登革热病毒的分子诊断方法优质PPT课件.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,登革热病毒的分子诊断方法,登革热简介,登革热，又名骨痛热，是登革热病毒引起、依蚊传播的一种急性传染病。,本病于1779年在埃及开罗、印度尼西亚雅加达及美国费城发现，并据症状命名为关节热和骨折热。1869年由英国伦敦皇家内科学会命名为登革热。,登革热症状,1、发热,2、全身毒血症状,3、皮疹,4、出血,5、淋巴结肿大,登革热的特点,特点：,1、,地方性,2、,季节性,3、,突然性,4、,传播迅速，发病率高，病死率低，疫情常由一地向四周蔓延。,登革热的历史,1779年于开罗发生，于巴达维亚（今雅加达）发生,1873年于台湾澎湖县发生,1987-1990南台湾大爆发,1978年5月2日广东佛山石湾镇发现首例病人。,1999年夏季福州市近郊发生登革热流行,2004年福州市台江、连江、闽侯发生局部流行,2001-2006年广东省共报告登革热本地病例2 897例。,登革热的分布现状,全球每年约有五千万宗登革热个案，常见于热带和亚热带地域。,登革热病毒,登革病毒基因组结构,传播登革病毒的虫媒,埃及伊蚊（Ae.aegypti),白纹伊蚊(Ae.albopictus),分子诊断方法,1、,TaqMan MGB 实时荧光RT-PCR法,2、核酸杂交技术,3、RT-NEST-PCR,4、多重PCR,TaqMan MGB 实时荧光RT-PCR法,目前最主要采用的对登革热病毒的快速检测方法。,该方法在2009年成为中国出入境检验检疫行业标准。(SN/T 2301-2009),技术背景,是在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术。,于1996年由美国Applied biosystems公司推出，在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过Ct值和标准曲线对样品中的DNA(orcDNA)的起始浓度进行定量的方法。,是目前确定样品中DNA(或cDNA)拷贝数最敏感、最准确的方法。,引物和探针,FAM：,荧光报告基团,MGB：,荧光淬灭基团,Den-FP,：,Den-RP：,Den-Probe,：,技术,原理,技术原理,技术优点,1、特异性更强,2、能有效解决PCR污染问题,3、自动化程度高,4、可实现荧光信号的积累与PCR产物形成完全同步，可以实时监控RT-PCR过程。,应用领域,目前该技术主要应用在检测登革热病毒、口蹄疫病毒、马秋波病毒、禽呼肠孤病毒等方面。,展望,1、多重RT-PCR的改进,2、RT-NEST-PCR的改进,3、探针的改进和新探针的发现,谢谢！,