第6章化妆品卫生化学检验2.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,化妆品检验与安全性评价,安康,营养与食品卫生学教研室,healthtsmc,化妆品检验,第六章 化妆品卫生化学检验,第一节 概述,第二节 重金属的检验,第三节 防晒剂的检验,第四节 防腐剂的检验,第五节 美白祛斑成分的检验,第六节 发用化妆品禁用及限用物质检验,第七节 化妆品香精中香料成分的检验,第八节 化妆品中其他禁限用物质的检验,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,一、紫外线辐射及其对人体皮肤的损害,二、防晒剂及其分类,三、防晒剂的检验,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,一、紫外线辐射及其对人体皮肤的损害,阳光是美容的,“,朋友,”,，可加速皮肤血液循环，增加皮肤中黑色素的含量，保护皮肤，促使皮肤中,VD3,生成，有利于钙吸收。同时，太阳光中的紫外线辐射对人体皮肤而言又是一种非常显著的环境因子。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,太阳辐射光谱,波长,-,射线,X-,射线,紫外线,可见光,红外线,微 波,无线电波,组成太阳光谱,太阳光谱中，波长不同，产生的生物学效应也不一样,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,一、紫外线辐射及其对人体皮肤的损害,长时间暴晒，阳光就是美容的,“,敌人,”,，它损害皮肤细胞，导致皮肤炎症反应，降低真皮中的弹性纤维，促进皮肤老化，使皮肤增厚、角化、萎缩，出现皱纹、老年斑，甚至可能导致皮肤癌。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,一、紫外线辐射及其对人体皮肤的损害,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,一、紫外线辐射及其对人体皮肤的损害,适量的紫外线对健康有益：,不同波段的紫外线其生物学作用不一样,抗佝偻病作用：,UV-B,（,290320nm,）,红斑作用：,UV-B,色素沉着作用：,UV-A,（,300400nm,）,杀菌作用：,UV-C,（,260nm,）,其他：增强机体抗病能力,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,一、紫外线辐射及其对人体皮肤的损害,维生素,D,的生成过程：,B,段紫外线,7-,脱氢胆固醇 胆钙化醇,肝脏,25-,羟基胆钙化醇,活性维生素,D,表皮,光解,（,维生素,D3,）,随血流,25-,羟化酶,即,1,，,25-,二羟胆钙化醇,1,25-(OH)2-D3,。,维生素,D,又称为阳光维生素。,（,25-OH-D3,）,肾脏,羟化酶,抗佝偻病作用,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,一、紫外线辐射及其对人体皮肤的损害,UVA,区段,晒黑段，可到真皮。,UVB,区段,晒红段，晒伤主要区段。,UVC,区段,杀菌段，角质层。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,UV,引起皮肤色素沉着,1.,速发色素沉着是,UVA,或可见光照射后即刻出现的色素沉着反应，于照射后,1,2,小时达高峰，,3,4,小时逐渐消退。不一定有新色素生成，皮肤颜色改变主要是黑素体从黑素细胞核周进入表皮黑素细胞树突所致。,2.,持续色素沉着是大剂量的,UVA,照射皮肤后出现持续的、呈棕黑色的色素沉着且可稳定在,2,24,小时。,3.,迟发色素沉着主要由,UVB,照射后引起的。通常在,UVB,照射后,3,4,天即可检到，其峰值为,10,天至,4,周不等，然后逐渐消失。原因酪氨酸酶的活性增强，黑素生成增加。具有光保护作用，可提高日光晒伤阈值,4,5,倍。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,紫外线导致皮肤光老化,UVA30%,50%,会穿透表皮到达真皮，破坏胶原纤维使之变形。表现为皮肤曝光部位粗糙、增厚、干燥，皮肤松弛、皱纹加深加粗，局部有过度的色素沉着或毛细血管扩张为特征的改变，这种现象称为皮肤的光老化。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,紫外线对皮肤的其它影响,过度强烈的,UV,照射皮肤可导致许多疾病。产生急性日晒伤，表现为局部急性，水疱性皮炎，也能诱发或加重光毒性或光变态反应、特发性光照性皮肤病,(,如多形性日光疹等,),。甚至紫外线辐射可增加发生皮肤癌的危险性，可能出现各种良性或恶性肿瘤,(,如日光角化病等,),。