免疫质控.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,免 疫 质 量 控 制,1,检验质量的重要性,医学检验是一门综合性应用学科，是现代,医学不可缺少的组成部分，其检验质量直,接影响着医疗工作的整体水平。,2,免疫质量控制相关的几个概念,质量,Quality,一组固有特性满足要求的程度。,注,1,：术语,“,质量,”,可使用形容词如差、好或优秀来修饰。,注,2,：,“,固有的,”,（其反义词是,“,赋予的,”,）就是指存在某事或某物中本身就的，尤其是那种永久的特性。,质量控制,(Quality Control,QC),质量管理的一部分，致力于满足质量要求,质量保证,(Quality Assurance,QA),质量管理的一部分，致力于提供质量要求会得到满足的信任。,3,室间质量评价（,External Quality Assessment,EQA,）,/,能力验证,(Proficiency Testing,PT),利用实验室间的比对确定实验室的检测能力,(,能力验证,),室内质量控制,采用每天随标本测定质控血清的方法，并将结果误差控制在一定限度之内,系统误差,通常表现为质控物测定均值的漂移,是由操作者所使用的试剂、仪器设备、标准品或校准物出现的问题而造成的,这种误差可以通过质量控制的措施和方法加以控制,是可以排除的。,随机误差,则表现测定,SD,的增大,主要是因为实验操作人员的操作等随机因素所致,其出现难以完全避免和控制。,4,单波长与双波长,单波长 如：,405nm,、,450nm,、,490nm,、,630nm,等,要设空白对照孔，所有孔要减空白对照值,双波长 如：主波长,450nm,，参考波长,630 nm,等,可不用设空白对照孔,OD,值与,S/CO,值,OD,值,:,酶标仪比色的吸光度,S/CO,值,:,标本,OD,值,/,判断值（,CUT-OFF,）,统计数据时要选用,S/CO,5,临界值（,CUT-OFF,）,是,ELISA,方法检测的阴阳性结果的判断值。不同项目的试剂盒,CUT-OF,值,不同,常见有以下几种方式,:,试剂盒直接提供的常数,如,HCV-IgG CO=1.5,与阴性对照相关的计算值,如,HBsAg CO=2.1N,与阴阳性对照相关的计算值,如,HBcAb CO=1/2(N+P),“,灰区,”,（可疑结果的含义,）,把定量分析的正常值范围引入定性分析建 立灰区概念，即将,CO,值上下的一段区域定为阳性可疑，需重复实验或换试剂重测以确定其阴阳性，如仍落在灰区范围内则报告,“,+,”,（阳性）,6,定性酶免疫测定的,CUT-OFF,值,7,ELISA,检测的,“,钩状,”,效应,“,HOOK EFFECT,”,一步法和二步法均存在，只是前者出现的更早,些，大多数是高值低吸光度，很少阴性结果。,8,质量控制血清,质控血清是已知靶值的血清，在每次的常,规检验中加入一份或数份，通过所得结果,来了解本次检验的情况。质控血清检验的,结果如能控制其误差在一定范围内，就说,明该检验没有发生不允许的误差。如果出,现超过允许误差范围的异常结果，提示该,检验不合格，应寻找原因，纠正后，重检,待测标本。因此质控血清在质控工作中起,重要作用。,9,临界值质控血清,质量控制血清分定值和未定值两种。如只用一,份质控血清定值，一般定在正常值与异常值交界点,上，定性测定时处于,弱阳性,水平，称为临界值。乙,肝标志物临界值的制定，应按临床需求，为临床提,供统一的判断弱阳性的标准。,临界值质控血清,可以作为试剂盒中的阳性对照品和阴性对照品以外的第三个对照品，它可以,灵敏地,反映出试剂盒的检出水平，确保弱阳性反应的标本不漏检。