生物样品分析测定.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,*,第一节 概述,生物药物分析的对象,药物所到之生物体的,体液、器官、组织、排泄物,等。,生物药物分析的目标,母体药物和代谢产物,生物药物分析的意义,药物质量的正确评价,临床合理用药,第一节 概述,生物药物分析的特点,生物样品中被测组分的存在形式多样,原型药（游离型）、结合型、代谢物、缀合物等,被测组分浓度低（,10,-6,-10,-9,g/ml,），,变化幅度大,样品干扰物质多，部分样品稳定差,样品量少,要求较快提供结果,测定数据的处理和阐明有时不太容易,第二节,药物在生物体内的存在状态与生物转化,药物在生物体内的存在状态,药物代谢,保证临床用药的安全、合理和有效,药物代谢的部位：,肝脏、肾、脾、肺、肠粘膜、胎盘等,药物代谢反应,第一阶段（一相）：,P450,等催化下的氧化、还原、水解等反应，增大极性,第二阶段（二相）：,与葡萄糖醛酸、硫酸盐等结合，进一步增大极性，随尿排出,第三节 生物样品的制备,常用生物样品,生物样品的选取原则,能够反映出浓度与药效之间的关系,易于获得,便于处理,根据不同目的和要求进行选取,第三节,生物样品的制备,常用生物样品,常用生物样品的种类、特点与采集,血浆,(plasma),血样,血清,(serum),全血,(whole blood),尿液,(urine),用于药物剂量回收、药物肾清除率及生物利用度的研究,尿液药物浓度变化大，应测定一定时间内尿中药 物总量。,尿液与血液中药物的相关性差。,尿中药物大多呈缀合状态。,第三节,生物样品的制备,常用生物样品,常用生物样品的种类、特点与采集,唾液,(saliva),用于药物浓度监测和药代动力学研究,其他,动物脏器组织匀浆等,样本的代表性,力求取样条件标准化,样品的贮存,血样,离心，冷冻保存,尿液立即测定，否则应冷藏或加防腐剂,第三节,生物样品的制备,样品预处理,提取方法的选择依据,药物的理化性质,-,酸碱度、极性、挥发性、可能的生物转化途径等,药物的浓度范围,药物测定的目的,生物样品的类型,样品处理与分析技术的关系,第三节,生物样品的制备,样品预处理,药物的提取,蛋白质处理,利用蛋白质脱水沉淀,有机溶剂、中性盐等,利用蛋白质形成不溶性盐沉淀,酸性沉淀剂,（,TCA,、,高氯酸、苦味酸等）,重金属盐,（,Zn,2+,、,Cu,2+,）,其他方法,加热、离心、超滤和透析、酶消化法,第三节,生物样品的制备,样品预处理,药物的提取,缀合物（结合物）水解,酸水解,无机酸,简便快速，但专属性差，有可能造成被测物分解。,酶水解,葡萄糖醛酸苷酶,(,glucuronidase,),芳基硫酸酯酶,(,arylsulfatase,),专属性强，一般不会造成被测物分解，但水解时间长，费用高。,溶剂解,第三节,生物样品的制备,样品预处理,药物的提取,冷冻干燥,适用于,-,大批量的生物样品,-,水溶性很强的样品,-,挥发性样品,-,对热不稳定的样品,第三节,生物样品的制备,样品预处理,药物的分离与净化,液,-,液萃取,萃取率：不低于,50%,影响提取率的因素,pH,值,提取溶剂,离子强度,离子对提取,第三节,生物样品的制备,样品预处理,药物的分离与净化,液,-,固萃取,固相提取柱（使用硅藻土、氧化铝、离子交换树脂、活性炭等填充剂）,“干混合物”萃取,待测组分的富集,真空挥发或通气流挥发,衍生化处理,第三节,生物样品的制备,样品预处理,待测物的损失,吸附、化学降解、衍生化反应、络合、蒸发,样品玷污,增塑剂,脂肪酸和酯类,其他,第四节 生物样品内药物分析方法,分析方法建立的一般步骤,以纯品进行测定,确定线性范围、最适测定浓度、灵敏度、最佳测定条件等,空白样品测定,以水代替空白样品，添加对照品后测定,了解提取回收率和最低检测浓度的大致情况,空白样品中添加对照品后测定（回收率实验）,实际样品测定,第四节 生物样品内药物分析方法,方法的评价,准确度（,accuracy,）,回收率,相对稳定,与参比方法相比,较,相关系数,r,0.95,精密度（,precision,）,各浓度点,RSD,不应大于,15%,，最低定量限不应大于,20%,。,灵敏度,检测限,(LOD),、,定量限,(LOQ),、,最低检测浓度,第四节 生物样品内药物分析方法,方法的评价,方法的专属性（,specificity,）,注重考虑代谢物、内源性物质和同时服用药物的干扰,线性范围,-,相关系数,r,0.99,样品稳定性考察,长期贮存,(-20/-70),、短期室温贮存,冷冻,-,解冻循环稳定性,贮备液稳定性,第四节 生物样品内药物分析方法,常用测定方法,光谱法,紫外可见分光光度法,荧光分光光度法,色谱法,电泳法,免疫分析法,