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,紫外线损害皮肤的机制：,损伤细胞核和线粒体,DNA,，不同程度影响蛋白质的合成及细胞正常的生理功能，导致细胞衰老和凋亡。,引起活性氧簇,（,ROS),过量,，,ROS,对染色体、线粒体、细胞膜等生物组织的毒性攻击会引起机体氧化性衰老。,脂褐素积累于细胞内成为细胞老化的标志。,抑制表皮内最主要的免疫细胞朗格汉斯细胞,(LC),的功能活性，从而抑制皮肤对过敏、感染的抵抗力。,活化基质金属蛋白酶,(MMP),，,导致细胞外基质特别是胶原的降解，同时胶原合成减少，皮肤弹性下降。,UVA,可直接损伤体外培养的皮肤成纤维细胞。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,紫外线引起皮肤疾病的证据不明确，只是一些推测：,皮肤癌：恶性黑素瘤、基底细胞癌和鳞状细胞瘤等皮肤癌主要由过量暴露太阳紫外线辐射，特别是中波紫外线所致,日光角化病（又称光化性角化病）：长期日光曝晒而引起的慢性皮肤损害，少数可发展成鳞状细胞癌,晒斑（又称日光红斑）：日光曝晒而引起皮肤红斑、水肿，严重者可引起水疱，过后有糠秕样脱屑，并出现皮肤色素沉着,唇疱疹再激活：唇疱疹由单纯性疱疹病毒引起。原发感染后病毒潜伏在神经细胞中。潜伏的病毒可被包括日晒在内的某些诱因激活而发病,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,眼睛疾病,电光性眼炎：电焊金属部件，在电焊火花里放射出大量的紫外线，时间长了两眼红肿、充血、流泪，叫电光性眼炎。,雪盲：在雪地里面，太阳紫外线可以照射到雪里，尽管没有太阳，但紫外线通过雪地反射回空间、被眼睛视网膜吸收，可以突然引起双目失明，叫雪盲。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,防御紫外线对皮肤损伤的途径,保湿增强皮肤抵抗力，在太阳光下应大量饮水。,使用抗氧化剂清除过量活性氧簇,(ROS),对皮肤损伤。,在盛夏，上午,10,：,00,到下午,3,：,00,之间避免外出。,外出注意戴上太阳帽，涂防晒霜于身体暴露部位。,水、金属、沙子、雪反射过来的太阳光可以增加甚至导致双倍的,UV,吸收量。,外出时，避免食用光敏性的食物及药物，如韭菜、香菜、芹菜等，药物如四环素族类、喹诺酮类、磺胺及苯噻嗪类等。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,二、防晒剂及其分类,在防晒化妆品中，主要起防晒作用的是产品配方中所含的防晒功效成分，即防晒剂。,防晒剂是指添加与具有防晒作用的化妆品中，能够散射、反射和吸收紫外线而引起到防止或减弱对皮肤伤害作用的成分。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,二、防晒剂及其分类,防晒剂的作用机制是通过阻断,UV,对人体皮肤的照射，阻止,ROS,等自由基产生，可防止,DNA,和蛋白质损伤，也可阻止炎症介质、细胞因子和组织溶解酶的释放，从而减轻皮肤光老化性损伤，甚至使受损的组织得到一定修复。,可分为化学防晒剂和天然防晒剂。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,二、防晒剂及其分类,（一）化学防晒剂,国际上有,60,种,化妆品卫生规范,28,种：,26,种紫外线吸收剂,2,种紫外线屏蔽剂,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,二、防晒剂及其分类,（一）化学防晒剂,国际上有,60,种,化妆品卫生规范,28,种：,26,种紫外线吸收剂,2,种紫外线屏蔽剂,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,（二）天然防晒剂,天然防晒剂又称生物防晒剂，是指利用天然植物及其从中提取出的有效成分作为紫外线吸收剂的一类上防晒产品，或一些生物活性物质能够清除或减少紫外线辐射造成的活性氧自由基，从而组织或减少皮肤组织损伤，促进日晒后修复的一种间接防晒产品。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,二、防晒剂及其分类,无机防晒剂多不易附着，使用后外观不佳,有机防晒剂制成的产品透明度感好，但不稳定，已发生光变性和过敏反应,天然防晒剂对皮肤刺激小，光化学稳定，安全可靠，但是成本高。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,三、防晒剂的检验,化妆品卫生规范,规定了,28,种限用防晒剂。