动物医学实验流程要求.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二层,第三层,第四层,第五层,*,提 纲,第一节 医学动物实验课题设计的意义、原则及要求,第二节 实验动物选择的基本原则,第三节 影响动物实验效果的因素,第四节 如何控制影响动物实验效果的因素,第五节 试验结果的综合分析,第一节 意义、原则及要求,一、实验设计的意义：,实验设计,（study design）,是科研计划,（protocol),中的关键，影响着课题,（project),的成败。实验设计是实验过程的依据，是实验数据处理的前提，是提高科研质量的重要保证。,例：,目的：某个假设,依据：目的、相关指南或法规、统计学要求,实验材料（受试物、试验系统、仪器与试剂等）、实验方法、影响因素、实验误差、统计学方法等,适当的,实验环境,精确的,仪器设备,可靠的,实验系统,可靠而完整的实验记录,科学的设计和研究方案,准确而可靠的研究结果,合格的,试验材料,客观而完整的总结报告,合理的,设施,正确的,实验操作,四、有关要求：,1、实验动物方面：,种、系名称确切,来源、遗传背景清晰,微生物质量分级清楚,合格证书,饲育单位负责人,体检状况及背景数据,免疫情况,2、动物试验方面：,试验方案应包括：,课题名称及研究目的,试验单位名称及地址,课题负责人和参加试验的人员及承担的工作。,受试物和对照品的名称、批号、理化性质及生物特性。,仪器与试剂,溶媒及其它介质,实验系统及选择理由。,实验动物的种、系、数量、年龄、性别、体重范围、来源和等级、识别方法、饲养管理的环境条件、饲料名称或代号。,剂量设计依据。,给药途径与方法、剂量、频率、用药期限。,检测指标、检测方法及频率,统计学方法,研究计划日程表,第二节 实验动物选择的基本原则,一、实验动物选择的基本原则,相似性,重复性,可靠性,适用性和可控性,易行性和经济性,1.,选用与人体功能、结构、代谢和疾病特征相似的动物。,非人灵长类动物,-,进化程度最高，是最接近与人类的理想动物，如，猴、猩猩。,其他动物,-,虽进化程度低些，但可以达到实验目的，如，犬、猫、猪、鼠等。,二、实验动物选择的具体要求,2.选用解剖、生理特点符合实验目的要求的实验动物、充分利用不同品种品系实验动物存在的某些特殊反应。,发热、解热和热源实验,-,兔；,观察药物对排卵的影响，进行避孕药研究,-,兔、猫；,动脉粥样硬化实验,-,兔、猪；,呕吐实验,-,猫、狗；,变态反应、,Vc,缺乏症研究,-,豚鼠；,同品种不同品系的动物存在有很多特殊的反应，应注意选择应用。,3.根据课题研究目的内容选用相匹配的,标准化,动物,标准化动物系指经遗传学、微生物学、环境及营养控制而繁育的动物。,微生物学、环境及营养的控制才能排除动物因携带影响实验结果的微生物、寄生虫及潜在疾病对结果准确性的影响。,遗传学的控制才能排除实验动物因杂交、遗传学污染而造成个体之间的差异，影响结果的可重复性。,其他特殊要求,第三节,影响动物实验效果的因素,影响动物实验效果的因素,自然因素（动物本身和环境）,动物实验技术因素,实验误差因素,一、动物本身的因素,种属：哺乳动物是其共性，但解剖、生理和对各种因素的反应又各有不同。（,反应性质的不同,）,品系：（,反应强度的不同,）,年龄和体重：解剖、生理和反应性可随年龄不同有明显的变化。