培养基制备.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,培养基的制备,培养基是用人工的办法将细菌生长所需的营养物质按一定比例配制成的营养基质。培养基中均应含有满足微生物生长发育且比例合适的水分、碳源、氮源、无机盐、生长因素以及某些特需的微量元素,外,还应具有适宜的酸碱度,pH,值,、缓冲能力、氧化还原电位和渗透压。,一、实验目的,学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤,。,二、实验器材,(1),试剂：各种商品化培养基,(2),器材：量筒、烧杯、天平、药匙、玻棒、,培养皿,、试管、分装漏斗。,三、方法与步骤,1,、营养琼脂培养基的配制,(1),熟悉,培养基说明。,(2),操作步骤：,1,）称药品,。,2,）加热溶解 需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分。,3,）过滤,液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用,4,层纱布趁热过滤，以利结果的观察。,但是供一般使用的培养基，该步可省略。,4,）分装,披实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上面造成污染。,分装量要求：,a),液体分装 分装高度以试管高度的,1/4,左右为宜。,b,）固体分装 约为试管高度的,1,5,，灭菌后制成斜面。,c,）半固体分装 以试管高度的,1/3,为宜灭菌后垂直待凝。,5,）加棉塞,试管口和三角瓶口塞上用普通棉花,(,非脱脂棉,),制作的棉塞。棉塞制作方法如。棉塞的形状、大小和松紧度要合适，四周紧贴管壁，不留缝隙，才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用。要使棉塞总长约,3,5,塞入试管口或瓶口内，以防棉塞脱落。有些微生物需要更好的通气，则可用,8,层纱布制成通气塞。有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞。,6,）包扎,加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸，以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。,7,）培养基的灭菌时间和温度，需按照各种培养基的规定进行，以保证灭菌效果和不损培养基的必要成份。培养基经灭菌后，必须放,37,培养,24h,做无菌检验,，无菌生长者方可使用。,图 例,培养基分装,斜面制作,四、注意事项,称药品用的药匙不要混用；称完药品应及时盖紧瓶盖。不同培养基各有配制特点，要注意具体操作。,五、实验报告,记录本实验配制培养基的名称、数量，并说明其配制过程，指明要点。,分装量的要求,琼,脂平板：,先将灭菌琼脂融化后冷却至,50,左右，以无菌操作倾注于灭菌平皿内，水平旋转平皿，待琼脂凝固后将平皿翻转，置,4,保存备用。,六、问题和思考,1,配制培养基有哪几个步骤,?,在操作过程中应注意些什么问题,?,为什么,?,2,培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌,?,若不能及时灭菌应如何处理？已灭菌的培,养基进行无菌检查？,采用强烈的理化因素使任何物体内外所有的微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施称之为灭菌。灭菌是要进行微生物纯培养的需要。,实验室最常用的灭菌方法是利用高温处理达到杀菌效果。,高温主要是使微生物的蛋白质和核酸等重要生物大分子发生变性。高温灭菌分为干热灭菌和湿热灭菌两大类。,湿热灭菌的效果比优于干热灭菌。湿热下热量易于传递，更容易破坏保持蛋白质稳定性的氢键等结构，加速其变性。,此外，过滤除菌、射线灭菌和消毒、化学药物灭菌和消毒等也是微生物学操作中不可缺少的常用方法。,消毒和灭菌,一、实验目的和内容,目的：了解消毒和灭菌的原理并掌握各种灭菌方法的操作步骤。,内容：,1,高压蒸汽灭菌法。,2,干热灭菌法。,二、实验材料和用具,待灭菌的培养基、高压蒸汽灭菌锅、过滤除菌器、培养皿、试管,三、操作步骤,高压蒸汽灭菌法,高压蒸汽灭菌法适用于培养基、无菌水、工作服等物品的灭菌。,1,加水,将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，以水面与三角架相平为至。,2,装料,将装料桶放回锅内，装入待灭菌的物品。装有培养基的容器放置时要防止液体溢出，瓶塞不要紧贴桶壁，以防冷凝水沾湿棉塞。,3,加盖,将盖上与排气孔相连接的排气软管插人内层灭菌桶的排气槽内，摆正锅盖，对齐螺口，然后以同时旋紧相对的两个螺栓的方式拧紧所有螺栓，并打开排气阀；,4,排气,加热待水煮沸后，水蒸汽和空气一起从排气孔排出。