动物实验基本操作技术培训课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。,为了确保实验研究结果的可靠性、准确性和可重复性，必须掌握规范的动物实验操作技术。,娴熟的动物实验操作技术和技巧，是实验研究的保证。,动物具有自卫能力，不会讲话，不领人情，更不会自动服从。,减少动物的应激反应或伤害，避免实验人员出现意外和受伤。,实验前准备,理论准备：,了解动物实验基础知识,查阅关于实验方法的参考文献,制定研究计划和方案,条件准备：,动物、仪器、器械、药品,实验场所和饲养场所,实验动物的抓取与固定,性别鉴定,年龄的大致判断,妊娠检查,分组与编号,本章主要内容,常规采血方法,给药途径与方法,麻醉方法,处死方法,第一节 实验动物的抓取与固定,原则：,安静环境,动作轻柔和熟练,善待动物：,多一份爱就多一份收获,小鼠,大鼠,豚鼠,家兔,狗,猫,猴,第二节 性别鉴定,实验设计时有雌雄各半、雌雄不拘等。,性成熟后，雌雄动物易区分：,外生殖器,第二性征,新生动物？冬季天冷时的兔子？,大鼠和小鼠,兔、豚鼠,第三节 年龄的大致判断,提供实验动物时要有动物出生和生长记录。根据卡片记录来准确判断年龄。,如无记录则要根据该动物的生长曲线、牙齿、爪子或者毛色特征来大致判断。,常用实验动物成年体重,动物 小鼠 大鼠 豚鼠 家兔 猫 狗,体重 18-28g 180-280g 350-650g 2-3kg 1.5-2.5kg 9-15kg,小鼠,ICR生长曲线,CBA/J生长曲线,初生小鼠即可发声，嗅觉和味觉敏感,3日脐带脱落，开始长毛并出现胡须,46日双耳耸立,78日开始爬行，下门齿长出，被毛浓密,911日有听觉，被毛长齐,911日听觉发育完全，被毛长齐,1214日开眼，上门齿出，开始采食、饮水,能跳跃，能抓取东西,3周后可断奶独立生活,雄鼠：6.90g,雌鼠：6.40g,SD生长曲线,大鼠,初生仔鼠无毛、闭眼、耳孔闭合、6-7克,耳朵张开,开始长毛,被毛明显,8-10天下门齿长出,14-17天开眼,19天第一对臼齿长出,21天第二对臼齿长出、可以断乳,雄鼠：52g，雌鼠：50g,豚鼠,一般年幼豚鼠牙齿短而白，爪软而短，眼睛圆亮，行动活泼，被毛有光泽，且紧贴身体。而老年豚鼠则相反，牙齿和爪均较长，眼睛朦胧，行动迟缓。,可根据体重粗略地判断年龄。同日龄豚鼠，雌性体重略高于雄性。实验对年龄要求比较严格时，必须由卡片记录提供准确年龄。,日龄/d,初生,7,20,30,60,90,120,180,体重/g,50-115,100-120,150-200,170-220,240-300,330-400,400-470,520-600,兔,年龄判断的重要标志：门齿和爪。,门齿：,青年兔：洁白、短小、整齐。,老年兔：暗黄、厚长、不整齐、破损。,趾爪：,1岁，红多于白，,=1岁，红色与白色相当，,1岁，白多于红色。,另外，家兔皮薄而紧，眼神明亮，行动活泼的为青年兔；皮厚而松，眼神颓废，行动迟缓的为老年兔。,狗,主要依据牙齿的生长情况、磨损程度、外形、颜色等来综合鉴定:,2030 天开始长牙，第 10 个月牙 齿已全部长出。,随着年龄的增长，乳齿脱落而长出恒齿。2-4个月，更换门齿，56 个月更换犬齿。,幼年狗的牙齿洁白而无磨损，12 岁时，下 颌的前门齿逐渐被磨损，23 岁时，前门齿的尖锐端被磨损而消失。而上颌 前门齿在 23 岁时才开始磨损。在 45 岁时，其尖锐端也被磨损消失，且 牙齿发黄。到 1012 岁时，牙根全部磨损。,年龄,犬齿更换和磨损情况,2个月以下,仅有乳齿(白、细、尖),24个月,更换门齿,46个月,更换犬齿(白，牙尖圆钝),610个月,更换臼齿,1岁,牙长齐，洁白光亮。