实验1：蛋白质的两性电离和等电点.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实 验 一,蛋白质的两性电离和等电点,【原理】,【目的】验证蛋白质两性电离的性质,测定酪蛋白,的等电点。,碱负酸正,【原理】,当蛋白质溶液的pHpI时，蛋白质分子带,电,荷；当蛋白质溶液的pHpI时蛋白质分子带,电,荷。,在p,H,值大于或小于pI的溶液中，由于存在电,荷膜的保护，蛋白质分子不易析出。当溶液,pH,等,于pI时，溶液的溶解性,最低,，溶质容易析出。根,据酪蛋白在不同,pH,溶液中的溶解度来观察蛋白质,的两性电离，并测定其等电点。,负,正,【试剂】,1.5g/L酪蛋白乙酸钠溶液,2.0.01%溴甲酚绿（BCG）溶液（指示剂，,pH3.85.4）,3.0.04 mol/L盐酸溶液,4.0.04 mol/L 氢氧化钠溶液,5.1.0 mol/L乙酸溶液,6.0.1 mol/L乙酸溶液,7.0.01mol/L乙酸溶液,【器材】,试管 试管架 毛滴管 记号笔,蓝,黄,pH3.85.4,【实践操作】1.取洁净大试管1支，,按表如下操作,操 作 步 骤,结 果,结 果 分 析,加入5g/L酪蛋白乙酸钠溶液20滴，BCG指示剂,5,滴，混匀后，观察并记录溶液的颜色。,缓慢滴加0.04mol/L盐酸溶液，边滴边摇，直至产生明显的大量沉淀，观察并记录沉淀与溶液颜色的变化。,继续滴入0.04mol/L盐酸溶液，直至沉淀全部溶解，观察并记录沉淀与溶液颜色的变化。,滴入0.04mol/L 氢氧化钠溶液，边滴边摇，使之再度产生明显的颗粒。,继续滴加0.04mol/L 氢氧化钠溶液，直至沉淀溶解，观察并记录溶液颜色变化。,结论：,颜色,滴数,滴数,滴数,颜色,滴数,颜色,颜色,颜色,蓝,黄,pH3.85.4,【实践操作】,2.取3支,小,试管，在,上端标注学号、管号，如下操作，注意混匀,加入物体（,滴,）1 2 3,蒸馏水,16 30 34,0.01mol/L乙酸溶液,6,0.1 mol/L乙酸溶液,10 ,1.0 mol/L乙酸溶液,24 ,5g/L酪蛋白乙酸钠溶液,10 10 10,溶液PH值 3.2 4.7 5.9,立即混匀各管，静置 10分钟，观察各管沉淀情况,【结果与分析】,沉淀情况,结果分析,沉淀结果用“-，+，+，+”表示并记录于表中。,【小测试】,名词解释 1.蛋白质的等电点,2.蛋白质的变性,请填写下表,方法,盐析法,有机溶剂沉淀法,常用试剂,沉淀原理,对蛋白质生物活性的影响,【实践操作】,2.取3支,小,试管，在,上端标注学号、管号，如下操作，注意混匀,加入物体（,滴,）1 2 3,蒸馏水,16 30 34,0.01mol/L乙酸溶液,6,0.1 mol/L乙酸溶液,10 ,1.0 mol/L乙酸溶液,24 ,5g/L酪蛋白乙酸钠溶液,10 10 10,溶液PH值 3.2 4.7 5.9,立即混匀各管，静置 10分钟，观察各管沉淀情况,【结果与分析】,沉淀情况,结果分析,酪蛋白于,PH=4.7时最容易析出，其等电点为4.7。,沉淀结果用“-，+，+，+”表示并记录于表中。,2.加入班氏试剂的作用？,酪蛋白的等电点是4.7。,【思考题】,1.加入班氏试剂的作用？,蛋白质分子中肽链的两个末端，游离的羧基可电离成带负电荷的阴离子，游离的氨基可电离成带正电荷的阳离子，此外多肽链中氨基酸残基的侧链中也有可以电离的酸性和碱性集团。,