第二章 蛋白质与非蛋白含氮化合物的代谢紊乱.pps

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,第二章 蛋白质与非蛋白含氮 化合物的代谢紊乱,温州医学院 陈筱菲,退出,卫生部“十一五”规划教材 全国高等医药教材建设研究会规划教材,主要内容,一、体液蛋白质及其代谢紊乱,二、氨基酸代谢紊乱,三、嘌呤核苷酸代谢紊乱,四、蛋白质和氨基酸检测,第一节 体液蛋白质及其代谢紊乱,一、血浆蛋白质的功能和分类,三、血浆蛋白质及其异常,四、其他体液蛋白质,二、血清蛋白质电泳组分的临床分析,返回章,一、血浆蛋白质的功能和分类,营养作用,维持血浆胶体渗透压,作为运载蛋白,组成血液,pH,缓冲系统,抑制组织蛋白酶,在血浆中起催化作用的酶,参与代谢调控作用的蛋白质和肽类激素,参与凝血与纤维蛋白溶解,组成体液免疫防御系统（,Ig,与补体）,血浆蛋白质的功能,返回节,血浆蛋白质的分类,最简单,：分为清蛋白和球蛋白,较实用,：由电泳获得血浆蛋白质概貌,功能分类,：比较复杂，但方便研究,返回节,。,醋纤膜电泳或琼脂糖电泳：,清蛋白,1,球蛋白,2,球蛋白,球蛋白,球蛋白,分辨率高时：,可有,1,和,2,2,中也可有两条,如果采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，,在适当条件下可以分出,30,多个,区带。,电泳分类法,返回节,功能分类法,运输载体类,血浆脂蛋白：包括,CM,、,VLDL,、,LDL,、,HDL,等,前清蛋白与清蛋白,甲状腺素结合球蛋白,皮质素结合球蛋白,类固醇激素结合球蛋白,视黄醛结合蛋白,转铁蛋白,触珠蛋白,血色素结合蛋白,铜蓝蛋白,返回节,蛋白酶抑制物,：包括,1,-,抗胰蛋白酶、,1,-,抗糜蛋,白酶、,2,-,巨球蛋白等,6,种以上,血清酶类：,血浆固有酶如,LCAT,等,组织细胞少量释放的细胞内酶,细胞破裂而进入血循环的细胞内酶,蛋白类激素：,胰岛素、胰高血糖素、生长激素等,补体蛋白类,凝血蛋白类,免疫球蛋白类,功能分类法,返回节,影响血浆蛋白质浓度的因素,急性时相反应,（,APR,）：,对炎症和组织损伤的非特异性反应，血浆蛋白质,如,1,-,抗胰蛋白酶、,1,-,酸性糖蛋白、结合珠蛋白、铜,蓝蛋白、,C4,、,C3,、,纤维蛋白原和,C-,反应蛋白等浓度显著,升高或升高，而血浆前清蛋白、清蛋白、转铁蛋白浓度,则出现相应下降,这些血浆蛋白质统称为急性时相反,应蛋白。,增加的蛋白质称为正向,APRs,下降的蛋白质称为负向,APRs,急性时相反应,返回节,APR,的机制,是对炎症的一般反应。,损伤部位释放的细胞因子，包括白介素、肿瘤坏死,因子,和,、,干扰素以及血小板活化因子等，引发,肝细胞中上述蛋白质合成量的改变。,正向,APPs,是机体防御机制的一个部分，尤其是活化,补体、蛋白酶抑制剂对酶活性的控制、触珠蛋白,对被破坏红细胞中释放,Hb,的保护作用等。,作为营养蛋白的负向,APRs,此时合成减少，可为合成,正向,APRs,提供更多的氨基酸原料。,返回节,APR,的时相,C-,反应蛋白首先升高,12,小时内,1,-,酸性糖蛋白也升高,然后,1,-,抗胰蛋白酶、触珠蛋白、,C4,和纤,维蛋白原升高,最后是,C3,和铜蓝蛋白升高,通常在,2,5,天内这些,APRs,达到最高值,返回节,APR,的临床应用,帮助监测炎症发生及过程和观察治疗反应,尤其是那些升高最早和最多的蛋白质,返回节,类固醇激素,疾病时血浆蛋白,质的浓度变化被体内,类固醇激素的状态复,杂化，包括类固醇激,素治疗、妊娠和口服,避孕药。