ELISA检测乙肝抗体.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2019/5/17,#,ELISA,检测乙肝抗体,1,ELISA,检测乙肝抗体,2,肝表面抗体,ELISA,检测,实验目的,1.,掌握,ELISA,的原理和操作方法。,2.,熟悉酶标仪的使用方法。,3,标记物,免疫标记技术,免疫标记技术是用,荧光,、,酶,、或者,放射性核素,等标记抗体或抗原，利用标记技术的高度敏感性进行的抗原抗体的反应。,细胞,1,细胞,2,分类,荧光素,放射免疫技术,放射性核素,免疫荧光技术,酶,免疫酶技术,4,免疫酶技术,用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应,。可用酶标测定仪测定光密度,(OD,）来反应抗原或抗体含量，灵敏度可达到,ngpg/ml,。,细胞,1,标记物,DH,+H,O,D+2H,2,O,酶具有高效催化性,：可加快化学反应的速率；在反应前后没有质和量的改变；微量的酶便可发挥巨大的催化作用,5,酶免疫技术,酶联免疫吸附试验,酶免疫组化法,用于检测可溶性抗原或抗体,用于检测组织或细胞表面的抗原,6,酶联免疫吸附试验,-ELISA,ELISA,是一种免疫测定（,immunoassay,，,IA,）。抗原或者抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记：加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物；产物的量与标本中受检物质的量直接相关，由此进行定性或定量分析。,7,酶联免疫吸附实验,ELISA,实验原理,抗原或抗体吸附到固体相载体表面后，以及抗原抗体与酶连接后，仍保持免疫活性和酶活性，当酶遇到相应第底物时，在酶的催化下引起底物水解显色。产物的量与标体中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。,8,ELISA,可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法有三个必要的试剂：,（,1,）免疫吸附剂,（,2,）结合物,（,3,）酶反应的底物,9,ELISA,的类型,间接法（测抗体）,双抗体夹心发（测大分子抗原）,竞争发（测小分子抗原）,10,11,12,竞争法,用于抗原和半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，将特异性抗体吸附于固相载体表面，经洗涤后分成两组：一组加酶标记抗原和待测抗原的混合液，而另一组加酶标记抗原，再经孵育洗涤后加底物显色，这两组底物降解量之差即为所要测定的未知抗原的量。,这种方法所测定的抗原只有一个结合部位就可，因此，对小分子抗原如激素和药物之类的测定常用此法。该法的优点就是快，因此只有一个保温洗涤过程，但常需用较多的酶标记抗原。,13,操作步骤,1.,从冰箱取出试剂盒，室温平衡,30,分钟。,2.,按如下方式加待测血清，每孔,1,滴。,3.,每孔加酶结合物,1,滴（孔上方悬空滴加，无气泡），混匀，空白孔不加，置,37,度温箱,30,分钟。,4.,取出反应板，弃液，拍干。,5.,每孔注满洗条液，（不要溢出）静置,5,秒后弃液，拍干，重复洗条,5,次，拍干。,6.,每孔加显色剂,A,和,B,各,1,滴，置,37,度温箱,15,分钟。,7.,每孔加终止液,1,滴混匀，观察结果。,待,1,待,2,待,2,阳性,阴性,空白,14,15,16,17,18,19,