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,三、防晒剂的检验,1.,对氨基苯甲酸（不常用）,2.,邻氨基苯甲酸脂类：,UVA,，常用于防晒黑,3.,二苯酮及其化合物：效果差，渗透性强，常用,4.,水杨酸脂类：,UVB,，复配使用,5.,甲氧基肉桂酸脂类：,UVB,，广泛使用,6.,甲烷衍生物：,UVA,，高效,7.,樟脑系列：,UVB,，复配使用,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,三、防晒剂的检验,化妆品卫生规范,第一法 高效液相色谱,-,二极管阵列检测器,-,梯度洗脱法,第二法 高效液相色谱,-,紫外检测器法,一次进样可以检测,15,种防晒剂,其他方法：气相色谱法、气质联用、液质联用等,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,第一法 高效液相色谱,-,二极管阵列检测器,-,梯度洗脱法,本规范适用于防晒化妆品中苯基苯并咪唑磺酸、二苯酮,-4,和二苯酮,-5,、对氨基苯甲酸、二苯酮,-3,、,p-,甲氧基肉桂酸异戊酯、,4-,甲基苄亚基樟脑、,PABA,乙基己酯、丁基甲氧基二苯酰基甲烷、奥克立林、甲氧基肉桂酸乙基己酯、水杨酸乙基己酯、胡莫柳酯，乙基己基三嗪酮、亚甲基双,-,苯并三唑基四甲基丁基酚、双,-,乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪等,15,种防晒剂的检测。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,第一法 高效液相色谱,-,二极管阵列检测器,-,梯度洗脱法,化妆品中各种防晒剂由于其结构上的差异可被反相高效液相色谱分离。,根据其保留时间和紫外吸收光谱图定性，峰面积定量。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,第一法 高效液相色谱,-,二极管阵列检测器,-,梯度洗脱法,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,第一法 高效液相色谱,-,二极管阵列检测器,-,梯度洗脱法,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,第一法 高效液相色谱,-,二极管阵列检测器,-,梯度洗脱法,3.1,甲醇，色谱纯。,3.2,四氢呋喃，色谱纯。,3.3,高氯酸,（,HClO4,）,70,72,，优级纯。,3.4,混合溶液：甲醇（,3.1,）四氢呋喃（,3.2,）水高氯酸（,3.3,）,=250,450,300,0.2,。,3.5,防晒剂标准储备溶液：按表,2,称取各紫外吸收剂，分别用表中所示的溶剂溶解稀释到,100mL,，配成各紫外吸收剂的标准储备液，其浓度如表,2,所示。,3.6,紫外吸收剂混合标准溶液：移取各紫外吸收剂标准储备溶液,1.00mL,至,100mL,容量瓶中，用混合溶液（,3.4,）定容至,100mL,，配制成混合标准溶液。此混合标准溶液所含各紫外吸收剂的浓度如表,2,所示。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,第一法 高效液相色谱,-,二极管阵列检测器,-,梯度洗脱法,4,仪器,4.1,高效液相色谱仪，具三元泵、二极管阵列检测器及积分仪或色谱工作站。,4.2,超声波清洗器。,4.3,微量进样器（,10L,），或自动进样器。,4.4 0.45m,滤膜。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,第一法 高效液相色谱,-,二极管阵列检测器,-,梯度洗脱法,5.2,样品预处理,5.2.1,不含蜡质的化妆品如护肤类、香波、粉等：准确称取防晒化妆品约,0.25g,于,25mL,具塞比色管中，加入混合溶液，定容，混匀，超声振荡,20min,30min,。取此震荡液,1.00mL,，再用混合溶液稀释至,10.0mL,，混匀后，经,0.45m,滤膜过滤，滤液备用。,5.2.2,含蜡质的化妆品如唇膏、口红等：准确称取防晒化妆品约,0.25g,于,25mL,具塞比色管中，加入四氢呋喃定容，混匀，超声振荡,20min,30min,。取此震荡液,1.00mL,，再用四氢呋喃稀释至,10.0mL,，混匀后，经,0.45m,滤膜过滤，滤液备用。,混合溶液：甲醇（,3.1,）四氢呋喃（,3.2,）水高氯酸（,3.3,）,=250,450,300,0.2,。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,5.1,色谱条件,色谱柱：,C18,柱，,250mm,4.6mm,，,5m,；,紫外检测波长：,311nm,；,流速：,1.0mL/min,；,流动相：,溶液,A,：甲醇（,3.1,），使用前经,0.45m,滤膜过滤及真空脱气。,溶液,B,：四氢呋喃（,3.2,），使用前经,0.45m,滤膜过滤及真空脱气。,溶液,C,：水,+,高氯酸（,3.3,）（,300+0.2,），使用前经,0.45m,滤膜过滤及真空脱气。