第七章体液蛋白质检验.pptx

第七章体液蛋白质检验2n本章内容概要本章内容概要:第二节第二节 体液蛋白质测定体液蛋白质测定第一节第一节 概述概述31 1、掌握血浆蛋白质得组成、功能及分类、掌握血浆蛋白质得组成、功能及分类;个别血浆蛋白质个别血浆蛋白质(前白蛋白、白蛋白前白蛋白、白蛋白)得来源和生理功能得来源和生理功能;血清总蛋白和白蛋血清总蛋白和白蛋白得测定方法和原理。白得测定方法和原理。2 2、熟悉急性时相反应蛋白得概念和种类、熟悉急性时相反应蛋白得概念和种类;血清球蛋白和纤维血清球蛋白和纤维蛋白原得测定方法。蛋白原得测定方法。3 3、了解其他蛋白质得来源和生理功能、了解其他蛋白质得来源和生理功能;尿液蛋白和脑脊液蛋尿液蛋白和脑脊液蛋白得检测白得检测 。n本章教学要求本章教学要求:第一节第一节 概述概述一、血浆蛋白质得分类和功能二、血清蛋白质电泳组分得临床分析三、血浆蛋白质及其异常四、其他体液蛋白质4一、血浆蛋白质得分类和功能一、血浆蛋白质得分类和功能n组成组成:种类种类:1000种种 500种种 200种种含量含量:g mg g来源来源:肝脏是蛋白质主要得加工厂肝脏是蛋白质主要得加工厂(一一)血浆蛋白质得组成、功能及分类血浆蛋白质得组成、功能及分类6vv营养作用营养作用营养作用营养作用,修补组织蛋白修补组织蛋白修补组织蛋白修补组织蛋白;vv维持血浆胶体渗透压维持血浆胶体渗透压维持血浆胶体渗透压维持血浆胶体渗透压:主要是白蛋白主要是白蛋白主要是白蛋白主要是白蛋白;vv作为作为作为作为PHPH缓冲系统得一部分缓冲系统得一部分缓冲系统得一部分缓冲系统得一部分:酸性或碱性蛋白质酸性或碱性蛋白质酸性或碱性蛋白质酸性或碱性蛋白质;vv运输作用运输作用运输作用运输作用:作为激素、维生素、脂类、代谢产物、离子、作为激素、维生素、脂类、代谢产物、离子、作为激素、维生素、脂类、代谢产物、离子、作为激素、维生素、脂类、代谢产物、离子、药物等得载体药物等得载体药物等得载体药物等得载体;vv体液免疫防御系统体液免疫防御系统体液免疫防御系统体液免疫防御系统:作为免疫球蛋白与补体等免疫分子作为免疫球蛋白与补体等免疫分子作为免疫球蛋白与补体等免疫分子作为免疫球蛋白与补体等免疫分子;vv催化作用催化作用催化作用催化作用:酶得本质酶得本质酶得本质酶得本质;vv代谢调控作用代谢调控作用代谢调控作用代谢调控作用;作为底物作为底物作为底物作为底物,酶或中间产物抑制或激活组织蛋酶或中间产物抑制或激活组织蛋酶或中间产物抑制或激活组织蛋酶或中间产物抑制或激活组织蛋白酶白酶白酶白酶;vv参与凝血与纤维蛋白溶解参与凝血与纤维蛋白溶解参与凝血与纤维蛋白溶解参与凝血与纤维蛋白溶解;:;:除除除除因子外均可。因子外均可。因子外均可。因子外均可。血浆蛋白质得功能血浆蛋白质得功能血浆蛋白质得分类血浆蛋白质得分类7 7分离方法分离方法盐析法盐析法:白蛋白白蛋白/球蛋白球蛋白(pH7、0半饱和得硫酸铵溶液半饱和得硫酸铵溶液)电泳法电泳法:醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素薄膜电泳:6种种琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳:13种种聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳:30种种SDS聚丙烯酰胺凝胶等电双向电泳聚丙烯酰胺凝胶等电双向电泳:300种种分分辨辨率率增增高高-+纤维蛋白原纤维蛋白原醋酸纤维素薄膜醋酸纤维素薄膜醋纤膜电泳或琼脂糖电泳:5个成分 清蛋白1球蛋白 2球蛋白 球蛋白 球蛋白分辨率高时:可有7个成分 有1和2 2中也可有两条聚丙烯酰胺凝胶电泳:可以分出30多种蛋白质醋纤膜电泳或琼脂糖电泳:5个成分清蛋白 1球蛋白 2球蛋白 球蛋白 球蛋白2、电泳分类法电泳分类法是临床实验室常是临床实验室常 用得血浆蛋白质用得血浆蛋白质 电泳方法电泳方法分辨率高时:可有7个成分 有1和2 2中也可有两条聚丙烯酰胺凝胶电泳:可以分出30多种蛋白质93、功能分类法功能分类法(1)运输载体类u血浆脂蛋白血浆脂蛋白:包括包括CMCM、VLDLVLDL、LDLLDL、HDLHDL等等u前清蛋白与清蛋白前清蛋白与清蛋白u甲状腺素结合球蛋白甲状腺素结合球蛋白u皮质素结合球蛋白皮质素结合球蛋白u类固醇激素结合球蛋白类固醇激素结合球蛋白u视黄醛结合蛋白视黄醛结合蛋白u转铁蛋白转铁蛋白u触珠蛋白触珠蛋白u血色素结合蛋白血色素结合蛋白u铜蓝蛋白铜蓝蛋白大家学习辛苦了，还是要坚持继续保持安静继续保持安静(2)蛋白酶抑制物:包括1-抗胰蛋白酶、1-抗糜蛋白酶、2-巨球蛋白等6种以上(3)血清酶类:血浆固有酶如LCAT等组织细胞少量释放得细胞内酶 