一般认为，当水沸后约,5min,，表明锅内空气已排净。,5,升压,当锅内空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始上升。,6,保压,当压力表指针达到所需压力刻度时，控制热源。开始计时并维持压力至所需时间。本实验用,121,，,20min,灭菌。,7,降压,达到所需灭菌时间后，关闭热源，让压力自然下降到零后，打开排气阀。放净余下的蒸汽后，再打开锅盖，取出灭菌物品，倒掉锅内剩水。,8.,灭菌后处理,需要摆斜面的趁热摆放斜面，需分装至平皿的等冷却至,56,时分装。,9,无菌检查,将已灭菌培养基于,37,培养,24h,，无杂菌生长，即可待用。,四、注意事项,使用灭菌锅应严格按照操作程序进行，避免发生事故；灭菌时，操作者切勿擅自离开，务必待压力下降到零后，才可打开锅盖。,五、实验报告,1,记录各种不同物品所用的灭菌方法及灭菌条件,(,温度、压力等,),。,2,试述高压蒸汽灭菌的操作过程及注意事项。,六、问题和思考,高压蒸汽灭菌中为什么要把冷空气排净，为什么在灭菌后不能骤然快速降压，并要再放尽锅内蒸汽才能打开锅盖,?,微生物接种技术是进行微生物实验和相关研究的基本操作技能。,无菌操作是微生物接种技术的关键。斜面接种、液体接种、固体接种和穿刺接种操作均以获得生长良好的纯种微生物为目的。,由于接种方法不同，采用的接种工具也有区别，如固体斜面培养体转接时用接种环；穿刺接种时用接种针，液体转接用移液管等。,微生物的接种技术,一、实验目的：,了解各种微生物接种方法。,二、实验材料和用具：,已灭菌培养基、接种环、接种针、酒精灯、移液管、记号笔,三、实验步骤：,1,、斜面接种技术,斜面接种是从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一新鲜斜面培养基上的一种接种方法。具体操作如下：,(1),贴标签,接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等。贴在距试管口约,2,3cm,的位置。,(,若用记号笔标记则不需标签,),。,。,(2),点燃酒精灯。,(3),接种,用接种环将少许菌种移接到贴好标签的试管斜面上。操作必须按无菌操作法进行。简述如下：,1),手持试管,将菌种和待接斜面的两支试管用大姆指和其他四指握在左手中使中,指位于两试管之间部位。斜面面向操作者，并使它们位于水平位置。,2),旋松管塞,先用手指松动棉塞，以便接种时拔出。,3),取接种环,右手拿接种环，在火焰上将环端灼烧灭菌然后将有可能伸入试管中的其余部分均灼烧灭菌，重复此操作再灼烧一次。,4),拔管塞,用右手的无名指、小指和手掌边先后取下菌种管和待接试管的管塞，然后让试管口缓缓过火灭菌,(,切勿烧得过烫,),。,试管拔塞后过火灭菌和取菌,8),塞管塞,取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞旋上。不要用试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁空气。,9),将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。,2,、穿刺接种技术,穿刺接种技术是一种用接种针从菌种斜面上挑取少量菌体并把它穿刺到固体或半固体的深层培养基中的接种方法。经穿刺接种后的菌种常作为保藏菌种的一种形式，同时也是检查细菌运动能力的一种方法，它只适宜于细菌和酵母的接种培养。具体操作如下,(1),贴标签。,(2),点燃酒精灯。,(3),穿刺接种，方法如下,1),手持试管。,2),旋松棉塞。,3),右手拿接种针在火焰上将针端灼烧灭菌，接着把在穿刺中可能伸入试管的其他部位也灼烧灭菌；,4),用右手的小指和手掌边拔出棉塞。接种针先在培养基部分冷却再用接种针的针尖沾取少量菌种。,5),接种有两种手持操作法。一种是水平法，它类似于斜面接种法。一种则称垂直法，如图所示。尽管穿刺时手持方法不同，但穿刺时所用接种针都必须挺直，将接种针自培养基中心垂直地刺入培养基中。穿刺时要做到手稳、动作轻巧快速，并且要将接种针穿刺到接近试管的底部，然后沿着接种线将针拔出。最后，塞上棉塞，再将接种针上残留的菌在火焰上烧掉。,(4),将接种过的试管直立于试管架上，放在,37,或,28,恒温箱中培养。,24h,后观察结果,(,注意：若具有运动能力的细菌，它能沿着接种线向外运动而弥散，故形成的穿刺线较粗而散、反之则细而密,),。,斜面划线法（,a,）和不同细菌直线接种长出的菌苔形态（,b,）,a,）水平穿刺接种；,b,）垂直穿刺接种,四、实验报告,列表比较各种接种方法及注意事项。,五、问题和讨论,1,、,斜面接种取菌前为什么要将灼烧过的接种针在无菌培养基上沾一下？,穿刺接种时能否将接种针直接穿透培养基？,