门齿有尖突,2岁,下门齿尖突部分磨乎,3岁,上、下门齿尖突大部分磨平,45岁,上、下门齿开始磨损呈微斜面，并发黄,68岁,门齿磨成齿根，犬齿发黄、磨损,910岁,唇部、胡须发白,10岁以上,门齿磨损，犬齿不齐全，牙根黄，唇边胡须全白,第四节 妊娠检查,临床检查和实验室检查：,外部检查法,摸胎法,阴道检查法：大小鼠、豚鼠、地鼠,直肠检查法：大动物,超声波检查法,孕酮含量测定法,青蛙试验：猴,大小鼠阴道涂片检查,阴栓检查,第五节 分组与编号,动物实验之前，必须对动物进行随机分组，再编号标记。,随机化分组：避免人为影响,一、分组,例1：将14只小鼠随机分成两组。,先将小鼠编为114号，,在随机数字表上任点一数，按任意方向连续抄14个随机数字。或者用计算器产生随机数字。编排如下：,动物编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14,随机数日 16 22 77 94 39 49 54 43 54 82 17 37 93 23,归 组 B B A B A A B A B B A A A A,奇数代表A织，偶数代表B组,A组：3 5 6 8 11,12,13 14,B组：1 2 4 7 9 10,调整分组：接刚才随机数字23继续抄表得随机数字78，用78除以8（因为需要把A组的8个数字调整掉一个），得余数6，所以把A组的第6个动物，即12号动物调整到B组。,最终分组,A组：3 5 6 8 11 13 14,B组：1 2 4 7 9 10,12,注意：,如果A组多3个，则再取1个随机数字，除以7。,如果除尽，则写下除数当做余数。,例2：12只大鼠随机分为3组,大鼠编号112,在随机数字表上任点一数，按任意方向连续抄12个随机数字。,每个数分别用3除，记录余数（整除记下3）,根据余数分组,大鼠编号：1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12,随机数字：08，27，01，50，15，29，39，39，43，79，69，10,余数：2，3，1，2，3，2，3，3，1，1，3，1,组别：B，C，A，B，C，B，C，C，A，A，C，A,A：3，9，10，12,B；1，4，6,C：,2,，5，7，8，11,调整分组：接刚才随机数字10继续抄表得随机数字61，用61除以5（因为需要把C组的5个数字调整掉一个），得余数1，所以把C组的第1个动物，即2号动物调整到B组。,最终分组,A：3，9，10，12,B；1，,2,，4，6,C：5，7，8，11,例2：6只大鼠随机将每只分为1组,大鼠编号16,在随机数字表上任点一数，按任意方向连续抄6个随机数字。,每个数分别用6、5、4、3、2、1除，记录余数（整除记下除数）,根据余数分组:余数3则把C记下；余数1，则把剩下的第1个字母A记下；第3个余数1，把剩下的第1个字母B记下,大鼠编号：1，2，3，4，5，6,随机数字：33，46，10，52，68，07,除数：6，5，4，3，2，1,余数：3，1，2，1，2，1，,A,组别：,B,C,D,E,F,二、编号和标记,1、染色法：浅色动物,3.5-5苦味酸溶液（黄色）,0.5%中性红或碱性品红溶液（红色）,2硝酸银溶液（咖啡色，涂后光照10分钟）,煤焦油酒精溶液（黑色）,龙胆紫溶液（紫色）,2、打耳孔法：小型动物,3、剪趾法：小型动物,139号？,4、剪尾法：大、小鼠，仅限与两组间区分,5、针刺法(纹身)：刺号钳，中、大型动物,6、号牌法：耳标签、项圈、腿圈，中、大 型动物,7、剪毛法：大动物,8、笼子标号,三、去毛,1、剪毛：弯头剪毛剪,2、拔毛：大小鼠尾静脉、家兔耳缘静脉注射,3、剃毛：将剃毛部位先用剪刀粗剪一遍，蘸温肥皂水润湿，用剃刀顺着被毛方向剃毛；如用电动剃毛推剪，则逆被毛向剃毛。,4、化学脱毛：,常用脱毛剂,8%硫化钠水溶液,硫化钠3份，洗衣粉1份、淀粉7份，加水调成糊状,硫化钡50克，氧化锌25克，淀粉25克，加水100毫升调成糊状,硫化钠10克，生石灰15克，加水到100毫升，适合犬和其他大动物。