细胞破裂而进入血循环得细胞内酶(4)蛋白类激素:胰岛素、胰高血糖素、生长激素等(5)凝血蛋白类(6)免疫球蛋白类(7)补体蛋白类(2)蛋白酶抑制物:包括1-抗胰蛋白酶、1-抗糜蛋白酶、2-巨球蛋白等6种以上(3)血清酶类:血浆固有酶如LCAT等组织细胞少量释放得细胞内酶 细胞破裂而进入血循环得细胞内酶(4)蛋白类激素:胰岛素、胰高血糖素、生长激素等(5)凝血蛋白类(6)免疫球蛋白类(7)补体蛋白类还有许多种类得蛋白质未被认识还有许多种类得蛋白质未被认识2、功能分类法功能分类法 1 1、作为运载蛋白作为运载蛋白 2 2、组织蛋白酶抑制物组织蛋白酶抑制物 3 3、在血浆中起催化作用得酶在血浆中起催化作用得酶 4 4、参与代谢调控作用得蛋白质和肽类激素参与代谢调控作用得蛋白质和肽类激素 5 5、参与凝血与纤维蛋白溶解参与凝血与纤维蛋白溶解 6 6、组成体液免疫防御系统组成体液免疫防御系统(IgIg与补体与补体)所有血浆蛋白质能所有血浆蛋白质能 维持血浆胶体渗透压维持血浆胶体渗透压 组成血液组成血液pHpH缓冲系统缓冲系统(二二)血浆蛋白质得功能血浆蛋白质得功能生物生物化学化学急性时相反应(acute phase reaction,APR):血浆蛋白质对急性炎症和组织损伤得非特异性反应。此时许多蛋白质:如1-抗胰蛋白酶、1-酸性糖蛋白、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、C4、C3、纤维蛋白原和C-反应蛋白等浓度显著升高或升高,而少数蛋白质如前清蛋白、清蛋白、转铁蛋白则出现相应下降。急性时相反应蛋白(acute phase reactive protein,APP):对急性炎症和组织损伤起非特异反应从而出现浓度变化得血浆蛋白质。增加得蛋白质称为正向APP下降得蛋白质称为负向APP131、急性时相反应(三三)影响血浆蛋白质浓度得因素影响血浆蛋白质浓度得因素机体哪些情况会出现急性时相反应？急性细菌性感染如急性肺炎、链球菌感染性肾炎急性非特异性炎症如风湿性关节炎、类风湿性关节炎、风湿性心脏病等急性心肌梗死恶性肿瘤手术、创伤14APR得机制得机制v炎症损伤部位释放得细胞因子炎症损伤部位释放得细胞因子,包括白介素、肿瘤坏死因包括白介素、肿瘤坏死因子子和和、干扰素以及血小板活化因子等、干扰素以及血小板活化因子等,引发肝细胞引发肝细胞中上述蛋白质合成量得改变。中上述蛋白质合成量得改变。v正向正向APPAPP是机体防御机制得一个部分是机体防御机制得一个部分,如如:增加得蛋白酶抑制剂控制组织中得酶活性增加得蛋白酶抑制剂控制组织中得酶活性 触珠蛋白保护从破坏红细胞中释放得触珠蛋白保护从破坏红细胞中释放得Hb Hb C C反应蛋白等可活化补体反应蛋白等可活化补体v负向负向APPAPP多作为营养蛋白多作为营养蛋白,此时合成减少此时合成减少,可为合成正向可为合成正向APPsAPPs提供更多得氨基酸原料。提供更多得氨基酸原料。15 APR得时相得时相vC-C-反应蛋白反应蛋白:首先升高首先升高v1-1-酸性糖蛋白酸性糖蛋白:1212小时内也升高小时内也升高v1-1-抗胰蛋白酶、触珠蛋白、抗胰蛋白酶、触珠蛋白、C4C4和纤维蛋白原然后升和纤维蛋白原然后升高高vC3C3和铜蓝蛋白和铜蓝蛋白:最后是升高最后是升高v通常在通常在2 25 5天内这些天内这些APPsAPPs达到最高值达到最高值16测定测定APP得临床意义得临床意义帮助监测炎症得发生、变化和观察治疗反应帮助监测炎症得发生、变化和观察治疗反应,尤其是那些升高最早和最多得蛋白质尤其是那些升高最早和最多得蛋白质1730二、血清蛋白质电泳组分得临床分析二、血清蛋白质电泳组分得临床分析血浆蛋白质和血清蛋白质有何不同？血浆:为生理状况血清:为常用检测标本血浆蛋白质和血清蛋白质有何不同？血浆:为生理状况血清:为常用检测标本31(一一)血清蛋白质电泳得正常组分及其含量血清蛋白质电泳得正常组分及其含量清蛋白:5768 1球蛋白:1、05、7 2球蛋白:4、911、2 球蛋白:713 球蛋白:9、818、2醋纤膜电泳正常百分含量清蛋白:5768 1球蛋白:1、05、7 2球蛋白:4、911、2 球蛋白:713 球蛋白:9、818、2醋纤膜或琼脂糖电泳正常区带区带图谱区带图谱扫描图谱扫描图谱kk1、肾病综合征2、肝硬肝硬化化正常图谱典型得典型得-桥桥不典型不典型-桥桥IgG型IgA型3、多发性骨髓多发性骨髓瘤瘤2典型得异常电泳图谱及其扫描曲线典型得异常电泳图谱及其扫描曲线(四四)球蛋白增多与球蛋白增多与M蛋白蛋白Ig多克隆性增多:区带呈弥散性升高见于反复或慢性感染、自身免疫性疾病、肝细胞 疾病或寄生虫感染。