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,第一法 高效液相色谱,-,二极管阵列检测器,-,梯度洗脱法,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,第一法 高效液相色谱,-,二极管阵列检测器,-,梯度洗脱法,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,第二法 高效液相色谱,-,紫外检测器法,化妆品中各种防晒剂由于其结构上的差异可被反相高效液相色谱分离。根据其保留时间定性，峰面积定量。本方法的检出限、检出浓度、定量下限和最低定量浓度同第一法。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,第二法 高效液相色谱,-,紫外检测器法,色谱条件：,色谱柱：,C18,柱，,250mm,4.6mm,，,5m,；,流动相：混合溶液,1,（前,12,）和混合溶液,2,（后,3,）；,混合溶液,1,：甲醇四氢呋喃水高氯酸,250,450,300,0.2,。,混合溶液,2,：甲醇四氢呋喃水高氯酸,450,500,50,0.5,。,流速：,1.0mL/min,；,紫外检测波长：,311nm,；,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,第二法 高效液相色谱,-,紫外检测器法,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,第二法 高效液相色谱,-,紫外检测器法,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,2.,紫外线屏蔽剂,物理性遮光剂,(,也称紫外线散射剂,),指能反射光线的一些不透明的无机物质。它们在皮肤表面形成阻挡层，通过对,UV,的反射或散射作用，减少,UV,对皮肤的侵害，从而起保护作用。物理性遮光剂对,UVA,和,UVB,均有散射作用。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,2.,紫外线屏蔽剂,常用：二氧化钛、氧化锌、滑石粉、高岭土、白陶土等。这类防晒剂的不足之处在于颜色有点不自然，但是这类防晒剂有着很好的安全性和稳定性。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,2.,紫外线屏蔽剂,（,1,）二氧化钛的检测,检测钛元素,（,2,）氧化锌的检测,检测,Zn,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,（二）防晒剂抗,UVA,性能检验,UVB,防晒指数（,sun protection factor,，,SPF,）,防晒伤,UVA,防晒指数（,protection factor of UVA,，,PFA,）,防晒黑,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,1.,防晒指数,(sun protection factor,，,SPF),指涂与不涂防晒剂时,UVB,引起皮肤红斑所需最小剂量的比值,即：,SPF=,被防护皮肤的,MED,未防护皮肤的,MED,MED(minimal,erythema,dose),人的皮肤在日光直射下产生红斑时间约,2025,分钟，如果使用,SPF,值为,8,的防晒乳，用它涂敷一次，皮肤发红时间可延缓至,（,2025,）,8=,（,160200,）分钟左右。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,2.UVA,防护指数,UVA,对皮肤伤害可达真皮层，且为慢性累进的伤害。常用,PFA(protection factor of UVA),作为,UVA,防护效能的评价指标。,PFA,是涂防晒剂部位与未涂防晒剂部位产生持续性色斑（,PPD,）的,UVA,最小剂量的比值，即：,PFA=,被防护皮肤的,MPPD,未防护皮肤的,MPPD,(minimum persistent pigment darkening dose),化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,2.UVA,防护指数,在防晒产品中，,UVA,防护用的较多的还有,PA,值。,PA,值分为三级，,“,+,”,号越多保护的指数就越高。,PA,延缓晒黑时间,2-4,倍；,PA,延缓晒黑时间,4-8,倍；,PA,延缓晒黑时间约,8,倍以上。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,如何选择防晒产品？,参考,SPF,值。