,类固醇激素对血浆蛋白质浓度的影响,蛋白质,皮质醇,雄激素,雌激素,前清蛋白,清蛋白,N,1,-,抗胰蛋白酶,N,1,-,酸性糖蛋白,高密度脂蛋白,N,触珠蛋白,铜蓝蛋白,N,N,转铁蛋白,N,低密度脂蛋白,N,IgG,N,注：为增加，为下降，,N,无改变,返回节,二、血清蛋白质电泳组分的临床分析,醋纤膜电泳正常百分含量,清蛋白：,57,68,1,球蛋白：,1.0,5.7,2,球蛋白：,4.9,11.2,球蛋白：,7,13,球蛋白：,9.8,18.2,返回节,各电泳区带的主要蛋白质及其含量,前清蛋白,前清蛋白,0.20.4g/L,清蛋白,清蛋白,3555,1,-,球蛋白,1,-,抗胰蛋白酶,1,-,酸性糖蛋白,甲胎蛋白,高密度脂蛋白,0.92.0,0.51.5,3105,1.73.25,2,-,球蛋白,触珠蛋白,2,-,巨球蛋白,铜蓝蛋白,0.32.0,1.254.1,0.20.5,-,球蛋白,转铁蛋白,低密度脂蛋白,C4,2,-,微球蛋白,纤维蛋白原,C3,2.03.5,0.61.55,0.0010.002,2.04.0,0.71.5,-,球蛋白,IgA,IgG,IgM,C-,反应蛋白,0.74.0,7.016,0.42.3,0.008,正常图谱 肾病综合征,返回节,肝硬化,肝硬化,(-,桥,),肝硬化,(,不典型,-,桥,),多发性骨髓瘤,多发性骨髓瘤,IgG,型 多发性骨髓瘤,IgA,型,返回节,其他异常区带,高浓度的甲胎蛋白可表现为清蛋白与,1,区带间一条清,晰的新带。,C-,反应蛋白异常增高可出现特殊界限的,区带。,单核细胞白血病可出现由于溶菌酶异常增多的,后区带,等。,返回节,球蛋白增多与,M,蛋白,多克隆性增多：,区带呈弥散性升高。,见于反复或慢性感染、自身免疫性疾病、肝细胞,疾病或寄生虫感染。,单克隆性增多,M,蛋白 浆细胞病、尤其是恶性浆,细胞病时，异常浆细胞克隆增殖，产生大量单克,隆免疫球蛋白或其轻链或重链片段，病人血清或,尿液中可出现结构单一的,M,蛋白，在蛋白电泳时,呈现一个色泽深染的窄区带。,返回节,各种,M,蛋白出现频率,M,蛋白较多出现在,或,区，偶见于,区。,M,蛋白的电泳位置可大致反映出免疫球蛋白的类型，,如,IgA,位于,区带后部或,和,区带之间，,IgG,位于,r,区带后部。,但确定,M,蛋白及其类型需采用特异性抗体做免疫固,定电泳或免疫电泳。,IgG52,、,IgA21,、,IgM12,、,IgD2,、,IgE0.01,轻链（,或,）,11,，,重链（,、,、,或,）,1,两种或多种克隆蛋白，占,0.5,。,返回节,三、血浆蛋白质及其异常,1.,前清蛋白,2.,清蛋白,3.,1,-,抗胰蛋白酶,4.,1,-,酸性糖蛋白,5.,触珠蛋白,6.,2,-,巨球蛋白,7.,铜蓝蛋白,8.,转铁蛋白,9.C-,反应蛋白,返回节,生理功能,作为运载蛋白和组织修补材料。,RBP,是转运视黄醇的蛋白质。,TTR,能转运,T,4,，,大约占结合,T,4,的,10,甲状腺素结合,球蛋白约占结合甲状腺激素的,75,清蛋白结合甲,状腺激素的其余部分。,在血浆中,RBP,与,TTR,以,1:1,比例结合成复合物可避,免小分子,RBP,从肾小球滤过，减少,RBP,释放到非靶,细胞中。,返回节,前清蛋白（,PA,）,在电泳中显示在清蛋白前方故而得名主要包括：,视黄醇结合蛋白（,RBP,）,甲状腺素转运蛋白（,TTR,）,临床意义,作为营养不良的早期指标。,作为肝功能不全的指标，下降早。,是负性急性时相反应蛋白：在急性炎症、恶性,肿瘤、创伤等任何急需合成蛋白质的情况下，,血清,PA,均迅速下降。,返回节,清蛋白,不含糖，高度溶于水，每分子可以带有,200,个,以上负电荷。,ALB,是血浆中含量最多的蛋白质，占血浆总蛋,白的,57,68,。,也是大部分细胞外液的主要蛋白成分，全身,大约,60,的,ALB,存在于细胞外液。,返回节,代谢,肝细胞合成，每天,11,14.7g,肝脏合成储备能力很大，在肾病综合征时,合成速率可增高到正常的,300,以上,半寿期约,15,19,天,遗传性变异达,80,多种,临床意义,低,ALB,血症见于下述许多疾病情况：,（,1,）清蛋白合成不足：,急性或慢性肝脏疾病；,蛋白质营养不良或吸收不良,（,2,）清蛋白丢失：,由尿中丢失；,胃肠道丢,失；,皮肤丢失,（,3,）清蛋白分解代谢增加,（,4,）清蛋白的分布异常,（,5,）无清蛋白血症,返回节,生理功能,（,1,）保持血浆胶体渗透压,（,2,）重要的营养蛋白,（,3,）血浆中主要的载体蛋白,（,4,）具有缓冲酸碱物质的能力,1,-,抗胰蛋白酶,(,1,-AT,或,AAT),蛋白酶和抗蛋白酶,蛋白酶可清除病原微生物、坏死组织和衰老,的红细胞蛋白酶含量过高或活性过强可使正常,组织和细胞受到破坏。