Ig单克隆性增多M蛋白:区带局部有深染窄带浆细胞病、尤其恶性浆细胞病时,异常浆细胞单克隆增殖,产生大量单克隆Ig或轻链或重链片段,病人血清或尿液中可出现结构单一得M蛋白Ig多克隆性增多:区带呈弥散性升高见于反复或慢性感染、自身免疫性疾病、肝细胞 疾病或寄生虫感染。Ig单克隆性增多M蛋白:区带局部有深染窄带浆细胞病、尤其恶性浆细胞病时,异常浆细胞单克隆增殖,产生大量单克隆Ig或轻链或重链片段,病人血清或尿液中可出现结构单一得M蛋白2324二、血浆蛋白质二、血浆蛋白质(一一)前白蛋白前白蛋白(PAPA)(二二)白蛋白白蛋白(ALBALB)(三三)1-1-酸性糖蛋白酸性糖蛋白(AAGAAG)(四四)甲胎蛋白甲胎蛋白(AFP)(AFP)(五五)结合珠蛋白结合珠蛋白(Hp)(Hp)(六六)2-2-巨球蛋白巨球蛋白(AMG)(AMG)(七七)铜蓝蛋白铜蓝蛋白(CER/CP)(CER/CP)(八八)转铁蛋白转铁蛋白(TRF)(TRF)(九九)2 2 微球蛋白微球蛋白(BMG)(BMG)(十十)C-C-反应蛋白质反应蛋白质(CRP)(CRP)25n结构结构:MW=54000MW=54000,四个相同亚基构成得四聚体。四个相同亚基构成得四聚体。n理化性质理化性质:p p4 4、7 7,肝细胞合成肝细胞合成,半寿期半寿期12 12 小时。小时。n测定方法测定方法:免疫比浊法免疫扩散技术。免疫比浊法免疫扩散技术。26n功能功能:营养指标营养指标,载体功能载体功能(甲状腺素维生素甲状腺素维生素)。n临床意义临床意义:1 1、作为营养不良得早期指标作为营养不良得早期指标;2 2、作为肝功能不全得指标作为肝功能不全得指标,比比AlbAlb更灵敏更灵敏;3 3、负性急性时相反应蛋白负性急性时相反应蛋白,急性炎症急性炎症,恶性肿瘤恶性肿瘤,肝硬化及肝硬化及肾炎等情况下肾炎等情况下,PAPA迅速降低。迅速降低。n参考值参考值:0 0、18180 0、45g/L 45g/L。27 急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 282930n结构结构:585585个个aaaa残基构成得单链多肽残基构成得单链多肽,MW=66458MW=66458,含含17个个二硫键。二硫键。n理化性质理化性质:pI=4pI=45 5、8 8,肝细胞合成但不储存肝细胞合成但不储存,半衰期为半衰期为15-19 15-19 天天,占总蛋白得占总蛋白得40%40%60%60%,p p7 7、4 4时带负电。时带负电。n测定方法测定方法:色素结合法色素结合法:溴甲酚绿溴甲酚绿(BCGBCG),),溴甲酚紫溴甲酚紫(BCPBCP),盐析等。盐析等。(二二)白蛋白白蛋白(ALBALB)急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 31n功能功能:营养作用营养作用,载体功能载体功能(高亲和力高亲和力),),维持血浆渗透压和正常维持血浆渗透压和正常p p值。值。n临床意义临床意义:合成受食物影响合成受食物影响,敏感性较低。敏感性较低。降低降低:在营养不良在营养不良,肝功不全肝功不全,急慢性肝疾病时急慢性肝疾病时;增高增高:少见少见,假性升高。假性升高。n参考值参考值:35-50 g/35-50 g/32n功能功能:蛋白酶抑制物蛋白酶抑制物(具有具有9090得抑制蛋白酶活力得抑制蛋白酶活力)。如糜蛋。如糜蛋白酶白酶,弹性蛋白酶弹性蛋白酶,但此抑制作用有明显得但此抑制作用有明显得p p依赖性。依赖性。n临床意义临床意义:降低降低:血浆血浆AATAAT仅见于胎儿呼吸迫综合症。仅见于胎儿呼吸迫综合症。升高升高:炎症、术后炎症、术后,某些激素治疗后。某些激素治疗后。n参考值参考值:0 0、83831 1、99g/L 99g/L 33n结构结构:181181个个aaaa残基构成得单链多肽残基构成得单链多肽,MW=4MW=4万万,含含45%45%得糖得糖,其中其中唾液酸占唾液酸占11%11%12%12%。n理化性质理化性质:pIpI值值2 2、7 73 3、5 5,肝合成肝合成,脓毒症时粒细胞和单核细脓毒症时粒细胞和单核细胞及某些肿瘤组织也可合成。胞及某些肿瘤组织也可合成。