东方人肤质，日常防护可选用,SPF10,15,的防晒品，如从事游泳、打球等户外休闲活动，,SPF20,30,就足以抵抗紫外线的伤害，而不会给肌肤造成负担。,考虑,PA,值，一般要在,“,+,”,左右。,油性肌肤者应选择渗透力较强的水性防晒用品，干性肌肤应选择霜状的防晒用品，中性皮肤一般无严格规定；乳液状的防晒霜则适合各种皮肤使用。,在使用防晒品时一定要,提前涂搽并,涂到足够的厚度，以拍打方式涂抹，且注意游泳或出汗后增加涂擦次数。,建议在购买防晒霜前做皮肤测试,。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,（二）防晒剂抗,UVA,性能检验,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,（二）防晒剂抗,UVA,性能检验,化妆品抗,UVA,能力仪器测定法,1,范围,本规范规定了化妆品抗,UVA,（,320nm400nm,）能力的仪器测定方法。,本规范适用于防晒化妆品抗,UVA,能力的测定。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,化妆品抗,UVA,能力仪器测定法,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,化妆品抗,UVA,能力仪器测定法,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,化妆品抗,UVA,能力仪器测定法,4,分析步骤,4.1,样品制备,用专用注射器采取加压法或抽入法吸取样品，均匀点加或条加在,3M,膜或聚甲基丙烯酸甲酯毛表面上，然后用戴有乳胶医用指套的手指涂抹样品，使之成为均匀表面。每块板上实际加样量应在,1.8mg/cm,2,2.2mg/cm,2,之间。,PMMA,板上结果僅作阴性判断用。得到阳性结果时需用,3M,膜结果确认。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,化妆品抗,UVA,能力仪器测定法,4,分析步骤,4.2 样品测定,按仪器说明用负载条加3M膜或聚甲基丙烯酸甲酯板的石英板作仪器校准和测定时空,白校准。随后将按,4.1,步骤涂膜的样品，在室温（,2030,），,40,60,相对湿度下，放置,20min,后在,SPF,仪上测定，每样片测定点不得少于,4,点。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,化妆品抗,UVA,能力仪器测定法,5,质量保证,5.1,仪器,按仪器说明书校准和测量光源强度、波长准度及负载样膜玻璃板的紫外吸收等，并均需满足仪器说明书的要求。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,化妆品抗,UVA,能力仪器测定法,5,质量保证,5.2,样品制备,5.2.1,样品中不得含有气泡,（可用两块显微镜盖玻片挤压样品后进行观察）。,5.2.2,加样后必须反复来回涂布样品以保证涂布均匀性，同一玻片上至少应有,4,个测试点，不同测试点之间,C,的相对标准偏差不得大于,1,，否则结果作废,。,5.2.3,每个样品必须涂布两片以上玻片进行测定。两片之间,C,差不得大于,2nm,，否则应重做。,化妆品检验,第三节 防晒剂的检验,化妆品抗,UVA,能力仪器测定法,化妆品检验,第四节 防腐剂的检验,防腐剂是加入化妆品中以抑制微生物在其中生长为目的的物质。,一、化妆品中使用防腐剂的种类,二、化妆品中防腐剂的检验方法,三、示例（自学）,化妆品检验,第四节 防腐剂的检验,一、化妆品中使用防腐剂的种类,（一）全球化妆品中使用防腐剂概况,全球使用的化妆品防腐剂超过,200,种,中国限制使用,108,种,（二）中国化妆品中使用的防腐剂,化妆品卫生标准,=42+24,化妆品卫生规范,=42+14,化妆品检验,第四节 防腐剂的检验,二、化妆品所用防腐剂的检验方法,HPLC-DAD,法,本规范规定了测定化妆品中,2-,溴,-2-,硝基丙烷,-1,，,3-,二醇等,12,种防腐剂的高效液相色谱法,本规范适用于化妆品中,2-,溴,-2-,硝基丙烷,-1,，,3-,二醇等,12,种防腐剂的检验,化妆品检验,第四节 防腐剂的检验,二、化妆品所用防腐剂的检验方法,以甲醇提取化妆品中2-溴-2-硝基丙烷-1，3-二醇等12种防腐剂，用高效液相色谱仪进行分析，以保留时间和紫外吸收光谱图定性，以峰高或峰面积定量,化妆品检验,第四节 防腐剂的检验,二、化妆品所用防腐剂的检验方法,化妆品检验,第四节 防腐剂的检验,二、化妆品所用防腐剂的检验方法,5,分析步骤,5.1,样品预处理,准确称取约,1.00g,样品于具塞比色管中，必要时，水浴去除乙醇等挥发性有机溶剂。加甲醇（,3.1,）至,10mL,，振摇，超声提取,15min,，离心。经,0.45m,滤膜过滤，滤液作为待测样液。