,抗蛋白酶系统：机体为对抗这些蛋白酶的异,常作用而产生抗蛋白酶系统下降可导致某些,疾病。,返回节,AAT,的多种遗传表型,已知的至少有,75,种，表达的蛋白质有,M,型和,Z,型、,S,型，,PiMM,型最多，占人群,95%,以上。,类型：,PiMM,、,PiMS,、,PiMZ,、,PiSS,、,PiSZ,、,PiZZ,活力：,100%,、,80,、,60,、,60,、,35,、,15,返回节,生理功能,占血清中抑制蛋白酶活力的,90,左右多形核白细胞起吞噬作用时释放溶酶体蛋白水解酶，,AAT,是这些酶的生理抑制物。,临床意义,（,1,）,AAT,缺陷与肺气肿：,ZZ,型、,SS,型甚至,MS,表型。,当吸入尘埃和细菌，肺部多形核白细胞吞噬,活跃，溶酶体弹性蛋白酶释放，作用于肺泡,壁的弹性纤维。低血浆,AAT,还可发现于胎儿呼,吸窘迫综合征。,（,2,）,AAT,缺陷与肝损害：,ZZ,表型，,ZZ,蛋白聚集在肝,细胞，可致肝硬化。,ZZ,表型的新生儿中,10,20,；,ZZ,表型的某些成人。,（,3,）急性时相反应时,AAT,增加。,返回节,1,-,酸性糖蛋白,(,1,-AG,或,AAG),生理功能,主要的急性时相反应蛋白，在急性炎症时,增高，与免疫防御功能有关。,AAG,可以结合利多卡因和心得安等，在急,性心肌梗死时，,AAG,作为一种急性时相反,应蛋白升高后，使药物结合状态增加而游,离状态减少，因而需要增加药物剂量。,返回节,临床意义,（,1,）主要作为急性时相反应的指标，在风湿病、,恶性肿瘤及心肌梗死等炎症或组织坏死时一,般增加,3,4,倍。,（,2,）随糖皮质激素而增加，包括内源性的库欣,综合征和外源性强的松、地塞米松等药物,治疗时；雌激素使其降低。,（,3,）在营养不良、严重肝损害、肾病综合征以,及胃肠道疾病致蛋白严重丢失等情况下,AAG,降低。,返回节,触珠蛋白,2,2,四聚体,链有,1,及,2,两种，而,1,又有,1F,及,1s,两种遗传变异体,返回节,触珠蛋白的几种遗传表型,表 型,亚单位的结构,组 成,Hp1-1,(,1F,)2,2,1F,1S,2,(,1S,)2,2,分子量约为,80kD,，,链含氨基,酸残基,83,个，,链含氨基酸残,基,245,个,Hp2-1,(,1S,2,2,)n,(,1F,2,2,)n,分子量为,120kD-200kD,的聚合,体，由于,n,不同，可以在电泳,中出现多条带,Hp2-2,(,2,)n,N=3-8,分子量为,160kD-400kD,，,由于,n,不同，可在电泳中出现多条带,生理意义,Hp,的主要功能是能与红细胞中释放出的游,离血红蛋白结合，每分子,Hp,可结合两分子,Hb,。,Hp,可防止,Hb,从肾丢失而为机体有效地,保留铁，并能避免,Hb,对肾脏的损伤。,Hp,不能重新被利用，溶血后其含量急剧降,低，血浆,Hp,浓度多在一周内由再生而恢复。,返回节,临床意义,（,1,）溶血性疾病如溶血性贫血、输血反应、疟疾时,Hp,含量明显下降。连续观察溶血性疾病合适的,组合试验：包括血浆,Hp,、,乳酸脱氢酶和游离血,红蛋白。血管外溶血不会使,Hp,发生变化。,（,2,）烧伤和肾病综合征引起大量清蛋白丢失，血,Hp,常明显增加，此时属于急性时相反应时的,Hp,增,加。,（,3,）雌激素使,Hp,减少，多数急慢性肝病包括急性病,毒性肝炎和伴黄疸的肝硬化患者，由于雌激素,分解代谢减少，其血清,Hp,降低。,返回节,2,巨球蛋白,(,2,-M,或,AMG),是血浆中分子量最大的蛋白质,生理功能,蛋白酶抑制剂，能与蛋白水解酶如纤维蛋白溶酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶及组织蛋白酶,D,结合而抑制这些酶的活性。