农杆菌转化法.ppt

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,农杆菌介导转化法,1,一、简介,农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠痪瘤或发状根。根想农杆菌和发根农杆菌细胞中分别含有,Ti,质粒和,Ri,质粒，其上有一段,T,DNA,，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将,TDNA,插入到植物基因组中。因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。人们将目的基因插入到经过改造的,TDNA,区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出,转基因,植株。农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中，近年来，农杆菌介导转化在一些单子叶植物,(,尤其是水稻,),中也得到了广泛应用。,2,二、原理,农杆菌主要有两种：根癌农杆菌和发根农杆菌。,根癌农杆菌能在自然条件下趋化性地感染,140,多种双子叶植物或裸子植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤。引发冠瘿瘤的原因是，,Ti,质粒上的,T-DNA,上有,8,个左右的基因在植物细胞内表达，指导合成一种非常寻常的化合物冠瘿碱，进而引起转化细胞癌变。而发根农杆菌则诱导产生发状根，其特征是大量增生高度分支的根系。根癌农杆菌的,Ti,质粒和发根农杆菌的,Ri,质粒上有一段,T-DNA,，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将,T-DNA,插入到植物基因组中。因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系，被誉为,“,自然界最小的遗传工程师,”,。可以通过将目的基因插入到经过改造的,T-DNA,区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移和整合，然后通过细胞和组织培养技术，得到转基因植物。,3,三、操作方法,1,、获取目的基因。用,限制酶,切割下目的基因。,2,、基因表达载体的构建。将目的基因与载体（大多数选用质粒）用,DNA,连接酶连接起来。,3,、将目的基因导入受体细胞。将含目的基因的重组质粒导入农杆菌（农杆菌为受体细胞）。,4,、目的基因的检测与鉴定。用,DNA,分子杂交技术,/,分子杂交技术,/,抗原,-,抗体杂交,/,个体,生物学,几种方法进行检验（根据要求选取不同方法）。,5,、最后将成功表达的细胞导入植物体内，对植物体进行个体生物学水平鉴定。,4,谢谢观看！,5,