,10,质控品（临界血清）通常选用的浓度,卫生部临检中心提供：,HBsAg 1IU/ml,HBsAb 10mIU/ml,HBeAg 2NCU/ml,HBeAb 4NCU/ml,HBcAb 2NCU/ml,HCV-IgG 2NCU/ml,HIV-Ab 2NCU/ml,TP 2NCU/ml,11,质量控制的形式,按其进行范围和评价目的：,室间质量评价,室内质量控制,12,室间质量评价的目的是相互校正各参与实验室测定结果的准确性，要求保持在临床所能接受的误差范围内，从而使参加活动的实验室之间结果具有可比性，因此室间质量评价着重考察检验操作的整体状态，由于室间质量评价活动是借助外部力量来进行回顾性检查，而不能控制实验室每天所发生的报告质量，故绝不能代替室内质量控制。相反只有首先搞好室内质量控制，保证检验结果达到一定的精密度，才能得到较好的室间质量评价成绩，才谈得上室间结果的可比性。当室间质量评价某一项目出现明显差异时，又要从室内质量控制中寻找原因，重新制订改进计划。,室间质量评价的目的,13,室内质量控制的目的,实验室为了监测和评价本室工作质量，决定常规检,验报告能否发出所采取的一系列检查、控制手段，,旨在检测和控制本室常规工作的精密度，并检测其,准确度的改变，提高本室常规工作中,批间,和,日间,标,本检测的一致性。,14,室内质量控制的质量保证,提昌全程保证或全方位保证，主要因素：,人,质量体系,实验前的质量保证,实验中的质量保,实验后的质量保证,15,人,是质量保证的关键,素质：,热爱医学检验专业,具有广泛的临床医学知识和检验基础知识,具有高度的责任心,具有闲熟的检验操作技能,具有严谨的工作作风和实事求是的工作态度,设立质量监督管理员：,督促、检查、落实各项质量要求,16,质量管理体系,建立各种管理文件（操作规程）,包括,:,分析前、中、后各个环节,相关表格的建立、填写及归档,建立各项标准化操作程序（,SOP,）,包括,:,仪器设备,检验项目 等,17,室内质量控制的基本内容包括,分析前的质控 分析中的质控 分析后的质控,病人准备 量具与测量 计算结果,标本采集 试剂质量 标准曲线,标本转移 仪器状态 质控图绘制,标本处理 反应条件 结果统计分析,标本储存 比色测定,18,免疫室内质控各种表格的填写,冰箱、水浴箱温度记录表,仪器设备故障维修记录本,各种仪器设备使用记录本,各种仪器设备校准记录本,各种仪器设备保养记录本,环境温度、湿度记录表,各种原始操作记录表,尤瑞纳斯、,I2000,操作记录表,杂项操作记录表,自身抗体操作记录表,TORCH,操作记录表,ASA,、,ACA,操作记录表,体检项目操作记录表,HIV-Ab,标本检测登记表,HIV-Ab,原始记录、,原始结果记录,试剂、质控物批次更换记录,免疫室内质控失控结果记录,尤瑞纳斯室内质控即时审核记表,即刻法,室内质控原始数据记录（计算）表,HCV-Ab,阳性报告记录表,HIV-A,结果登记表,室内质控图月分析总结,室间质评回报结果分析总结,19,免疫质控方法,Levey-Jennings,法,(,回顾性,),“,即刻审核,”,分析,20,“,L-J,”,质控方法,免疫质控目前没有统一的方法,最合适的质控方法尚待研究建立中。目前由各实验室根据各自的情况制定,但必须要满足临床的需要，本实验室引用,“,L-J,”,质控方法，其内容基本上与临床化学测定的质控方法相同,但失控的判断标准不同。,本室,ELISA,失控的判断标准暂定：,1.,标本,OD,值,CO,值为阳性的，,S/CO,值,1,为失控；,标本,OD,值,CO,值为阳性的，,S/CO,值,1,为失控；,2.S/CO,值,3S,为失控。,21,免疫质控的特点,影响,ELISA,检测的因素很多。