,返回节,临床意义,低清蛋白血症，尤其是肾病综合征时，,2,-MG,含量可显著增高，可能系一种代,偿机制以保持血浆胶体渗透压。,2,-MG,不属于急性时相反应蛋白。,返回节,铜蓝蛋白,含铜的,2,球蛋白，每分子含,6,8,个铜原子，,由于含铜而呈蓝色。,95%,的血清铜存在于,Cp,中，另,5%,呈可扩散状,态。血循环中,Cp,为铜没有毒性的代谢库。,返回节,生理功能,与氧化还原反应有关，既能起氧化作用又能,起抗氧化作用。,具有铁氧化酶作用，能将,Fe,2+,氧化为,Fe,3+,，,Fe,3+,再结合到转铁蛋白上，使铁不具毒性。,还有抑制膜脂质氧化的作用。,返回节,临床意义,（,1,）协助诊断,Wilson,病,血浆,Cp,减少，血浆游离铜增加，铜沉积在肝可,引起肝硬化，沉积在脑基底节的豆状核则导致豆,状核变性。,小部分患者,Cp,水平正常，可能是铜掺入,Cp,时所,需的携带蛋白减少。,80%,肝受损者中血清,Cp,低于,100mg/L,，而,20%,肝受损者,Cp,不低于,300mg/L,。,患者其他指标变化：血清总铜降低、游离铜增,加和尿铜排出增加。,（,2,）为弱和迟发反应的,APP,；,在营养不良、严重,肝病及肾病综合征时往往下降。,返回节,转铁蛋白,生理功能,从小肠进入血液的,Fe,2+,在血液中被铜兰蛋,白氧化为,Fe,3+,，,再被,TRF,的载体蛋白结合。,每种细胞表面都有,TRF,受体，此受体对,TRF-Fe,3+,复合物比对,TRF,的载体蛋白亲和,力高得多，与受体结合后，,TRF-Fe,3+,被摄,入细胞。,TRF-Fe,3+,复合物可将大部分,Fe,3+,运输到骨,髓，用于,Hb,合成，小部分则运输到各组,织细胞，用于形成铁蛋白，以及合成肌,红蛋白、细胞色素等。,返回节,临床意义,（,1,）用于贫血的鉴别诊断,在缺铁性的低血色素贫血中，,TRF,代偿性合成增加，但血浆铁含量低，结合铁的,TRF,少，所以铁饱和度很低（正常值在,30%,38%,）。,再生障碍性贫血时，血浆中,TRF,正常或低下，由于红细胞对铁的利用障碍，使铁饱和度增高。在铁负荷过量时，,TRF,水平正常，而饱和度可超过,50%,，甚至达,90%,。,返回节,（,2,）负性急性时相反应蛋白,炎症、恶性病变时常随着清蛋白、清蛋白,同时下降。,（,3,）营养状态指标,在营养不良及慢性肝脏疾病时下降与清蛋,白相比，体内转铁蛋白总量较少、生物半寿,期较短，故能及时地反映脏器蛋白的急剧变,化。在高蛋白膳食治疗时，血浆中浓度上升,快，是判断治疗效果的良好指标。,返回节,总铁结合力（,TIBC,）,铁饱和度,所有,TRF,上结合的铁量为,TIBC,。从,TIBC,可间接计算,TRF,含量及,TRF,的铁饱和度：,TRF,（,mg/L,）,=TIBC(g/L),0.70,铁饱和度（）血清铁,/TIBC,。,由于假设所有血浆铁都结合到,TRF,上，所以由上,式估计的,TRF,浓度比真实值高出,16,20,。,而当,TRF,结合铁到半饱和时，部分铁会结合到,其他蛋白如清蛋白上。,目前,TRF,的免疫比浊测定法已在许多实验室使用，,因而已在很大程度上代替了,TIBC,的测定。,TIBC(g/L)=TRF,（,mg/L,）,1.43,返回节,生理功能,CRP,不仅结合多种细胞、真菌及原虫等体内的多糖物质，在钙离子存在下，还可以结合卵磷脂和核酸。,CRP,可以引发对侵入细胞的免疫调理作用和吞噬作用，结合后的复合体具有对补体系统的激活作用，表现炎症反应。,返回节,C-,反应蛋白,因在急性炎症病人血清中出现的可以结合肺炎球菌细胞壁,C-,多糖的蛋白质而命名。,CRP,由肝细胞所合成，电泳分布在慢,区带，有时可以延伸到,区带。,临床意义,CRP,是第一个被认识的急性时相反应蛋白，是极,灵敏的指标，血浆中,CRP,浓度在急性心肌梗死、,创伤、感染、炎症、外科手术、肿癌浸润时迅速,显著地增高，可达正常水平的,2000,倍。,CRP,是非特异性指标，主要用于结合临床病史监测,疾病：如评估炎症性疾病的活动度；监测系统性红,斑狼疮、白血病和外科手术后并发的感染；监测肾,移植后的排斥反应等。