,化妆品检验,第四节 防腐剂的检验,二、化妆品所用防腐剂的检验方法,5,分析步骤,5.2色谱参考条件,色谱柱：C18 柱，250mm,4.6mm，10m；,流动相：0.05mol/L磷酸二氢钠甲醇乙腈=503515，添加氯化十六烷三甲胺至最终浓度为0.002mol/L，并用磷酸调pH 至3.5；,流速：1.5mL/min；,柱温,：室温,；,检测器：二极管阵列检测器，甲基氯异噻唑啉酮和甲基异噻唑啉酮在280nm 检测，其它成分在254nm,检测,。,化妆品检验,第四节 防腐剂的检验,二、化妆品所用防腐剂的检验方法,化妆品检验,第四节 防腐剂的检验,二、化妆品所用防腐剂的检验方法,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,正常皮肤的颜色取决于三个因素,1,、皮肤中各种色素的含量与分布状况,2,、皮肤血液中血红蛋白氧化还原的比例,3,、皮肤的厚度以及光线在皮肤表面的散射,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,美白祛斑类化妆品的活性物质的,作用机制：,（一）抑制黑素细胞内黑素的生成,（二）影响黑素细胞的存活和生长,（三）还原淡化已合成的黑素或抑制多巴的自身氧化：还原剂可以参与黑素细胞内酪氨酸的代谢，减少黑素生成各点的氧化反应。,（四）干扰、控制黑素的代谢途径,（五）减少外源性因素刺激黑色素的形成,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,美白祛斑类化妆品活性物质的分类,（一）酪氨酸酶抑制剂,1,、氢醌：对苯二酚,2,、熊果苷及其衍生物,3,、曲酸及其衍生物,4,、黄酮类及黄酮甙,5,、绿茶提取物,6,、其他活性物质：,2-,羟基,-4-,甲氧基苯甲醛、尿黑酸（龙胆酸）的甲酯和乙酯、海洋生物提取物,GN,、根皮素等,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,美白祛斑类化妆品活性物质的分类,（二）酪氨酸酶还原剂：,VC,、,VE,等,（三）影响黑素代谢剂：如维,A,酸,、亚油酸等，可影响黑素代谢，具有抗促黑素细胞激素活性的功能。,（四）抑制多巴色素互变酶，如甘草提取物。,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,黑素细胞毒性剂,如四异棕榈酸酯、油溶性甘草提取物、氢醌等具有破坏或抑制黑色素细胞生长的作用。,甘草提取物可防止皮肤炎、皮肤干燥、日晒、皮疹等，可活化皮质甾类化合物，可以中和或降低化妆品的有毒物质。甘草黄酮类成份，具有温和抑制酪氨酸酶的作用，是最有效的植物美白剂。甘草酸及甘草亭酸具有抑制黑素细胞生长的作用。,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,美白祛斑类化妆品活性物质的分类,（五）化学剥离剂,原理：使用化学制剂去除,面部,损伤皮肤的外层，以达到改进皮肤质地、使其平滑的目的。主要的化学制剂有石炭酸、三氯乙酸（）、和亚油酸、亚麻酸、,-,羟基酸（）。,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,美白祛斑类化妆品活性物质的分类,（五）化学剥离剂,-,羟基酸,主要有乳酸、苹果酸、水杨酸等，是最温和的剥脱剂，能产生轻微剥脱，可用以治疗细微皱纹、皮肤干燥、不一致的色素斑和痤疮,三氯乙酸可以不同浓度使用，最常用于中度剥脱,石炭酸是最强的产生深层剥脱的化学溶液，主要用于处理病人,面部,粗糙的皱纹、皮肤斑块或因曝露于日光下造成的损伤或皮肤的癌前病变。,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,美白祛斑类化妆品活性物质的分类,（六）内皮素拮抗剂,内皮素（,ET,）是迄今所知作用最强、持续最久的收缩血管的活性多肽。,黑素细胞上有特殊受体能与内皮素结合，内皮素被黑色素细胞膜上的受体接受后，刺激了黑色素细胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性，从而使黑色素急剧增加。,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,美白祛斑类化妆品活性物质的分类,（六）内皮素拮抗剂,内皮素拮抗剂的作用机理是通过抑制内皮素对黑色素细胞增殖的调控来达到美白祛斑效果的。,有待深化研究。,（七）遮光剂（防晒剂）,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,一、,熊果苷的检测,熊果苷是氢醌的衍生物，为白色针状结晶或粉末，可由天然绿色植物如熊果树叶、沙梨树叶和虎耳草、乌饭树等提取得到。,对皮肤具有高效美白祛斑、防晒功效，对人体肠道疾病，烧烫伤具有止痛、消炎作用，并能增强人体免疫功能。