检测时，阴阳性对照物、质,控物和标本同时同板进行检测。检测完成后要对空白孔、,阴阳对照孔、质控物进行,即刻审核,，判定是否在控，该,板结果可否发出。,22,即时审核规则,Uranus AE200,（所有项目数据自动换算自动传输）,:,设空白,1,孔，阴、阳性对照各,2,孔,室内质控,1,孔,（乙肝两对半、,HIV-Ab,、,HCV-Ab,、,TP,、,CEA,、,AFP,、,EB,、肝吸虫抗体）,乙肝两对半,（,上海科华,）,在控的情况下，阳性结果必须符合,特有的模式,方可发出报告；,对少见或不可能出现的模式必须复查。,重点注意,HBsAg,，复查的方法有,:,金标、两步法、时间分辨、,PCR,、中和试验等。,23,（,HBsAg HBsAb HBeAg,）,CUT-OFF,值,=,2.1N,(N-,阴性对照,OD,值不到,0.05,按,0.05,算,),。通常,CO,值为,0.105,。,结果判断,阳性：,CUT-OFF,值；,阴性：,CUT-OFF,值,（,HBeAb HBcAb,）,CUT-OFF,值,=,1/2,（,N+P,）,（,N-,阴性对照,P-,阳性对照,),。,通常,CO,值为,1.5-1.7,。,结果判断,阳性：,CUT-OFF,值；,阴性：,CUT-OFF,值,x,-,x,-,x,-,24,HIV-Ab,（,北京金豪）,筛查阳性按,条例,规定用另一种方,法和本法复查，,3,次,2,阳送确认，发,“,HIV-Ab,待复查,”,报,告，,3,次,2,阴发,“,阴性,”,报告。,CUT-OFF,值,=,0.1+N,(N-,阴性对照,不到,0.02,按,0.02,算,),通常为,0.12,阳性：,0.12,阴性：,0.12,HCV-Ab,（,北京现代,）阳性时应与,PCR,检测,HCV-RNA,相,比较，为防假阳性，,HCV-Ab,阳性时应告知,PCR,室作,进一步检验或做中和试验。,CUT-OFF,值,=,0.1+N,(N-,阴性对照,不到,0.05,按,0.05,算,),通常为,0.15,阳性：,0.15,阴性：,0.15,x,-,x,-,25,梅毒抗体检测采用的方法：,TP,（,ELISA,）,、,梅毒明胶凝集法,(TPPA),、梅毒血球凝集法,（,TPHA,）、,TRUST(,非特异性,),本室质控原则,：,先用,ELISA,试剂在,Uranus AE200,上,检测，若阳性标本应即时用,TPPA,复查，进一步确认后发,出报告。,TP,（,ELISA,）,CUT-OFF,值,=,2.1N,(N-,阴性对照,OD,值不到,0.05,按,0.05,算,),。通常,CO,值为,0.105,结果判断,阳性,：,CUT-OFF,值,阴性,：,CUT-OFF,值,x,-,26,AFP,、,CEA,定性,（,郑州安图,）：,设空白,1,孔，阳性对照,(,高浓度,)2,孔，阴性对照,(,低浓度,)2,孔，不,设室内质控。,AFP,高浓度：,400ug/L,低浓度：,20ug/L,CEA,高浓度：,80ug/L,低浓度：,10ug/L,CUT-OFF,值 低浓度,OD,值为阳性,阳性的标本审核时在,“,结果评价,”,栏注明,“,建议进一步做定量检查,”,27,EB,病毒抗体（,VCA-IgA,）,（深圳华康）,设空白,1,孔，阳性对照,2,孔，阴性（正常）对照,2,孔，,无室内质控物,CUT-OFF,值,=0.270+,正常对照,OD,值,结果判断,EBV VCA-IgA,阳性：待测血清或血浆,OD,值,/CO,值,1.0,EBV VCA-IgA,阴性：待测血清或血浆,OD,值,/CO,值,1.0,x,-,28,TORCH(IgM),(CMV,、,RUBE,、,TOXO,、,HSV+),设阴、阳对照各,1,孔、,CO,值血请两孔。