,返回节,四、其他体液蛋白质,包括尿液、脑脊液、胸腹水、羊水、唾液和,粪便中的蛋白质。,返回节,尿液蛋白质,正常尿总蛋白仅,20,150mg,其中,ALB,约占,30,，总量,通常小于,10mg,，,其次是由肾小管分泌的,Tamm-Horsfall,蛋白约占,21,。,ALB,增多是肾小球基底膜通透性增加的信号。,大分子蛋白质如,IgG,、,IgM,、,AMG,增多是基底膜选择性或,筛网功能丧失的表现。,小分子蛋白质如,2,-,微球蛋白、,1,-,微球蛋白,RBP,增多,是肾小管重吸收功能下降的表现。,溢出性蛋白尿包括血红蛋白、肌红蛋白和,Ig,轻链等。,返回节,（二）脑脊液蛋白质,脑脊液总蛋白浓度为,0.15,0.45g/L,。,正常成分：分子量较小的蛋白质如,ALB,、,TRF,和,TTR,，,未见到分子量大于,IgG,的蛋白质。,返回节,脑脊液总蛋白增多,（,1,）血脑屏障的通透性增加，如脑炎、脊髓灰质炎、,细菌性脑膜炎、隐球菌性脑膜炎、病毒性脑膜炎等。,（,2,）引起脑脊液循环梗阻的疾病如脊髓肿瘤。,（,3,）脑出血。,（,4,）脑软化、脑退行性疾病、神经性病变等。,脑脊髓膜合成免疫球蛋白增多见于神经性梅毒、多发,性硬化等。,返回节,CSF,普通蛋白电泳特征,PA,增高：脑萎缩、脑积水及中枢神经变性病。,ALB,增加：脑血管病变、椎管阻塞。,、,球蛋白增加：脑膜炎、脑肿瘤，,球蛋白增加,可见于动脉硬化、脑血栓等疾病。,球蛋白明显增高见于脑肿瘤。,多发性硬化症为中枢神经系统脱髓鞘疾病，,区可见,稀疏的,IgG,寡克隆带。,返回节,第二节 氨基酸代谢紊乱,一、氨基酸代谢紊乱的种类,二、苯丙酮酸尿症,三、酪氨酸血症,四、含硫氨基酸代谢紊乱,返回章,由参与氨基酸代谢的酶或其他蛋白因子缺,乏引起，为相关基因突变所致，至今已发现,70,余种。,一、氨基酸代谢紊乱的种类,遗传性氨基酸代谢紊乱,返回节,氨基酸血症 氨基酸尿症,氨基酸血症：当酶缺陷出现在代谢途径的起点时，其催化的氨基酸将在血循环中增加。,氨基酸尿症：血中增加的氨基酸从尿中排出。,中间代谢产物血尿浓度增加：当酶的缺陷出现在 代谢途径的中间时，则此酶催化反应前的中间代 谢产物便在体内堆积。,另外代谢途径的产物（血尿中）增加：由于正常 降解途径受阻，氨基酸可通过另外的途径代谢。,返回节,遗传性氨基酸代谢紊乱的缺陷酶 及其血中增高的成分,疾病名称 缺乏的酶 血浆中增高的成分,苯丙酮酸尿症 苯丙氨酸羟化酶 苯丙氨酸、苯丙酮酸,I,型酪氨酸血症 延胡索酸乙酰乙酸酶 酪氨酸、甲硫氨酸,尿黑酸尿症 尿黑酸氧化酶 尿黑酸（轻度）,同型胱氨酸尿症 胱硫醚合成酶 甲硫氨酸、同型胱氨酸,组氨酸血症 组氨酸酶 组氨酸、丙氨酸,甘氨酸血症 甘氨酸氧化酶 甘氨酸,支链酮酸尿症 支链酮酸氧化酶 缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸等,胱硫醚尿症 胱硫醚酶 胱硫醚,型高脯氨酸血症 脯氨酸氧化酶 脯氨酸,精氨酸琥珀酸尿症 精氨酸琥珀酸酶 谷氨酰胺、脯氨酸、甘氨酸等,精氨酸血症 精氨酸酶 精氨酸,二、苯丙酮酸尿症,主要由苯丙氨酸羟化酶缺乏引起的常染色体隐性遗传病。,少数,PKU,二氢蝶呤还原酶缺陷引起。,返回节,三、酪氨酸血症,延胡索酰乙酰乙酸水解酶活性,低对,-,羟苯丙酮酸氧化酶活性也下降,酪氨酸在血尿中增加，甲硫氨酸,血浓度也增加。,延胡索酰乙酰乙酸可还原生成,琥珀酰乙酰乙酸，后者如再脱羧,则成为琥珀酰丙酮。琥珀酰丙酮,可损害肝与肾的功能。,酪氨酸分解代谢,I,型酪氨酸血症,返回节,四、含硫氨基酸代谢紊乱,含硫氨基酸包括甲硫氨酸、半胱氨酸和胱氨酸，胱氨酸是两个半胱氨酸脱氢后以二硫键结合形成。,同型半胱氨酸比半胱氨酸多一个次甲基（,-CH,2,），,是甲硫氨酸代谢的中间产物。,返回节,同型半胱氨酸,同型半胱氨酸不稳定，易氧化成同型胱,氨酸或同型半胱氨酸,-,半胱氨酸二硫化合,物，仅少量以还原型同型半胱氨酸存在于,血浆。,这些含硫化合物在血浆中大部分与蛋白质,结合。