位于位于1-1-球蛋白区带。球蛋白区带。n测定方法测定方法:免疫化学法免疫化学法(扩散扩散,浊度浊度),化学法化学法(间接法间接法),),ELISAELISA法法等等(三三)1-1-酸性糖蛋白酸性糖蛋白(AAGAAG)急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 34n功能功能:与免疫防御功能有关与免疫防御功能有关,机制不详机制不详;抑制血小板凝集影响抑制血小板凝集影响胶原纤维形成胶原纤维形成;参与脂类运输。参与脂类运输。n临床意义临床意义:升高升高:急性炎症急性炎症,组织损伤组织损伤,风湿风湿,肿瘤肿瘤,AMI AMI,溃结时溃结时;降低降低:营养不良降低营养不良降低,严重肝损伤和雌激素作用。严重肝损伤和雌激素作用。n参考值参考值:、25252 2、0g/L 0g/L。35n结构结构:590590个个aaaa残基构成得单链多肽残基构成得单链多肽,MW=6、5万万万万,含含4%4%得糖。得糖。n理化性质理化性质:pIpI值值、7 7-、8 8,在白蛋白和在白蛋白和1-1-球蛋白之间。胎球蛋白之间。胎儿肝卵黄囊合成儿肝卵黄囊合成,成人量微成人量微,升高由于肿瘤细胞合成。升高由于肿瘤细胞合成。n测定方法测定方法:免疫化学法免疫化学法(扩散扩散,火箭电泳火箭电泳),ELISA,ELISA等等(四四)甲胎蛋白甲胎蛋白(AFP)(AFP)36n功能功能:胎儿血浆主要蛋白质胎儿血浆主要蛋白质,调节肝细胞生长和脑细胞发育调节肝细胞生长和脑细胞发育;抑制细胞和体液得免疫反应抑制细胞和体液得免疫反应;维持正常妊娠维持正常妊娠,防止母婴排斥。防止母婴排斥。n临床意义临床意义:胎儿产前监测胎儿产前监测(羊水或母血羊水或母血)增高增高:原发性肝癌患者诊断和鉴别原发性肝癌患者诊断和鉴别(80%80%原发增高原发增高),),其他癌症其他癌症也可见增高。也可见增高。n参考值参考值:20-100g/L(20-100g/L(成人成人)5g/L(5g/L(新生儿新生儿)37n结构结构:两对肽链形成四聚体两对肽链形成四聚体,有变异体。有变异体。n理化性质理化性质:肝合成肝合成,pIpI 值值为为4 4、1 1,电泳位电泳位a2-a2-球蛋白区带球蛋白区带n测定方法测定方法:电泳法电泳法,免疫化学法免疫化学法(扩散扩散,浊度浊度),化学法等化学法等(五五)结合珠蛋白结合珠蛋白(HpHp)急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 38n功能功能:与红细胞中释出自由与红细胞中释出自由Hb Hb 结合结合,防止防止Hb Hb 从尿中丢失保存从尿中丢失保存铁铁,急性溶血后一周再生恢复。急性溶血后一周再生恢复。高效得过氧化物酶。高效得过氧化物酶。需铁细菌得天然抑菌剂。需铁细菌得天然抑菌剂。n临床意义临床意义:升高升高:急性时相反应急性时相反应;降低降低:血管内溶血时血管内溶血时;雌激素作用。雌激素作用。n参考值参考值:0 0、5-25-2、2 g/L2 g/L39n结构结构:MW=62MW=6280 80 万万,分子量最大分子量最大,由四个相同得亚基组成由四个相同得亚基组成,含糖量约。含糖量约。n理化性质理化性质:肝细胞与单核吞噬细胞系统中合成肝细胞与单核吞噬细胞系统中合成,半寿期半寿期5 5 天。天。n测定方法测定方法:免疫化学等免疫化学等(六六)2-2-巨球蛋白巨球蛋白(AMG)(AMG)不属于急性时相反应蛋白不属于急性时相反应蛋白 40n功能功能:与多种分子和离子结合与多种分子和离子结合,影响蛋白水解酶活性影响蛋白水解酶活性(主要得主要得蛋白酶抑制剂具有选择性保护某些酶得作用蛋白酶抑制剂具有选择性保护某些酶得作用)。n临床意义临床意义:婴幼儿及儿童比成人高婴幼儿及儿童比成人高;升高升高:雌激素雌激素,低蛋白血症尤其是肾病综合征时低蛋白血症尤其是肾病综合征时,可显著升可显著升高以维持血浆胶体渗透压高以维持血浆胶体渗透压;降低降低:胰腺炎及前列腺癌时。胰腺炎及前列腺癌时。n参考值参考值:1 1、31-231-2、93g/L93g/L41n结构结构:MW=12-16 MW=12-16 万万,1046,1046个个aaaa残基构成得单链多肽残基构成得单链多肽,含糖约含糖约,每分子铜蓝蛋白可结合个铜原子。每分子铜蓝蛋白可结合个铜原子。n理化性质理化性质:肝合成肝合成,巨噬细胞和淋巴细胞合成少量巨噬细胞和淋巴细胞合成少量;p pI I 值值为为4 4、4 4,具遗传基因多态性。具遗传基因多态性。