使细胞壁软化，便于压片。,解离的时间视根尖的粗细老嫩不同而有差异。方法是：将固定后（或保存后）的根尖分装到试管内，用清水洗几次，吸干水，加入,1N,HCl,溶液，在,60,下水解,8,20,min,（,大蒜用,8,min,，洋葱用,8,min,，蚕豆侧根用,10min,，玉米用,20min,），解离成功的根尖，分生组织发白，伸长区已呈半透明，似烂状。解离后的根尖用水轻洗,2,3,次，以利于着色。,（五）染色、压片,制片时，取一根尖放在洁净的载玻片上，用刀片切取,1mm,左右的生长区，其余部分弃掉，滴加改良苯酚品红染色液染色,10,分钟左右，加盖玻片。用镊子在材料的地方轻压几下，使生长区的细胞分散开来，再在盖玻片上覆盖一层吸水纸，用解剖针或铅笔上的橡皮头敲击根尖部位，重复几次，力一次比一次大，以盖玻片不破裂为准。,（,六）观察,将制好的标本片，置于显微镜下先作低倍观察，选取不同分裂时期的典型细胞，换高倍镜观察，注意核及染色体的动态变化。,解离后倒出,HCl,，水洗,2,次，每次,3,5min,。将材料直接浸入改良苯酚品红中，盖上盖玻片。,中 期,前 期,后 期,