2025年大学生物技术（基因克隆技术）试题及答案.doc

2025年大学生物技术（基因克隆技术）试题及答案

（考试时间：90分钟 满分100分）
班级______ 姓名______

第I卷（选择题 共40分）
（总共20题，每题2分，每题只有一个选项符合题意，请将正确答案填在括号内）

1. 基因克隆技术中，用于切割DNA的工具酶是（ ）
A. DNA连接酶 B. 限制性核酸内切酶 C. 逆转录酶 D. DNA聚合酶
2. 以下哪种载体常用于基因克隆？（ ）
A. 质粒 B. 核糖体 C. 线粒体 D. 内质网
3. 在PCR反应中，需要的引物是（ ）
A. DNA B. RNA C. 蛋白质 D. 多糖
4. 基因克隆的第一步通常是（ ）
A. 目的基因的获取 B. 载体的选择 C. 连接反应 D. 转化
5. 限制性核酸内切酶识别的特定序列一般是（ ）
A. 单链DNA B. 双链DNA C. RNA D. 蛋白质
6. 以下关于载体的说法错误的是（ ）
A. 能自我复制 B. 含有多克隆位点 C. 都来自病毒 D. 可携带目的基因
7. PCR反应的条件不包括（ ）
A. 模板DNA B. 引物 C. 氨基酸 D. dNTP
8. 用于检测重组DNA是否导入受体细胞的方法是（ ）
A. 核酸杂交 B. 蛋白质电泳 C. 细胞培养 D. 显微镜观察
9. 基因克隆中，连接反应的酶是（ ）
A. DNA连接酶 B. 限制性核酸内切酶 C. 解旋酶 D. 拓扑异构酶
10. 以下哪种不是常用的目的基因获取方法？（ ）
A. 从基因组文库中筛选 B. 人工合成 C. 从mRNA反转录 D. 从蛋白质中提取
11. 重组DNA导入受体细胞的过程称为（ ）
A. 转化 B. 转导 C. 感染 D. 融合
12. 基因克隆技术中，筛选阳性克隆的方法不包括（ ）
A. 蓝白斑筛选 B. 抗生素抗性筛选 C. 酶活性筛选 D. 核酸测序
13. 质粒载体的特点不包括（ ）
A体型较小 B. 能自主复制 C. 含有标记基因 D. 都是双链RNA
14. 在基因克隆中，扩增目的基因常用的技术是（ ）
A. PCR B. 细胞培养 C. 蛋白质纯化 D. 核酸提取
15. 限制性核酸内切酶切割DNA后产生的末端通常是（ ）
A. 平端 B. 粘性末端 C. A或B D. 不确定
16. 以下关于基因克隆的说法正确的是（ ）
A. 只能克隆原核生物基因 B. 不需要载体 C. 可用于基因治疗 D. 不能对真核生物基因进行操作
17. 用于构建基因组文库的载体一般是（ ）
A. 噬菌体载体 B. 质粒载体 C. 人工染色体载体 D. 以上均可
18. 基因克隆过程中，目的基因与载体连接形成的重组DNA分子是（ ）
A. 环状 B. 线性 C. 不确定 D. 双螺旋
19. 以下哪种技术可用于目的基因的定量分析？（ ）
A. 实时荧光定量PCR B. 核酸杂交 C. 蛋白质免疫印迹 D. 细胞计数
20. 在基因克隆技术中，常用的受体细胞不包括（ ）
A. 大肠杆菌 B. 酵母菌 C. 植物细胞 D. 病毒

第II卷（非选择题 共60分）

21. （10分）简述基因克隆技术的基本流程。

22. （10分）请说明限制性核酸内切酶在基因克隆中的作用及特点。

23. （10分）PCR技术的原理是什么？在基因克隆中有哪些应用？

24. （15分）阅读以下材料：在基因克隆实验中，科研人员从某种生物细胞中提取了总RNA，经过逆转录得到了cDNA。然后选择了合适的载体，将cDNA与载体进行连接，构建了重组DNA分子。接着将重组DNA导入大肠杆菌细胞中，经过培养后，利用蓝白斑筛选法筛选阳性克隆。请分析回答：（1）从总RNA逆转录得到cDNA的目的是什么？（2）选择载体时需要考虑哪些因素？（3）蓝白斑筛选法的原理是什么？

25. （15分）阅读材料：某科研团队想要克隆一种植物的抗病基因。他们首先从该植物的基因组中获取了相关片段作为目的基因，然后选择了Ti质粒作为载体。在连接反应后，将重组Ti质粒导入农杆菌中，并通过农杆菌介导转化法将目的基因导入植物细胞。经过一系列培养和筛选，最终获得了转基因抗病植株。请回答：（1）从植物基因组中获取目的基因的方法有哪些？（2）Ti质粒作为载体有什么优势？（3）农杆菌介导转化法的具体操作步骤是怎样的？

答案：1. B 2. A 3. A 4. A 5. B 6. C 7. C 8. A 9. A 10. D 11. A 12. C 13. D 14. A 15. C 16. C 17. D 18. A 19. A 20. D 21. 基因克隆技术基本流程：首先获取目的基因，可从基因组文库筛选、人工合成、mRNA反转录等；然后选择合适载体，如质粒等；接着将目的基因与载体连接；再导入受体细胞；最后筛选阳性克隆，可通过蓝白斑筛选、抗生素抗性筛选等方法。 22. 作用：切割特定DNA序列，产生粘性末端或平端，便于目的基因与载体连接。特点：具有特异性识别序列，不同酶识别序列不同；切割位点具有特异性；作用于磷酸二酯键。 23. 原理：以DNA变性、复性为基础，通过高温变性使DNA双链解开，低温退火使引物与模板结合，适温延伸在DNA聚合酶作用下合成新DNA链。应用：扩增目的基因，获取大量目的基因用于后续实验；基因诊断，检测特定基因序列。 24. （1）逆转录得到cDNA可去除基因中的内含子，获得可在原核细胞中表达的编码序列。（2）考虑因素有能自我复制、有多克隆位点、有合适标记基因等。（3）原理是载体上有lacZ基因，重组后lacZ基因失活，含重组质粒的菌在含X - gal的培养基上形成白色菌落，未重组的形成蓝色菌落。 25. （1）方法有从基因组文库中筛选、PCR扩增等。（2）优势有能自主复制、可携带较大片段目的基因、有标记基因便于筛选等。（3）操作步骤：将重组Ti质粒导入农杆菌，制备感受态植物细胞，农杆菌与植物细胞共培养，筛选转化细胞，诱导分化成完整植株。