n测定方法测定方法:免疫化学免疫化学(扩散或比浊扩散或比浊)等等(七七)铜蓝蛋白铜蓝蛋白(CER(CER/CP/CP)急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 42n功能功能:具氧化酶活性且起抗氧化剂作用具氧化酶活性且起抗氧化剂作用,铜得无毒代谢库铜得无毒代谢库n临床意义临床意义:增加增加感染感染,创伤创伤,肿瘤肿瘤;降低降低-营养不良营养不良,严重肝病及肾综严重肝病及肾综;协助诊断协助诊断WilsonWilson病病(肝豆肝豆状核变性状核变性)n参考值参考值:0 0、21-021-0、53g/L53g/L43n结构结构:MW=7MW=7、7 7 万万,单链糖蛋白单链糖蛋白,含糖约。含糖约。n理化性质理化性质:肝细胞合成肝细胞合成,pIpI 值值为为5 5、5-55-5、9,9,半寿期半寿期7 7 天天,可逆可逆结合多价离子如结合多价离子如FeFe、CuCu、ZnZn、Co Co 等等,一分子一分子TRF TRF 可结合两个三可结合两个三价铁。价铁。n测定方法测定方法:免疫扩散法免疫扩散法,放免法和免疫比浊法等。放免法和免疫比浊法等。(八八)转铁蛋白转铁蛋白(TRF(TRF/Tf/Tf)急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 44n功能功能:运输铁。运输铁。n临床意义临床意义:血血TRF TRF 浓度受铁供应调节浓度受铁供应调节,缺铁缺铁TRFTRF升高升高,铁治疗铁治疗后恢复。可用于后恢复。可用于贫血得诊断贫血得诊断(缺铁性低色素性贫血缺铁性低色素性贫血TRFTRF升高升高,再再障时障时TRFTRF正常或者降低正常或者降低)和对治疗得监测和对治疗得监测。降低降低:急性时相反应、慢性肝病、营养不良及蛋白丢失时急性时相反应、慢性肝病、营养不良及蛋白丢失时;升高升高:妊娠或雌激素会使其降低妊娠或雌激素会使其降低;缺铁性低色素贫血。缺铁性低色素贫血。n参考值参考值:2 2、5-45-4、3 g/L(3 g/L(成人成人)1 1、30-230-2、75 g/L 75 g/L(新生儿新生儿)45n结构结构:MW=11800MW=11800,100100个个aaaa残基构成得单链多肽残基构成得单链多肽,分子中含一对分子中含一对二硫键二硫键,不含糖。不含糖。n理化性质理化性质:pIpI 值值为为5 5、7 7,淋巴细胞合成淋巴细胞合成,存在细胞表面存在细胞表面,特别是特别是淋巴和肿瘤细胞。释放入血循环。半衰期淋巴和肿瘤细胞。释放入血循环。半衰期107 107 分钟分钟,几乎由肾小几乎由肾小管回收。管回收。n测定方法测定方法:放射免疫化学等。放射免疫化学等。(九九)2 2 微球蛋白微球蛋白(BMG)(BMG)46n功能功能:分子量小分子量小,可自由通过肾小球滤过膜可自由通过肾小球滤过膜,在肾小管几乎在肾小管几乎全部重吸收全部重吸收,可监测肾小管功能可监测肾小管功能;是是HLAHLA(人类白细胞抗原)链得轻链部分。链得轻链部分。n临床意义临床意义:增高增高:肾功能衰竭肾功能衰竭,炎症及肿瘤时。炎症及肿瘤时。n参考值参考值:1 1、0 0 2 2、5 mg/L 5 mg/L(血浆血浆)n性质性质:因在急性炎症病人血清中出现因在急性炎症病人血清中出现,可结合肺炎球菌细胞壁可结合肺炎球菌细胞壁C-C-多糖得蛋白质而命名。多糖得蛋白质而命名。n结构结构:MW11MW11、5-14 5-14 万万,分子含个相同得亚基分子含个相同得亚基,亚基间靠非共亚基间靠非共价键连接成圆盘状多聚体。价键连接成圆盘状多聚体。n理化性质理化性质:肝合成肝合成,pIpI 值值为为6 6、2 2,电泳位于电泳位于 区带区带。n测定方法测定方法:半定量沉淀法半定量沉淀法(早早),),免疫化学法。免疫化学法。(十十)C-C-反应蛋白质反应蛋白质(CRP)(CRP)急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 48n功能功能:结合多糖结合多糖,磷脂和核酸磷脂和核酸;激活补体激活补体,抗凝。抗凝。n临床意义临床意义:n第一个认定得急性时相反应蛋白第一个认定得急性时相反应蛋白,是急性时相反应得一个是急性时相反应得一个敏感指标敏感指标,在、创伤、感染、外科手术、肿瘤浸润时在、创伤、感染、外科手术、肿瘤浸润时含量迅速升高含量迅速升高,达到正常得达到正常得2000倍。倍。nCRPCRP是非特异性指标是非特异性指标,需结合临床病史。需结合临床病史。