,第六节 常规采血方法,正式实验前后，常需采血测定生化指标。,1、大小鼠：,眶静脉丛（窦）：,少量多次采大小鼠血。,小鼠0.20.3ml，大鼠0.40.6ml,摘眼球：用于一次大量采小鼠血，可得到45体重的血量。,尾静脉：用于少量多次采大小鼠血。,眶静脉丛采血,摘眼球采血,尾静脉采血,剪头：用于一次性大量采小鼠血，可得到,0.5,1.0,ml,的血量,大血管：包括颈动脉（静脉），股动脉（静脉），腋下动脉（静脉），腹主动脉。此方法不常用于小鼠采血，而多用于大鼠一次性大量采血。可得,5,ml,左右血量。,心脏采血：小鼠少用，可用于大鼠一次性（开胸，,右心室,）或多次采血（不开胸）。,鼠断头器,2、家兔：,耳缘静脉：可反复采血，每次,5,10,ml,。,耳中央静脉：可反复采血，每次,10,15,ml,。,心脏采血,可用于一次性（开胸）或 多次采血（不开胸）。,一次性开胸采血可得到,80,100,ml,血量。,颈动静脉采血：,用于一次性采血，需要手术，可得血量,80,10ml,。,3、豚鼠：,心脏采血：可用于一次性（开胸）或多次采血（不开胸）。,一次性开胸采血可得到510ml血量。,背跖静脉采血：用于少量反复采血。,4、犬猫：前肢内侧头静脉、后肢外侧小隐静脉。也可颈静脉（动脉）或心脏采血,5、猪：前腔静脉采血或耳大静脉采血,6、羊：颈静脉采血,7、猴：前肢头静脉、后肢皮下静脉或耳缘静脉等。,8、禽类：翼下静脉,常用实验动物的最大安全采血量与最小致死采血量,动物种类,最大安全采血量(mL),最小致死采血量(mL),小鼠,0.1,0.3,大鼠,1,2,豚鼠,5,10,家兔,10,40,狗,50,300,猴,15,60,采血场所有充足的光线；室温夏季最好保持在,25,28,，冬季，,15,20,为宜；,采血用具有采用部位一般需要进行消毒；,采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥；,若需抗凝全血，在注射器或试管内需预先加入抗凝剂。,采血时要注意,常用抗凝剂：,肝素：抑制凝血酶活力，阻止血小板凝集。纯品肝素,1,mg,125U,，,10U20U,抗,1,ml,血凝集，但通常应用,23,倍剂量。,用法：可配成,1%,肝素溶液，用时取,0.1,ml,于试管内，,100,烘干，每管可抗凝,510,ml,血。或用,1%,肝素溶液湿润采血注射器。,肝素可改变蛋白质等电点，当用盐析法分离蛋白作分类测定时，不可用肝素抗凝。,枸橼酸钠：使凝血必需的钙离子失活。常用,35%,水溶液，碱性较强。,草酸盐合剂：草酸铵,1.2,g,，,草酸钾,0.8,g,，,福尔马林,1.0,ml,，,加蒸馏水至,100,ml,。,使凝血必需的钙离子失活。每毫升血加草酸盐合剂,0.1,ml,。,氟化钠：每毫升血加,6,mg,。,其他体液采集,1、胸水、腹水采集：穿刺,2、消化液采集：唾液，胃液，胰液，胆汁,3、精液采集：中、大动物用假阴道，小动物穿刺附睾来采集精液。,4、脑脊液采集：手术或小脑延髓池抽取,5、骨髓采集：大动物活体穿刺，小动物处死后取股骨或胸骨骨髓,6、尿液采集：,代谢笼收集,导尿管采集,膀胱穿刺,压迫排尿,第七节 给药途径与方法,在动物实验过程中，应根据不同的实验目的、动物种类、药物类型来决定动物的给药途径与方法。,1、自动口服：加入饲料或饮水,2、投喂药片：掰开口，放到舌根部,3、灌胃（i.g),4、直肠给药,5、呼吸道给药,6、滴鼻,7、点眼,8、经皮肤给药：常用于检测药物、毒物、化妆品等的透皮吸收、局部作用、致敏作用等。家兔和豚鼠选择脊柱两侧皮肤，大小鼠常采取浸尾方式。,9、皮内注射(i.d)：一般用于接种或过敏实验。将药液注射在真皮和表皮之间。,10、皮下注射(s.c)：颈背部、腋下、腿、侧腹。