单克隆知识.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,多克隆抗体(,Polyclonal antibody),一.概念,给动物接种抗原所获得的免疫血清或抗血清是多种抗体的混合物,它是由多种抗原决定簇刺激多株,B,细胞增殖分化所产生的,称为多克隆抗体.,二.多克隆抗体的应用,免疫学检测,被动免疫治疗和紧急预防,三.存在问题,特异性差,用于免疫学检测容易出现交叉反应,单克隆抗体(,Monoclonal antibody,McAb),一.概念,:,通过,B,细胞杂交瘤技术,获得特异性针对某一种抗原决定簇的细胞克隆，产生均一性的抗体.,二.,B,细胞杂交瘤的类型,小鼠-小鼠,大鼠-大鼠,小鼠-人,人-人,3 杂交瘤细胞的选择性培养,DNA,合成的途径,：,糖+氨基酸,氨基喋呤,(,Aminopterin,A),TK,核苷酸,DNA,胸腺嘧啶核苷,TMP,(,Thymidine,T),核苷酸前体,次黄嘌呤,HGPRT,IMP,(,Hypoxanthine,H),融合后细胞在,HAT,培养基中存活情况,脾细胞（,HGPRT,+,TK,+,不能长期生长）,骨髓瘤细胞（,HGPRT,-,TK,-,，,不能生长）,杂交瘤细胞（,HGPRT,+,TK,+,，能够生长）,4.杂交瘤细胞的筛选和克隆化,筛选：,免疫荧光,ELISA,等,克隆化：,有限稀释法,单个细胞显微操作法,软琼脂培养法,5.单克隆抗体的生产,体内：,BALB/c,小鼠体内诱发含有单抗的,腹水,体外：无血清培养基悬浮培养等,6.单克隆抗体的纯化,硫酸铵沉淀法,离子交换层析,A,蛋白-,Sepharose,亲和层析,四.单克隆抗体的特性,高度均一性：,纯度很高的均一性抗体,高度专一性：,只对抗原分子上某一抗原决定,簇起反应,大量产生及稳定性：,杂交瘤细胞能在体内外无限繁殖,之传代,五.单克隆抗体在医学上的应用,（一）用作诊断试剂,1.检测淋巴细胞表面分子，区分不同分化,阶段的淋巴细胞，鉴别淋巴细胞。,2.鉴定病原体，准确诊断传染病。,3.用于肿瘤的诊断和分型,4.,激素类单抗用于测定体内激素含量，判,断内分泌的功能状态,（二）用作研究工具,纯化抗原,分析和探查抗原结构,分析抗原决定簇分子的功能,（三）用于疾病的治疗,抗细胞表面分子单抗，用于移植排斥反应的防治,抗细胞因子单抗用于自身免疫性疾病的治疗,抗肿瘤单抗用于肿瘤的导向治疗,单克隆抗体用于免疫治疗存在的问题,单克隆抗体的特异性,由于肿瘤特异性抗原较少，缺乏对肿瘤有严格特异性的单抗，对正常组织有交叉反应,异种抗体反应,鼠源性单抗用于人体，导致异源性超敏反应,基因工程抗体(,Genetic engineering antibody),概念：,根据研究者的意图，采用基因工程方法，在基因水平，对免疫球蛋白基因进行切割、拼接或修饰后导入受体细胞进行表达，产生新型抗体。主要包括 嵌合抗体、单链抗体、人源化抗体、双价抗体和双特异性抗体。,一.嵌合抗体(,chimeric antibody),从杂交瘤细胞分离出功能性可变区基因，与人,Ig,恒定区基因连接，插入适当表达载体，转染宿主细胞，表达人-鼠嵌合抗体。,特点：,减少了鼠源性抗体的免疫原性，同时保留了亲本抗体特异性结合抗原的能力。,二.单链抗体(,single chain antibody),用基因工程方法，将抗体重链和轻链可变区通过一个连接肽连接而成的重组蛋白。,特点：,能保持与抗原结合的性能，分子量小，穿透性强，体内循环半衰期短，免疫原性低。,单链抗体的应用,：,用于肿瘤的导向治疗,肿瘤的影像分布,基因治疗,细胞内抗体：在细胞内表达特异性识别某一基因产物的抗体，可干扰该基因产物的生物活性。,4。研究基因结构与功能的关系,三.人源化抗体(,humanized antibody),1.将小鼠的,CDR,序列移植到人抗体可变区框架中，产生的抗体称为,CDR,移植抗体。,2.将小鼠,Ig,基因敲除，转染人,Ig,基因，在小鼠体内产生人,Ab，,再经杂交瘤技术，产生大量完全人源化抗体,四、双价抗体与双特异性抗体,(,bispecific antibody),许多抗原抗体反应要求双价的抗原结合位点，使抗原分子上的两个表位交联或使两个抗原分子连接。,将识别肿瘤抗原的抗体和 识别细胞毒性免疫效应细胞表面分子的抗体连结在一起，可使效应细胞更容易与肿瘤细胞结合识别，取得杀伤肿瘤细胞的作用。,