n参考值参考值:8 8、0mg/L 0mg/L(血浆血浆)49n急性时相反应蛋白分类急性时相反应蛋白分类:升高升高:其他种蛋白质。其他种蛋白质。降低降低:前白蛋白、白蛋白、转铁蛋白前白蛋白、白蛋白、转铁蛋白50第二节第二节 体液蛋白质测定体液蛋白质测定总蛋白测定总蛋白测定个别蛋白质得测定个别蛋白质得测定蛋白分离测定技术蛋白分离测定技术p发展趋势发展趋势:p测定体液标本测定体液标本:血浆血浆:普遍普遍尿液尿液,脑脊液和胸腹水等脑脊液和胸腹水等:有选择性得组织病变检查有选择性得组织病变检查51免疫化学法特异定量个别蛋白质免疫化学法特异定量个别蛋白质p体液蛋白质得测定方法概括体液蛋白质得测定方法概括:常规常规:免疫浊度法、免疫扩散法免疫浊度法、免疫扩散法,免疫电泳法免疫电泳法,微量微量:放射免疫测定放射免疫测定(RIARIA),),酶免疫测定法酶免疫测定法(ELA/ELISAELA/ELISA)52电泳测定电泳测定:定量化学测定定量化学测定TPr,Alb电泳电泳 组成图谱组成图谱 半定量半定量 定量定量染料结合法染料结合法,UVUV法法,折光法等折光法等53一、血清总蛋白测定一、血清总蛋白测定n假设假设:、纯多肽链纯多肽链,含氮量平均为含氮量平均为16%16%、各种蛋白质与化学试剂反应性一致、各种蛋白质与化学试剂反应性一致,仅为相对定量仅为相对定量54n测定依据测定依据:蛋白质测定一般利用蛋白质以下得结构或性质蛋白质测定一般利用蛋白质以下得结构或性质1 1、元素组成测定、元素组成测定:含含N N稳定稳定;2 2、重复得肽链结构、重复得肽链结构:具有多个肽键具有多个肽键;3 3、酪氨酸和色氨酸与、酪氨酸和色氨酸与Folin-Folin-酚试剂反应显色或酚试剂反应显色或UV UV 吸收吸收;4 4、与色素结合得能力、与色素结合得能力:与染料以离子键或共价键连接与染料以离子键或共价键连接;5 5、沉淀后借浊度测定、沉淀后借浊度测定:光度计测定光度计测定;6 6、光折射测定、光折射测定:折射仪测定。折射仪测定。55n方法方法:1 1、凯氏定氮法参考方法凯氏定氮法参考方法2 2、双缩脲法双缩脲法(推荐推荐)3 3、酚试剂法酚试剂法4 4、散射比浊法散射比浊法5 5、染料结合法染料结合法6 6、UV UV 法法、折光测定法折光测定法561、凯氏定氮法参考标准方法凯氏定氮法参考标准方法(0、05mg N 0、3g pro)消化用浓硫酸将蛋白质消化为硫酸铵消化用浓硫酸将蛋白质消化为硫酸铵;(;(耗时耗时)蒸馏用碱性溶液碱化消化液并蒸馏挥发蒸馏用碱性溶液碱化消化液并蒸馏挥发;吸收用酸性溶液吸收用酸性溶液(硼酸硼酸)吸收气态氨吸收气态氨(使使HH+)滴定用已标定得无机酸滴滴定用已标定得无机酸滴(使使H+恢复恢复),计算总氮量计算总氮量定蛋白定蛋白(总氮量总氮量-非蛋白氮非蛋白氮)66、25=25=蛋白含量蛋白含量纳氏试剂纳氏试剂:碘化汞和碘化钾得碱性溶液与氨反应生成淡黄棕色胶态化合物碘化汞和碘化钾得碱性溶液与氨反应生成淡黄棕色胶态化合物,其色度与氨氮含其色度与氨氮含 量成正比。量成正比。n原理原理:57n评价评价:优点优点:准确度高准确度高,精密度高精密度高,灵敏度高灵敏度高,是公认得参考方是公认得参考方法。法。缺点缺点:操作复杂操作复杂,费时费时,不适不适合常规检测合常规检测,血清各蛋白含血清各蛋白含氮量会有所变化尤其是疾病氮量会有所变化尤其是疾病时。时。n应用应用:标准蛋白得标定及标准蛋白得标定及校正其它常规方法校正其它常规方法582、双缩脲法双缩脲法n原理原理:蛋白质中得肽键蛋白质中得肽键(-CONH-CONH-)在碱性溶液中能与在碱性溶液中能与Cu2+作用而产生紫红色络合物作用而产生紫红色络合物,其颜色得深浅与蛋白质得浓度成正比其颜色得深浅与蛋白质得浓度成正比,而与蛋白质得分子量及氨基酸成分无关。而与蛋白质得分子量及氨基酸成分无关。条件条件:至少含两个肽键至少含两个肽键(-CONH-CONH-)基团才能和基团才能和CuCu2+2+形成络合物形成络合物,氨基酸及二肽无反氨基酸及二肽无反 应应,三肽以上才能反应。三肽以上才能反应。双缩脲生成 加热加热NH322H180022222N 端端C 端端59n评价评价:优点优点:简便简便,准确准确,重复性好重复性好,10g-120g/L10g-120g/L线性好线性好,特异性特异性与精密度好与精密度好,批内批内CV%CV%2%2%,显色稳定。显色稳定。缺点缺点:灵敏度较差灵敏度较差,对蛋白质含量低得体液标本不适合。对蛋白质含量低得体液标本不适合。n应用应用:常规推荐方法。手工或上机使用。常规推荐方法。手工或上机使用。