实验5：肝中酮体的生成(1071).ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验五,肝中酮体生成,【,目的,】,验证肝的生酮能力（生成酮体是肝特有的能力）,【,复习,】,酮体是脂酸在,肝分解氧化时特有的中间代谢产物,。是,乙酰乙酸、,-,羟丁酸和丙酮,三者的统称。,1.,酮体的生成,部位：,肝线粒体,原料：乙酰,CoA,，,主要来自,脂酸的,-,氧化。,关键酶,：,HMG,CoA,合成酶,2.,酮体的利用特点,肝内生成，肝外利用,（肝中缺乏利用酮体的酶）,3.,酮体生成的生理意义,酮体是肝脏输出能源物质的一种形式。在长期饥饿时，是脑和肌肉的主要能源物质。,紫红色化合物,【,原理,】,丁酸,酮体,肝匀浆,观察显色粉发生的颜色变化，判定在酶的作用下是否有酮体的生成。,显色粉,-,羟丁酸,乙酰乙酸,丙酮,肌匀浆,【,原理,】,肝细胞中有生成酮体的,酶,，能以,乙酰,CoA,为原料合成酮体。本实验以丁酸作为底物，与新鲜肝匀浆一起放入与体内相似的环境中，也可以生成酮体。判断酮体生成与否，可将反应液与显色粉混合，酮体能与显色粉中的,亚硝基铁氰化钠,反应，生成,紫红色,化合物。而将丁酸与肌匀浆混合，放在同样的环境中则不能生成酮体，因此也不与显色粉反应。,【,实践操作,】,取,3,支,小,试管，在,上端标注学号、管号，如下操作,加入物 （,滴,）,1 2,3,洛克液,15,15,15,0.5mol/L,丁酸溶液,30,30,Ph7.6,磷酸缓冲液,15,15,15,肝匀浆,20,20,肌匀浆,20,蒸馏水,30,0.02%,甲烯蓝溶液,10,10,10,将各管,混匀后,置度水浴,40,分钟。,15%,三氯乙酸溶液,20,20,20,混匀后离心,5,分钟，用滴管取各管上清液置反应板中。,显色粉一小匙（克）,0.2,0.2,0.2,结果（颜色反应）,结果分析,肝脏中酶的催化下以丁酸为底物生成酮体，使显色粉变为紫红色。,肌肉中的酶不能催化丁酸生成酮体，显色粉无反应。,紫红色,淡紫红色,白色,肝脏中酶的催化下以肝中残余乙酰,CoA,为底物生成少量酮体，使显色粉变为淡紫红色。,【,注意事项,】,1.,凹玻板,4,人用,1,个。,2.,吸取上清液的毛滴管，,管对管,吸取液体,，不能混,用，,4,人,1,套。,3.,混匀后吸取,肝匀浆和肌匀浆。,4.,取显色粉后,立即盖瓶盖,，取量以覆盖,半凹槽,为,准。,5.,蒸馏水取用四人一小管，每管接水到,1/3,处。,【,思考题,】,洛克液、,15%,三氯乙酸溶液在实验中各有什么,作用？,洛克液起到营养的作用；,15%,三氯乙酸溶液可以终止反应的发生。,【,测试,】,1.,请写出酮体由哪些成分组成？,酮体包括乙酰乙酸、,-,羟丁酸和丙酮。,2.,酮体的利用特点？,肝内生成，肝外利用。,3.,酮体生成的生理意义？,酮体是肝脏输出能源物质的一种形式。在,长期饥饿时，是脑和肌肉的主要能源物质。,