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2025年大学生物（细胞培养实验）试题及答案

（考试时间：90分钟 满分100分）
班级______ 姓名______

第I卷（选择题 共30分）
答题要求：每题只有一个正确答案，请将正确答案的序号填在括号内。(总共10题，每题3分)
w1. 细胞培养中，常用的基础培养基是（ ）
A. DMEM B. RPMI 1640 C. MEM D. 以上都是
w2. 细胞培养时，最适宜的二氧化碳浓度一般为（ ）
A. 1% B. 3% C. 5% D. 10%
w3. 用于细胞培养的血清，通常采用（ ）
A. 胎牛血清 B. 小牛血清 C. 马血清 D. 人血清
w4. 细胞培养过程中，防止微生物污染的常用抗生素是（ ）
A. 青霉素 B. 链霉素 C. 庆大霉素 D. 以上都是
w5. 细胞传代培养时，一般当细胞长满培养瓶底的（ ）时进行传代。
A. 50% B. 70% C. 80% D. 90%
w6. 细胞冻存时，常用的保护剂是（ ）
A. DMSO B. 甘油 C. 乙醇 D. 以上都是
w7. 细胞复苏时，正确的操作顺序是（ ）
A. 37℃水浴快速解冻，离心弃上清，加培养液重悬接种
B. 4℃水浴缓慢解冻，离心弃上清，加培养液重悬接种
C. 直接将冻存管放入培养箱解冻，然后接种
D. 先在室温放置1小时解冻，再离心接种
w8. 细胞培养箱的温度一般设置为（ ）
A. 常温 B. 30℃ C. 37℃ D. 42℃
w9. 细胞培养用的水通常要求是（ ）
A. 蒸馏水 B. 去离子水 C. 双蒸水 D. 自来水
w10. 细胞培养过程中，发现细胞生长缓慢，可能的原因不包括（ ）
A. 血清质量差 B. 培养温度不合适 C. 细胞密度过高 D. 培养液pH值合适

第II卷（非选择题 共70分）
w11. （10分）简述细胞培养的基本流程。

w12. （15分）细胞培养过程中，如何进行无菌操作？

w13. （15分）请说明细胞传代培养的步骤及注意事项。

材料题：某实验室在进行细胞培养实验时，使用了DMEM培养基、10%胎牛血清、青霉素和链霉素。在培养过程中，发现细胞生长状态不佳，培养液变浑浊。
w14. （15分）请分析细胞生长状态不佳且培养液变浑浊可能的原因，并提出相应的解决措施。

w15. （15分）若要对培养的细胞进行冻存，简述冻存的具体操作及后续复苏的要点。

答案：w1.D；w2.C；w3.A；w4.D；w5.C；w6.A；w7.A；w8.C；w9.C；w10.D；w11. 细胞培养基本流程：准备细胞培养所需物品，如培养瓶、培养基、血清、抗生素等。选择合适的细胞系，复苏细胞。将复苏后的细胞接种到含合适培养液的培养瓶中，置于培养箱培养。定期观察细胞生长状态，当细胞长满进行传代培养。如需长期保存细胞，则进行冻存。w12. 细胞培养无菌操作：在超净工作台操作，提前紫外灯照射消毒。实验人员穿戴无菌工作服、口罩、手套。操作前用酒精擦拭双手和台面。打开的试剂瓶及时盖好，避免长时间暴露。接种工具如吸管、移液器头要提前灭菌，操作过程中避免交叉污染。培养细胞的器皿要提前灭菌处理。w13. 细胞传代培养步骤：在显微镜下观察细胞生长状态，当细胞长满培养瓶底约80%时进行传代。吸弃原培养液，用PBS冲洗细胞1 - 2次。加入适量胰蛋白酶消化液，覆盖细胞，放入培养箱或在室温下消化，显微镜下观察细胞变圆、间隙增大时，立即吸弃消化液。加入含血清的培养液终止消化，用吸管轻轻吹打细胞，使其分散成单细胞悬液。按合适比例接种到新的培养瓶中，补充新鲜培养液，放入培养箱培养。注意事项：严格无菌操作，消化时间不宜过长，吹打细胞力度要适中，避免损伤细胞，接种密度要合适。w14. 可能原因及解决措施：污染，可能是操作过程中无菌不严格，导致微生物进入培养液。解决措施：重新严格按照无菌操作要求进行实验，更换培养液和培养器皿，对污染的细胞进行丢弃。血清质量问题，血清可能存在质量差异或变质。解决措施：更换血清品牌或批次，重新复苏细胞进行培养。细胞老化，传代不及时导致细胞老化。解决措施：按照合适的传代时间及时传代细胞。w15. 冻存操作：配制冻存液，一般为含10% - 20% DMSO的培养液。将对数生长期的细胞消化制成单细胞悬液，离心弃上清。加入适量冻存液重悬细胞，调整细胞密度至合适浓度。将细胞悬液分装到冻存管中，密封好。先将冻存管置于4℃冰箱1 - 2小时，再放入 - 20℃冰箱2小时，最后转入 - 80℃冰箱过夜或长期保存。复苏要点：从 - 80℃冰箱取出冻存管，迅速放入37℃水浴中快速解冻，边解冻边轻轻晃动冻存管。将解冻后的细胞悬液转移至离心管，加入适量培养液，离心弃上清。加入新鲜培养液重悬细胞，接种到培养瓶中，放入培养箱培养，并密切观察细胞生长状态。