603 3、酚试剂法酚试剂法n原理原理:蛋白质分子中得酪氨酸残基和色氨酸残基能够和蛋白质分子中得酪氨酸残基和色氨酸残基能够和酚试剂酚试剂中得磷钨酸中得磷钨酸-磷钼酸反应生成蓝色化合物磷钼酸反应生成蓝色化合物,LowryLowry改良法改良法:在在酚试剂中加入酚试剂中加入CuCu2+2+(75%75%呈色呈色),),提高了呈色提高了呈色得灵敏度得灵敏度,为为双缩脲法得双缩脲法得100100倍左右。倍左右。61n评价及应用评价及应用:优点优点:操作简单操作简单,改良法灵敏度高改良法灵敏度高(10g-6010g-60g),适合测定适合测定蛋白含量少得标本。蛋白含量少得标本。缺点缺点:各种蛋白质各种蛋白质酪氨酸和色氨酸酪氨酸和色氨酸比例不同比例不同,只适合测定单只适合测定单一蛋白质。受一些药物干扰。一蛋白质。受一些药物干扰。624 4、比浊法比浊法n原理原理:n评价及应用评价及应用:优点优点:简便不需特殊仪器。简便不需特殊仪器。缺点缺点:浊度形成得干扰因素多浊度形成得干扰因素多(加试剂方法加试剂方法,反应温度反应温度,蛋白絮蛋白絮状沉淀等状沉淀等)某些酸类某些酸类(磺基水杨酸等磺基水杨酸等)和血清蛋白质结合产生沉淀和血清蛋白质结合产生沉淀,测其浊度测其浊度,与标准对比与标准对比,可求蛋白含量。可求蛋白含量。635 5、染料结合法染料结合法 在酸性环境下在酸性环境下,带正电得蛋白质带正电得蛋白质(-NH3+)与染料得阴离子产与染料得阴离子产生颜色反应生颜色反应,使染料得吸收峰改变使染料得吸收峰改变,可既而用分光光度法比色测可既而用分光光度法比色测定。定。n原理原理:常用染料常用染料:氨基黑氨基黑,考马斯亮蓝等考马斯亮蓝等n评价及应用评价及应用:优点优点:操作简便操作简便,重复性好重复性好,灵敏度高灵敏度高,且干扰因素少。且干扰因素少。缺点缺点:特异性不高特异性不高;不同蛋白质和染料得结合力不一致不同蛋白质和染料得结合力不一致,标准物不易确定。标准物不易确定。646 6、紫外分光光度法紫外分光光度法 蛋白质分子中得酪氨酸和色氨酸等芳香族氨基酸可使蛋蛋白质分子中得酪氨酸和色氨酸等芳香族氨基酸可使蛋白质溶液在白质溶液在280nm280nm处有一吸收峰。可用于测定蛋白质但需避免处有一吸收峰。可用于测定蛋白质但需避免核酸干扰。核酸干扰。(1 1)Lowry-Kalcker Lowry-Kalcker 公式公式 蛋白质浓度蛋白质浓度(mg/mlmg/ml)=1=1、45 A 45 A 280280-0-0、74 A 74 A 260260 (2 2)Warburg-Christian Warburg-Christian 公式公式 蛋白质浓度蛋白质浓度(mg/mlmg/ml)=1=1、55 A 55 A 280280-0-0、76 A 76 A 260260 n原理原理:65n评价及应用评价及应用:优点优点:敏感而简便敏感而简便,可保留蛋白生物活性可保留蛋白生物活性,常用与较纯得酶和常用与较纯得酶和免疫球蛋白。需免疫球蛋白。需紫外分光光度计及石英比色皿。紫外分光光度计及石英比色皿。缺点缺点:各种蛋白质中芳香族氨基酸含量和比例不同各种蛋白质中芳香族氨基酸含量和比例不同;在在280nm280nm测定易受游离色测定易受游离色aaaa和酪和酪aaaa以及尿酸和胆红素得干扰以及尿酸和胆红素得干扰;导致准确导致准确性和特异性受影响。性和特异性受影响。措施措施:在在220-225nm220-225nm波长区域波长区域,用用0 0、15mol/l15mol/l得得NaClNaCl稀释稀释1000-1000-20002000倍可消除干扰。倍可消除干扰。667 7、折光测定法折光测定法 溶解在溶液中得固体可增加溶液得光折射率溶解在溶液中得固体可增加溶液得光折射率,在固定在固定波长和温度下波长和温度下,光折射率和血清中蛋白质含量成正比。光折射率和血清中蛋白质含量成正比。n原理原理:n评价及应用评价及应用:优点优点:简便、快速简便、快速,易掌握易掌握,重复性较好重复性较好,适合临床急诊适合临床急诊,体检筛查和胸腹体检筛查和胸腹水蛋白质测定。水蛋白质测定。缺点缺点:准确性较差准确性较差,易受高血脂症易受高血脂症,高胆红素血症以及溶血等因素影响高胆红素血症以及溶血等因素影响,会由于会由于A/GA/G比值变化而产生误差。比值变化而产生误差。