我们通常所指的同型半胱氨酸包括,所有这些结合和游离的含同型半胱氨酸的,化合物。,返回节,第三节 嘌呤核苷酸代谢紊乱,一、嘌呤核苷酸代谢,二、高尿酸血症,三、高尿酸血症与痛风,返回章,嘌呤核苷酸的合成：从头合成途径、补救途径,嘌呤核苷酸的分解：终产物是尿酸,一、嘌呤核苷酸代谢,返回节,嘌呤核苷酸合成代谢,二、高尿酸血症,由嘌呤代谢紊乱或尿酸排泄障碍引起。,嘌呤的合成、吸收和分解代谢发生紊乱，将出现尿酸生成过多而导致高尿酸血症。人和猿类体内缺乏尿酸酶，不能将尿酸分解成尿囊素，进一步再分解成,NH,3,、,CO,2,和,H,2,O,，,人体内尿酸通过肾脏排出体外。,若尿酸排泄出现障碍，可导致高尿酸血。,返回节,（一）尿酸排泄障碍,当肾小球滤过率下降，或近端肾小管对尿酸的重吸收增加或（和）分泌功能减退时，便导致高尿酸血症。,原发性高尿酸血症，机制不明的多基因性遗传缺陷、慢性肾疾患等引起。,返回节,（二）尿酸生成过多,1.,嘌呤合成代谢紊乱,体内,80%,尿酸来源于嘌呤的生物合成，,嘌呤合成代谢紊乱可致高尿酸血症。,其中大多数属多基因遗传缺陷，机制,不明。由酶缺陷引起者仅占少,数,。,返回节,酶缺陷,（,1,）次黄嘌呤,-,鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（,HGPRT,）,缺乏。；,（,2,）,PRPP,合成酶亢进。,（,3,）葡萄糖,-6-,磷酸酶（,G6pase,）,缺乏，引起葡萄糖,-6-,磷酸增多，并沿磷酸戊糖代谢途径转化成较多的,PRPP,，,使嘌呤合成增多。,（,4,）腺嘌呤磷酸核糖转移酶（,APRT,）,缺乏，腺嘌呤不能经补救途径合成腺苷酸而出现堆积，腺嘌呤的代谢产物,2,，,8-,二羟腺嘌呤由尿排出增加，可产生肾结石。,返回节,2.,嘌呤吸收增多,体内,20%,尿酸来源于食物中的嘌呤，,摄入富含嘌呤食物过多可诱发痛风发,作，但不是发生高尿酸血症的原因。,3.,嘌呤分解增加,在骨髓增殖性疾病等，有旺盛的细胞,合成和分解，从而出现核酸分解亢进，,嘌呤和尿酸生成增多。,返回节,高尿酸血症的原因也可归纳为原发性和继发性两方面，原发性包括原发性肾脏排泄尿酸障碍和原发性尿酸产生过多，继发性包括各种肾脏疾病以及引起嘌呤分解过多的疾病。,返回节,三、高尿酸血症与痛风,痛风（,gout,）,的概念,由于遗传性和（或）获得性的尿酸排泄减,少和（或）嘌呤代谢障碍，导致高尿酸血症，,当出现尿酸盐结晶形成和沉积，并引起特征,性急性关节炎、痛风石、间质性肾炎、尿酸,性尿路结石时，即为痛风，严重者有关节畸,形及功能障碍。,痛风是一组疾病，高尿酸血症中,10,20,发生痛风。,返回节,尿酸钠结晶形成,血浆中尿酸盐以单钠尿酸盐形式存在，其溶解度很低。,当血液,pH,为,7.4,时，尿酸钠的溶解度约为,0.42mmol/L,，,0.42mmol/L,时已成过饱和状态。,当浓度,0.48mmol/L,持久不降，如遇有下列情况即可使尿酸钠呈微小结晶析出：,血浆清蛋白及,1,2,球蛋白减少。,局部,pH,降低。,局部温度降低。,返回节,尿酸钠沉淀与炎症反应,结晶易沉淀在血管较少、粘多糖含量较丰富的结缔组织、软骨和关节腔内。,运动、饮酒、应激、局部损伤等都可诱发这些部位急性 炎症发作。,如运动时这些组织容易发生缺氧，于是出现糖酵解加速和乳酸产生增多，引起,pH,降低，导致局部尿酸钠结晶析出。,微小的尿酸钠结晶表面可吸附,IgG,，,并在补体参与下诱发多型核白细胞的吞噬作用。结晶被吞噬后可促使白细胞膜破裂，释放出各种炎症介质，如趋化因子，溶酶体和胞浆内的各种酶，导致组织发生炎症反应。,返回节,第四节 蛋白质和氨基酸检测,一、体液总蛋白测定,二、体液清蛋白测定,三、蛋白质电泳技术,四、蛋白质免疫化学法测定,五、氨基酸检测,返回章,一、血清总蛋白测定,血清总蛋白包括数量众多的各种蛋白质，定量,测定时作了如下假定：,（,1,）所有血浆蛋白是单纯的多肽链，糖脂类和金,属有机物等均不计在内，其含氮量平均为,16,；,（,2,）几百种血浆蛋白理化性质虽不同，但与化学试剂的反应性（如呈色、沉淀）一致。