示差分光光度法测定水样中非那西汀的含量11.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,示差分光光度法测定水样中非那西汀的含量,指导教师 权新军,实验目的,1,、通过标准曲线的绘制及样品溶液的测定，了解示差分光光度法的原理及特点,2,、掌握,UV-2450,型紫外,-,可见分光光度计的使用方法,实验原理,一、,紫外可见分光光度法基本原理,二、分光光度计基本组成及,UV-2450,型,紫外可见分光光度计操作规程,三、示差分光光度法的原理,一、,紫外可见分光光度法基本原理,紫外,-,可见分光光度法是指利用紫外,-,可见吸收光谱对物质进行定性和定量分析的方法。,紫外,-,可见吸收光谱属于分子吸收光谱，由分子的外层电子跃迁产生。其中,可见吸收光谱：波长范围,400750 nm,，,主要用于有色物质的定量分析。,紫外吸收光谱：波长范围,200,400 nm,（,近紫外区），可用于结构鉴定和定量分析。,物质的结构不同，紫外吸收光谱的形状不同，据此可进行,结构鉴定。,例如,:,不饱和脂肪族化合物在,175200 nm,处有吸收。,芳香族化合物的苯环在紫外区有三个吸收峰，,max,=250 nm,，。,定量分析依据朗伯,-,比尔定律：,A,lg,（,I,0,/,I,t,)=,b c,式中,A,：,吸光度；,b,：,液层厚度，通常以,cm,为单位；,c,：,溶液的摩尔浓度，单位,molL,；,：,摩尔吸光系数，单位,Lmol,cm,朗伯,-,比尔定律是紫外,-,可见分光光度吸收法定量分析的依据。,二、分光光度计的基本组成,及,UV-2450,型,紫外可见分光光度计操作规程,光源,单色器,样品室,检测器,显示,UV-2450,型,紫外可见分光光度计,操作规程简介,1.,打开电源开关，打开电脑及软件，进入自检界面。,2.,单击确定开始自检，自检过程中不得打开样品室盖。,3.,完成自检后，单击波长扫描按钮，选择“方式”，设定波长及测量方式（,Abs,）,4.,将参比溶液放入参比池中，另一参比液放入样品池第一池内。点击自动清零键清零。,5.,取出样品池中参比，放入测量液，进行全波长扫描，找出最大吸收波长。,6.,取出测量液，将标准曲线的五个试样放入测量池中，打开定量分析界面，设定波长和测量方式,Abs,，测定各点吸收值，绘图。,7.,放入待测样品，测定。,三、,示差分光光度法原理,普通分光光度法 一般测定痕量组分,参比溶液浓度为零,即朗伯,比耳定律只适用于稀溶液。,示差分光光度法 用于测定浓度较高组分,用浓度稍低于待测溶液的,标准溶液,作参比,设：待测溶液浓度为,c,x,，,标准溶液浓度为,c,s,(,c,s,c,x,),。,则：,A,x,=,b,c,x,A,s,=,b,c,s,x,s,=,b,(,c,x,c,s,）,=,b,c,测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差,(,也叫相对吸光度,A,r,),。,示差法测得的吸光度,A,与,c,呈直线关系。由标准曲线上查得相应的,c,值，则待测溶液浓度,c,x,：,c,x,=,c,s,+,c,示差法标尺扩展原理,普通法：,c,s,的,T,=10%,；,c,x,的,T,=5%,示差法：,c,s,做参比，调,T,=100%,则：,c,x,的,T,=50%,标尺扩展,10,倍,1.,示差分光光度法的测定步骤：,1,）采用浓度为,c,s,的标准溶液为参比溶液,;,2,）,测定一系列,c,已知的标准溶液的相对吸光度,(,A,),；,3,）,绘制,A,-,c,工作曲线；,4,）,由测得试样溶液得相对吸光度,A,，从工作曲线上求出,c,，根据,c,x,c,s,+,c,即可求出试样浓度,c,x,试剂与器材,UV-2450,紫外,-,可见分光光度计，,石英比色皿（,1cm,），,容量瓶（,50ml,），,移液管（,1ml,、,10ml,），,未知样品液。,实验方法及步骤,1.,标准溶液的配制,非那西汀标准溶液（,100g/ml,）：准确称取非那西汀,0.0500g,于小烧杯中，加少许乙醇溶解，转移到,500ml,容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀备用,2.,吸收曲线绘制,移取,5.00ml,非那西汀标准溶液于,50ml,容量瓶中，蒸馏水稀释至刻度，摇匀。以蒸馏水为空白，进行全波长扫描，绘制吸收曲线，找出最大波长。,3.,绘制工作曲线,分别取非那西汀标准溶液,5mL,，,6mL,，,7mL,，,8mL,，,9mL,，,10mL,分别于,6,个,50ml,容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，以第一个溶液为参比，于最大波长处测定吸光度值，以,A,对,c,作图绘制工作曲线。,4.,样品测定,取一定体积样品溶液（浓度在,40-60g/mL,）于,50mL,容量瓶中，于最大吸收波长处测定吸光度值。,数据处理,1.,绘制非那西汀的吸收曲线,2.,绘制工作曲线,3.,在工作曲线上查出未知样中非那西汀的浓度,c,4.,计算未知样中非那西汀的浓度,c,x,5.,完成实验报告并交给指导教师。,