67p参考范围参考范围:成人成人606080g/L80g/Lp临床意义临床意义:总蛋白升高总蛋白升高:总蛋白降低总蛋白降低:丢失过多丢失过多 消耗增加消耗增加 白蛋白合成减少白蛋白合成减少 水肿水肿真性升高真性升高:MMMM、巨球蛋白血症、自身免疫性疾病等、巨球蛋白血症、自身免疫性疾病等假性升高假性升高:机体明显失水机体明显失水,总蛋白含量相对升高总蛋白含量相对升高,A/GA/G几乎不变几乎不变68二、血清白蛋白测定二、血清白蛋白测定p方法方法:1 1、染料结合法染料结合法(推荐推荐)2 2、盐析法盐析法3 3、电泳法电泳法4 4、免疫化学法免疫化学法691 1、染料结合法染料结合法(推荐推荐)n原理原理:血清血清ALBALB可通过离子键或疏水键与包括染料在内得各种可通过离子键或疏水键与包括染料在内得各种有机离子结合有机离子结合,而而GLBGLB很少结合外源性染料很少结合外源性染料,可在不分离可在不分离ALBALB与与GLBGLB得情况下直接测定得情况下直接测定ALBALB。染料染料BCGBCGBCPBCP优点优点 缺点缺点 易于和非人源性白蛋白结合易于和非人源性白蛋白结合 与白蛋白结合特异性较差与白蛋白结合特异性较差 与与非人源性白蛋白结合力弱非人源性白蛋白结合力弱 与白蛋白结合特异性好与白蛋白结合特异性好 在在3030秒内测可提高特异性秒内测可提高特异性70n应用及评价应用及评价:严格控制反应时间得严格控制反应时间得BCGBCG法既适合手工也适合自动法既适合手工也适合自动化分析。临床上推荐使用。化分析。临床上推荐使用。71n原理原理:盐析是由于加入大量得中性盐破坏了蛋白质得水化膜、中和其所带得电盐析是由于加入大量得中性盐破坏了蛋白质得水化膜、中和其所带得电荷从而使蛋白质分子聚集而沉淀析出。荷从而使蛋白质分子聚集而沉淀析出。各种蛋白质得亲水性和带电荷不同各种蛋白质得亲水性和带电荷不同,故盐析时所需盐浓度与故盐析时所需盐浓度与pHpH不同。不同。GLBGLB在生理在生理pHpH下带电荷及水化膜比下带电荷及水化膜比ALBALB少少,可被较低浓度中性盐沉淀。可被较低浓度中性盐沉淀。2 2、盐析法盐析法中性盐中性盐:硫酸铵、硫酸钠等硫酸铵、硫酸钠等72n应用及评价应用及评价:操作繁琐操作繁琐,不宜自动化不宜自动化,基本不用基本不用733 3、电泳法电泳法n操作操作:醋纤膜电泳醋纤膜电泳染色染色晾干晾干透明透明光密度仪扫描光密度仪扫描洗脱洗脱比色比色染色染色分离分离测得蛋白组分百分比测得蛋白组分百分比计算得出各种蛋白质含量计算得出各种蛋白质含量半定量半定量定量定量74n评价及应用评价及应用:优点优点:电泳特异性好电泳特异性好,可了解血清蛋白质全貌、可了解血清蛋白质全貌、缺点缺点:电泳技术繁琐电泳技术繁琐,不易自动化不易自动化;白蛋白与染料白蛋白与染料亲和力高会导致结果偏高亲和力高会导致结果偏高754 4、免疫化学法免疫化学法n原理及特点原理及特点:n应用应用:特异性高特异性高,但成本较高但成本较高,费时费时,生化检验用得不多生化检验用得不多、76p参考范围参考范围:成人成人353555g/L55g/L、p临床意义临床意义:白蛋白升高白蛋白升高:白蛋白降低白蛋白降低:丢失过多丢失过多 消耗增加消耗增加 白蛋白合成减少白蛋白合成减少 水肿水肿 先天性先天性ALBALB缺乏病缺乏病真性升高真性升高:未见未见假性升高假性升高:机体明显失水机体明显失水,或治疗输入过多白蛋白或治疗输入过多白蛋白77三、血清球蛋白测定三、血清球蛋白测定三、血清球蛋白测定三、血清球蛋白测定p方法方法:间接法间接法:TP-ALB=GLB:TP-ALB=GLB直接法直接法:乙醛酸比色法乙醛酸比色法(GLB(GLB中得色氨酸远大于中得色氨酸远大于ALBALB中得色氨酸含量中得色氨酸含量)色氨酸色氨酸+乙醛酸乙醛酸 紫色化合物紫色化合物H H+Hopkins-ColeHopkins-Cole反应反应:p参考范围参考范围:成人成人202030g/L30g/L、A/G A/G:1 1、5 52 2、5 5A/G1,A/G1,比例倒置比例倒置,清蛋白降低亦可因球蛋白增高引起清蛋白降低亦可因球蛋白增高引起,见于见于严重肝功能损伤及严重肝功能损伤及M M蛋白血症蛋白血症,如慢性重度以上持续性肝炎、如慢性重度以上持续性肝炎、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症等。症等。78p临床意义临床意义:球蛋白升高球蛋白升高:球蛋白降低球蛋白降低:合成减少、低或无合成减少、低或无-球蛋白血症球蛋白血症 真性升高真性升高(常见常见):):自身免疫性疾病、感染反自身免疫性疾病、感染反应、应、MMMM、巨球蛋白血症。、巨球蛋白血症。假性升高假性升高(少见少见):):机体明显失水。机体明显失水。79