,返回节,（一）凯氏定氮法,1883,年建立，是经典的蛋白质测定方法。根据蛋白质平均含氮量,16,计算蛋白浓度。该法结果准确性好，精密度高，灵敏度高，是公认的参考方法，目前用于标准蛋白质的定值和校正其他方法等，并可适用于一切形态（固体和液体）样品。操作复杂、费时，不适合血清总蛋白等常规测定，而且血清等样品中各种蛋白质含氮量有少许差异，尤其在疾病状态差异可能更大。,返回节,（二）双缩脲法,蛋白质中的肽键（,-CONH-,）,在碱性溶液中能,与,Cu,2+,作用产生紫红色络合物，因至少含,2,个,-CONH-,基团才能与,Cu,2+,络合，故三肽以,上才能反应，在体液中小分子肽含量极低。,该法对各种蛋白质呈色基本相同，特异性和,准确度好，精密度好；显色稳定性好，试剂,单一，方法简便；灵敏度虽不高，但对血清,总蛋白定量较为适用。对蛋白质含量很低的,其他体液如脑脊液、胸腹水和尿液等不合适。,返回节,（三）酚试剂法,蛋白质中酪氨酸和色氨酸能还原磷钨酸磷,钼酸试剂起蓝色反应。,Lowry,酚试剂改良法：先,用碱性铜溶液与蛋白质反应，再加入酚试剂，,则铜,-,肽键络合物中的酪氨酸和色氨酸使磷钨,酸和磷钼酸还原为钨蓝和钼蓝，使呈色灵敏度,达到双缩脲法的,100,倍左右。,本法灵敏度高。各种蛋白质中酪氨酸和色氨,酸的含量不同，如清蛋白含色氨酸,0.2%,，而球,蛋白含色氨酸,2%,3%,。因此，本法测定纯单一,蛋白质较合适。本法易受还原性化合物的干扰，,如带,-SH,的化合物、糖类、酚类等。,返回节,（四）紫外分光光度法,芳香族氨基酸在,280nm,处有吸收峰。,方法的准确性受该种氨基酸的含量影响甚大。,尿酸和胆红素在,280nm,附近有干扰，所以不适,合血清等。常用于较纯的酶、免疫球蛋白等蛋,白质测定。,可保留蛋白质制剂的生物活性。,核酸最大吸收峰为,260nm,，在,280nm,也有较强,的光吸收，因而测定蛋白质可采用两个波长的,吸光度予以校正，即蛋白质浓度（,g/L,）,1.45A280,0.74A260nm,。,返回节,（五）染料结合法,在酸性环境蛋白质分子可解离带上正电荷,-NH,3+,，,与染料阴离子产生颜色反应。常用的,染料有氨基黑、丽春红、考马斯亮蓝、邻苯,三酚红钼等。前两种常作为血清蛋白醋酸纤,维素薄膜电泳或琼脂糖凝胶电泳的染料。,返回节,考马斯亮蓝：常用于需更高呈色灵敏度的,蛋白电泳中，也可用于测定尿液、脑脊液等,的蛋白质，优点是简便、快速、灵敏，缺点,是不同蛋白质与染料的结合力不一致，且试,剂对比色杯有吸附作用。不实用。,邻苯三酚红钼法,返回节,（六）比浊法,基于某些酸如三氯醋酸、磺基水杨酸等能与蛋白,质结合而产生微细沉淀，测定悬浮液的浊度大小,与蛋白质的浓度成正比。,该法优点是操作简便、灵敏度高。,缺点是影响浊度大小的因素较多，包括加入试剂,的手法、混匀技术、反应温度等，故精密度差；,且各种蛋白质形成的浊度亦有较大的差别。一般,用于测定尿液、脑脊液等蛋白质浓度较低的样品，,其标准品推荐使用含正常白,/,球蛋白比值的血清标,准品作适当稀释。,返回节,二、血清清蛋白测定,清蛋白是血清内含量最多的一种蛋白质，,以前用硫酸铵盐析法沉淀球蛋白，再用,总蛋白测定方法测定上清液中的清蛋白。,目前测定清蛋白的方法有电泳法、免疫,法和染料结合法。,返回节,溴甲酚绿法（,BCG,）,溴甲酚紫法（,BCP,）,在酸性环境清蛋白具有与阴离子染料,BCG,和,BCP,结合的特性，而球蛋白基本不结合这些染料。,BCG,法和,BCP,法灵敏度高、操作简便、重复性好，,能自动化。,BCG,法最常用，虽然,和,球蛋白与,BCG,也能起,慢反应，但缩短反应时间即能去除此非特异性,反应，自动化分析仪的普遍应用使比色能在反,应,10,30,秒后立即进行，因而使该法变得很实用。,BCP,法无球蛋白的非特异性干扰，但与牛、猪,等动物血清清蛋白的反应性比与人的反应性低，,质控血清往往是动物血清，故其应用受限。