,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,一、,熊果苷的检测,作用机理：在皮肤黑色素形成过程中，酪氨酸酶起着催化氧化作用。熊果苷能强力抑制酪氨酸酶的活性，阻断黑色素的形成。渗入皮肤后，能破坏黑素细胞。造成细胞结构的改变。,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,一、,熊果苷的检测,-,熊果苷（对,-,羟基苯,-D-,吡喃葡萄糖甙）为白色针状结晶或粉末 白色针状结晶，可由氢醌、淀粉及葡萄糖苷酶合成所得。可以抑制黑色素的生成，而且还具有,SOD,的作用，并对,UVB,有一定程度的吸收，对爱兹病毒具有免疫功能。,许多衍生物除了具有熊果苷的作用外，还有很好的稳定性，极佳的皮肤吸收性，如熊果苷的酚羟基酯化物、,Vc,熊果苷磷酸酯等等。,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,一、,熊果苷的检测,熊果苷在化妆品中使用量为,1%-5%,，,max,：,7%,SN/T 1475-2004,水超声波震荡,HPLC,法,注意：,1.,超声不宜过久、温度不宜过高,2.,控制样品浓度,其他检测方法：,GC,法（聚二甲基硅氧烷色谱柱）,溶出伏安法,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,二、,维生素,C,磷酸酯镁的检测,维生素,C,是极佳的抗氧化剂，具有抗氧化和清除自由基作用。美白机制是有效控制细胞内的氧化还原反应和抑制酪氨酸酶的活性。,溶于水，皮肤吸收性差，结构不稳定，所以常用其衍生物，,衍生部位一般在,2,，,6,位有维生素,C,磷酸镁盐,、维生素,C,磷酸钠盐、维生素,C,棕榈酸酯等。,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,二、,维生素,C,磷酸酯镁的检测,SN/T 1498-2004,HPLC,法,UV,：,254nm,其他方法：,化学滴定法、分光光度法、荧光分光光度法、电化学法等。,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,三、,曲酸的检验,曲酸,KojicAcid,又名曲菌酸（,5-,羟基,-2-,羟甲基,-4-,吡喃酮），白色针状结晶，由葡萄糖或蔗糖在曲酶的作用下发酵可得。,机制：,与细胞中的铜离子络合，失去铜离子的酪氨酸酶失去活性，从而抑制黑色素的形成。它还能进入细胞间质中，组成胞间胶质，起到保水和增加皮肤弹性的作用。曲酸还具有清除自由基、增强细胞活力、食品保鲜护色等作用。,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,三、,曲酸的检验,在公认的四种美白成分,(,包括维生素,C,磷酸镁复合物、维生素,C,糖甘衍生物、曲酸及熊果苷素）中曲酸效果最好。,存在问题：光、热稳定性差，易络合金属离子失活，皮肤吸收差，长期使用曲酸可能导致细胞毒化，染色体变异、引起皮肤病变等问题。,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,三、,曲酸的检验,曲酸衍生物通常是通过酯化和烷基化曲酸上的羟基得到。常用的衍生物有曲酸双棕榈酸酯（,KAD-15,）和曲酸单亚麻酸酯，较新的有曲酸苯丙氨酸酶、,Vc,曲酸酯等。,与曲酸类似结构的吡喃酮类物质也有类似的作用机制，并有良好的美白效果。,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,三、,曲酸的检验,化妆品卫生规范,限用物质：,0.5%-2.0%,SN/T 1499-2004HPLC-UV,法,分光光度法：,曲酸,+,三氯化铁（弱酸）,=497nm,显色,玻璃电极示差脉冲法,毛细管电泳法,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,四、苯酚和氰醌,的检验,（一）概述,苯酚：有美白功能、但是有毒。,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,四、苯酚和氰醌,的检验,（一）概述,氢醌和酪氨酸同时与酪氨酸酶结合，产生竞争，氢醌消耗了一部分酪氨酸酶，属竞争性抑制剂。另外一定浓度下可致黑素细胞变性、死亡。,氢醌可抑制酪氨酸酶，还明显抑制细胞,DNA,合成。局部应用可引起,红斑,、炎症，皮肤色素缺失与沉着共同出现，高浓度使用可导致褐黄病、,耳聋,、,关节炎,、白细胞减少，甚至导致皮肤癌。在化妆品卫生标准中，氢醌被列为皮肤化妆品中的禁用物质。,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,四、苯酚和氰醌,的检验,（一）概述,化妆品卫生规范,规定：,高效液相色谱,-,二极管阵列检测器法,气相色谱法,高效液相色谱,-,紫外检测器法。