,结果计算,:,标本,OD,值,CO,的,1.1,倍为阳性，标本,OD,值处在,CO,值,10,的范围为可疑。,质量要求,:,阳性,OD,CO,值的,1.5,倍；,阴性,OD,值,/CO,的,OD,值,0.6,。,符合以上要求方可发出报告。,x,-,x,-,29,ELISA,定量,抗精子抗体,ASA,6,个浓度的标准品，各单孔。操作要求高，相关系数,r 0.96,方可发出报告。,抗心磷脂抗体,ACA,（,IgG,、,IgA,、,IgM,）单个校正品阴阳对照。,结果计算,：,标本浓度值,=OD,值,标本,/OD,值,校准,CV(,标于盒内标签上,),质量要求,：,阳性对照,OD,值,0.5,；阴性对照,OD,值,0.25,；,校正,OD0.3,；阳性,/,校正,1.25,；阴性,/,校正,0.9,。符合以,上要 求方可发出报告。,30,时间分辨荧光定量检测乙肝两对半,设,A-F6,个不同浓度校准品（见说明书）和室内质控各,1,孔,（室内质控采用卫生部临检中心乙肝两对半定性质控物）,HBsAg,结果判读,：,标本浓度值,0.2ng/ml,的判为阳性；否则为阴性。,质量要求,：,1.A,点计数值应,5000,，,F,点计数值应,100,万。,2.,相关系数,r,值应,0.98,3.,典型的剂量反映曲线,HBsAb,结果判读,：,标本浓度值,10mIU/ml,的判为阳性；否则为阴性。,质量要求,：,1.A,点计数值应,5000,，,F,点计数值应,8,万。,2.,相关系数,r,值应,0.98,3.,典型的剂量反映曲线,HBeAg,：,CUT-OFF,值,=,2.1N,counts,(N-,阴性对照,N,counts,值不到,2250,按,2250,算,N,counts,值高于,2250,，按实际计数值计算,),。,结果判读,：,标本的,counts,与,CUT-OFF,的比值,1.0,判为阳性，否则为阴性。,质量要求：,1.,阳性对照,counts,值应,60,万。否则实验无效，全部重做。,2.,阴性对照,counts,值应,8000,。否则实验无效，全部重做。,1000,10000,100000,1000000,10000000,0.2 1 5 25 150,HBsAg,校准品 （,ng/ml,）,5 10 40 160 640,抗,HBs,校准品,31,HBeAb,：,CUT-OFF,值,=,1/2N,counts,结果判读,：,CUT-OFF,与,标本,counts,值的比值,1.0,判为阳性，否则为阴性。,质量要求：,1.,阳性对照,counts,值应,1,万。否则实验无效，全部重做,。,2.,阴性对照,counts,值应,30,万。否则实验无效，全部重做。,HBcAb,：,CUT-OFF,值,=,1/2N,counts,结果判读,：,CUT-OFF,与,标本,counts,值的比值,1.0,判为阳 性，否则为阴性。,质量要求：,1.,阳性对照,counts,值应,1,万。否则实验无效，全部重做。,1.,阴性对照,counts,值应,40,万。否则实验无效，全部重做。,32,结合实习,如何开展工作,?,多问,多看（,SOP,）,多做,按实习大纲的要求，有重点地作好实习记录,33,免疫室一天的工作流程,1.,检查登记冰箱、水浴箱的温度，超出范围要做适当调整并记录；,2.,待室温恒定后登记环境温度和湿度；,3.,准备或补足试剂、检测室内质控；,4.,标本整理、分类、离心，作好原始记录；,5.,上机或手工操作；,6.,审核质控、结果及发报告，并做好失控记录；,7.,仪器保养并做好记录；,8.,登记仪器使用记录；,9.,整理桌面、保存标本；,10.,关好水电门窗。,34,谢谢！,35,