,11、肌肉注射(i.m)：股内侧部肌肉。,12、腹腔注射(i.p)：下腹部腹中线两侧,13、静脉注射(i.v)：,小鼠：尾静脉,大鼠：尾静脉、阴茎静脉、舌下静脉、浅背侧跖静脉,大小鼠尾部有,4,对动静脉，其中背腹各有,1,根动脉、两侧各有,1,根静脉很明显。,尾静脉注射,阴茎静脉注射,舌下静脉注射,猴的后肢皮下静脉注射,浅背侧跖静脉,豚鼠：浅背侧跖静脉、耳静脉注射,家兔：耳静脉注射,猪：耳缘静脉,猫、狗：前肢内侧头静脉、后肢外侧小隐静脉注射,14、脑腔注射,15、关节腔注射：,16、椎管内注射：注射入蛛网膜下腔,17、淋巴囊内注射：蛙和蟾蜍,注射途径,小鼠,大鼠,豚鼠,兔,狗,腹腔,0.2,1.0,1,3,2,5,5,10,5,15,肌肉,0.1,0.2,0.2,0.5,0.2,0.5,0.5,1,2,5,静脉,0.2,0.5,1,2,1,5,3,10,5,15,皮下,0.1,0.5,0.5,1,0.5,2,1,3,3,10,几种动物不同给药途径的常用注射量（毫升）,第八节 麻醉方法,对动物实施麻醉，是动物福利的措施。,如不实施麻醉，动物严重应激，影响实验结果，甚至死亡。,动物清醒状态下，可能会伤及人员。,1、麻醉方法：,全麻,吸入麻醉，静脉注射、腹腔注射。,局麻,浸润麻醉。根据手术，按皮下、筋膜、肌肉、腹膜、骨膜等顺序逐步深入注射到术野周围。,常用麻醉剂的用法及剂量,麻醉剂,动物种类,给药途径,剂量(mg/kg),常用浓度(),戊巴比妥钠,犬、兔,静脉,30,3,腹腔,4050,3,大鼠、小鼠、豚鼠,腹腔,4050,2,硫喷妥钠,犬、兔,静脉,15-20,2,大鼠,腹腔,40,1,小鼠,腹腔,15-20,1,氯胺酮,犬、猫,腹腔,10-40,10,大鼠、小鼠,腹腔,100200,10,氯醛糖,兔,静脉,80-100,2,大鼠,腹腔,50,2,乌拉坦,兔,静脉,750-1000,30,大鼠、小鼠,皮下或肌肉,800-1000,20,使用全身麻醉剂的注意事项,动物禁食1012h，麻醉前动物禁用泻药，麻醉后动物必须保持呼吸道通畅和暴露组织(眼球、肠等)的湿润和营养。,动物在麻醉期体温容易下降,，,要采取保温措施。,注射麻醉剂必须缓慢,，,同时观察肌肉紧张性、角膜反射和对皮肤夹捏的反应,，,当这些活动明显减弱或消失时,，,立即停止注射。,配制的药液浓度要适中,，,不可过高,，,以免麻醉过急,；,也不能过低,，,以减少注人溶液的体积。,犬、猪、猴等大动物可在麻醉前给予一些药物以减少动物紧张，减少支气管分泌。,2局部麻醉,猫的局部麻醉一般应用0.5,1.0%盐酸普鲁卡因注射。粘膜表面麻醉宜用2%盐酸可卡因。,兔在眼球手术时，可于结膜囊滴入0.02%盐酸可卡因溶液，数秒钟即可出现麻醉。,狗的局部麻醉用0.5,1%盐酸普鲁卡因注射。眼鼻、咽喉表面麻醉可用2%盐酸可卡因。,4、实验动物的急救,呼吸停止：,人工呼吸,尼可刹米：适用于各种原因的中枢性呼吸衰竭，每次,0.25,g0.5g,，,静脉注射。,戊四氮：对抗巴比妥类和氯丙嗪过量导致的呼吸衰竭，每次,0.1,g,，,静脉注射或心内注射。,美解眠：对抗巴比妥类和水合氯醛中毒，每次,50,mg,，,静脉缓慢注射。,心跳停止：,心脏按摩,针刺或脉冲电刺激,盐酸肾上腺素：用于心脏骤停的急救。每次,0.51.0,ml,静脉注射,碳酸氢钠：纠正急性酸中毒。可注射肾上腺素后立即静脉注射,5%,碳酸氢钠,12ml/kg,第九节 处死方法,从人道主义和动物保护尽量采用安乐死方法。,原则：时间短、痛苦少、不影响实验。,尸体需要做无害化处理：高压、焚烧、深埋等,1、颈椎脱臼法：小鼠、大鼠,2、空气栓塞法：兔、猫、犬等大动物,3、放血法：心脏放血或大血管放血,4、断头法：小鼠、大鼠,5、吸入二氧化碳,6、注射巴比妥类药物,具体的操作学习,1、大小鼠、兔的抓取和固定。,2、大小鼠的灌胃操作。,