,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,四、苯酚和氰醌,的检验,（二）测定方法,1.HPLC-DAD,法,以甲醇提取化妆品中氢醌、苯酚，用高效液相色谱仪进行分析，以保留时间及紫外吸收光谱图定性，以峰高或峰面积进行定量，气相色谱,-,质谱确认。,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,四、苯酚和氰醌,的检验,（二）测定方法,1.HPLC-DAD,法,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,四、苯酚和氰醌,的检验,（二）测定方法,1.HPLC-DAD,法,5,分析步骤,5.1,样品预处理,准确称取样品约,1.0g,于具塞比色管中，必要时在水浴上馏除乙醇等挥发性有机溶剂。,用甲醇（,3.1,）定容至,10mL,，常温超声提取,15min,，取上清液过,0.45m,滤膜后备用。,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,四、苯酚和氰醌,的检验,（二）测定方法,1.HPLC-DAD,法,色谱参考条件,色谱柱：,C18,柱，,150mm,3.9mm,，,5m,；,流动相：甲醇,+,水,=60+40,；,流速：,1.0mL/min,；,柱温：室温；,检测器：二极管阵列检测器，检测波长,280nm,。,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,四、苯酚和氰醌,的检验,（二）测定方法,1.HPLC-DAD,法,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,四、苯酚和氰醌,的检验,（二）测定方法,1.HPLC-DAD,法,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,四、苯酚和氰醌,的检验,（二）测定方法,1.HPLC-DAD,法,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,四、苯酚和氰醌,的检验,（二）测定方法,2.GC,法,以乙醇提取化妆品中氢醌和苯酚，用气相色谱法（氢火焰离子化检测器）进行分析，以保留时间定性，以标准品峰高或峰面积定量,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,四、苯酚和氰醌,的检验,（二）测定方法,2.GC,法,样品预处理,称取样品约,1.0g,于,10mL,具塞比色管中，用乙醇（,10.1,）溶解，超声振荡,1min,，用乙醇（,10.1,）稀释至刻度，静止后取上清液注入色谱仪，测定其峰高或峰面积。,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,四、苯酚和氰醌,的检验,（二）测定方法,2.GC,法,色谱参考条件,色谱柱：硬质玻璃柱（长,2m,，内径,3mm,）；,固定相：,10%SE-30,，担体：,Chromosorb,W AW DMCS 60,80,目；,柱室温度：,220,；汽化室温度：,280,；,载气：氮气；,气体流量：氮气,30mL/min,，氢气,50mL/min,，空气,500mL/min,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,四、苯酚和氰醌,的检验,（二）测定方法,2.GC,法,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,四、苯酚和氰醌,的检验,（二）测定方法,第三法,高效液相色谱-紫外检测器法,以甲醇提取化妆品中氢醌、苯酚，用高效液相色谱仪进行分析，以保留时间定性，以峰高或峰面积进行定量。,样品预处理,准确称取样品约,1.0g,于具塞比色管中，必要时在水浴上馏除乙醇等挥发性有机溶剂。,用甲醇（,3.1,）定容至,10mL,，常温超声提取,15min,，取上清液过,0.45m,滤膜后备用。,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,四、苯酚和氰醌,的检验,（二）测定方法,第三法,高效液相色谱-紫外检测器法,色谱参考条件,色谱柱：,C18,柱，,150mm,3.9mm,，,5m,；,流动相：甲醇,+,水,=60+40,；,流速：,1.0mL/min,；,柱温：室温；,检测器：紫外检测器，检测波长,280nm,。,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,四、苯酚和氰醌,的检验,（二）测定方法,第三法,高效液相色谱-紫外检测器法,化妆品检验,第五节 美白祛斑成分的检验,五、化妆品中美白祛斑成分检测示例,自学,注意：流动相中有磷酸二氢钾,化妆品检验,第六章 化妆品卫生化学检验,谢谢！,