,返回节,三、蛋白质电泳技术,返回节,电泳技术广泛应用于临床实验室检测血清、尿液和脑脊液等体液蛋白质，醋酸纤维素薄膜（,CAM,）和琼脂糖凝胶等是采用最广的凝胶介质，其次还有毛细管电泳和一些专门的电泳技术，如蛋白质印迹、免疫固定和双向电泳等。,（一）血清蛋白电泳,SPE,通常采用,CAM,或琼脂糖凝胶，在,pH8.6,的缓冲液中，血清中各种蛋白质都电离成负,离子，在电场中向正极移动；因各种蛋白质,pI,不同，在相同,pH,下带电荷量有差异，同时,各蛋白质的分子大小与分子形状也不相同，,因此在同一电场中泳动速度不同；带电荷多,，分子量小者，泳动较快，反之则较慢。,返回节,1.,尿蛋白普通电泳,采用,CAM,或琼脂糖凝胶，常需浓缩尿液和,采用高灵敏度的染色方法如金染或银染。,一些自动电泳仪采用反复多次在琼脂糖凝,胶上加样，也可不需浓缩尿液，电泳后以考,马斯亮蓝染色，分离结果可呈现,ALB,、,1,、,2,、,1,、,2,和,球蛋白六个区带甚至七个,区带（两个,2,区带）；这种电泳能得到尿蛋,白的全貌，对许多尿蛋白能做出初步的分类,判断，但因为并非按分子量分离蛋白质，一,般只作为过筛试验。,返回节,（二）尿蛋白电泳,尿蛋白普通电泳图谱,返回节,尿蛋白普通电泳各类图谱,A.,清蛋白尿,B.,选择性肾小球性清蛋白尿,C.,非迭择性蛋白尿,D.,混合性蛋白尿,E.,肾小管性蛋白尿,F.,溢出性清蛋白尿,2.SDS,凝胶电泳,SDS-AGE,或,SDS-PAGE,，,电泳后蛋白区带经考马斯亮蓝染色，则能将尿蛋白按分子量大小进行分离，从而判断为肾小球性蛋白尿及其选择性和非选择性、肾小管性蛋白尿、混合性蛋白尿、溢出性蛋白尿等。,返回节,SDS-PAGE,图谱,（三）脑脊液蛋白电泳,经充分浓缩后，脑脊液蛋白可以采用与普通血清蛋白电泳相似的方法进行检测，琼脂糖凝胶，考马斯亮蓝染色；银染能增加灵敏度因而无需浓缩样品。,可分为,PA,、,ALB,、,1,、,2,、,、,球蛋白,6,个组分，通常还有,1,和,2,。,浓缩标本或银染能清楚地发现,IgG,区带。,IgG,寡克隆区带：出现两条或多条稀疏的,IgG,区带，且比同一病人同时的血清蛋白电泳中,区带致密，等电聚焦联合免疫印迹法能提高,IgG,寡克隆带的检测灵敏度和特异性。,返回节,脑脊液蛋白电泳图谱,返回节,（四）免疫固定电泳,能确定蛋白质的单克隆属性，从而诊断浆细,胞病等。,在,1,张琼脂糖凝胶上对,1,个样品重复做,6,份电泳，,1,份为普通电泳，其他,5,份经普通电泳分离蛋白,后分别加入羊抗人,IgG,、,IgA,、,IgM,、,链和,链单克隆抗血清，被分离出的免疫球蛋白或轻,链与其相应抗体发生反应而沉淀，未反应蛋白,被清洗掉，抗原抗体反应物经染色后形成可见,条带，比较普通电泳条带与免疫固定后的沉淀,带，可对结果作出定性解释。,返回节,免疫固定电泳图谱,返回节,四、蛋白质免疫化学法测定,蛋白质都由氨基酸组成，性质相似，故除清蛋白等少数蛋白质有某种特性可利用，因而能使用染料结合法等方法测定外，其他都需制备特异的抗血清，采用免疫化学方法测定。,包括免疫比浊法、免疫扩散法（,RID,）、,放射免 疫法（,RIA,）、,酶免疫法（,EIA,）,和化学发光法。,免疫比浊法和免疫扩散法适用于血清蛋白质，放射免疫法、酶免疫法和化学发光法更灵敏，适用于测定低至每毫升纳克水平的蛋白质。免疫比浊法由于简单快速，故应用最广泛。,返回节,14,种蛋白质有国际公认的标准参考物质,ALB,、,PA,、,AAT,、,AAG,、,HAP,、,AMG,、,CER,、,TRF,、,CRP,、,IgG,、,IgM,、,IgA,、,C3,、,C4,。,此外，免疫球蛋白轻链,和,、,甲胎蛋白,（,AFP,）、,2,微球蛋白等血液和尿液蛋白质也,可用上述方法测定。,返回节,五、氨基酸检测,遗传性氨基酸代谢紊乱可以从三个水平上诊断：,异常的,DNA,检测,。,产前筛查和产后检测酶缺陷,。,这些缺陷导致的血尿氨基酸增多。,检测氨基酸的方法主要有：,过筛试验,，包括薄层层析、尿液颜色试验和,Guthrie,微生物试验。,定量测定氨基酸，,以监测治疗或确定初步诊断。,返回节,谢 谢！,退出,