,性别,:,敏感性不同,生理状态：怀孕、哺乳、体温异常,健康状况：,潜在的感染：,二、环境因素和营养因素,微气候,温度,湿度,气流,风速,换气,光照,噪声,动物,因素,理化因素,臭气,二氧化碳,粉尘,噪声,照度,消毒剂,有毒物质,生物因素,人为因素：设施、饲养、管理,1、环境因素,微气候因素,温度：,20-25.,湿度：与体热的调节有关，,40-70%,气流及风速：与体热的散发有关,通风和换气：提供新鲜空气。,10-20,次,/,小时,理化因素,气体污染：氨、硫化氢、二氧化碳,空气洁净度：,SPF,级为,10000,级,光照：可影响生理和行为活动，一般为,150-300LUX,，采用明、暗交替形式。,噪音：,85dB,可引起啮齿动物嗜酸性细胞减少、肾上腺重量增加、生育力减退等。（,60dB,以下）,清毒剂,有毒物质,动物实验设施环境指标（静态）,居住因素：,笼具：考虑动物的福利要求。,垫料：无毒,饮水,生物因素：,微生物：,动物饲养密度：过大造成温度升高引起的相互刺激可影响试验结果，如受试药物的毒性可增加,5,倍。,2、营养因素,蛋白质,脂肪,碳水化合物,粗纤维,矿物质,维生素,水,三、动物实验技术因素,动物选择（种属及数量）,实验季节,昼夜变化（体温、血糖、基础代谢率、内分泌），如,0.4ml/kg 25%,乙醇腹腔注射给予小鼠，,12,时给药的死亡率为,12%,，,20,时的为,60%,。,麻醉深度（过深可致深度抑制，过浅会引起强烈疼痛刺激）,手术技巧,减少刺激,减少受伤,减少出血,办法：,了解动物的特征，组织、器官的位置，神经、血管的走行特点等,实验药物（途径、制剂、浓度、给药量）,随机分组,对照,空白对照,实验对照,阳性对照,自身对照,组间对照,历史对照,重复与肯定,四、实验误差,人员素质,质量监督,实验设计,实验记录,环境控制,实验仪器,影响动物实验效果的各种因素的关系,可用公式表示：,R（A+B+C）,D+E,R：动物实验结果,A：动物种的反应,B：动物品、系的反应,C：动物个体的反应,D：环境与实验处理因素,E：实验误差,第四节 影响因素的控制,1、强化管理，加强从业人员的培训，提高职业责任心和业务能力（动物饲养、环境控制和动物实验技能等）：,减少人为误差,稳定环境因素,提高动物本身因素,动物管理和使用委员会,（Institutional Animal Care and Use Commission.IACUC）,职能：,监督和评定研究机构有关动物的计划、操作程序和设施条件，以保证符合相关的法律和法规要求。,成员：,包括具有动物研究经验的科技人员,(,动物中心、基础医学院、药学院、公卫学院、生科院、医院,),、兽医、代表有关动物福利方面的公众利益和生物伦理的非科技人员。,IACUC,对动物管理和使用方案审核的内容,申请使用动物的理由与目的,对申请的动物种类和数量阐明理由，对申请的动物数量应尽可能按统计学方法阐述,使用替代方法的可靠性,参与实际操作的从业人员有足够的训练和经验,特殊的饲养管理条件,适当的镇静、镇痛和麻醉措施,实验项目不必要的重复,重大手术操作的实施,意外事件的判断原则和处理方式,手术后的护理,对动物实施安乐死或处置的方法,从业人员工作环境的安全,2、保障动物饲养环境和营养符合相应的要求。,严格按照国家有关标准，结合具体实验要求，控制微气候、理化、微生物、居住、营养等因素，并准确、及时地作好记录。,3.制定相应的管理制度和标准操作规程（SOP）并认真实施。,是保证取得满意结果的关键。,SOP,包括了与实验动物和动物实验相关的所有操作,对每一操作均应作准确、及时的记录,W,ho,w,hen,w,hat,w,here,屏障环境动物实验室建设的意义,屏障环境动物实验室的管理责任,屏障环境动物实验室工作人员职责,屏障环境动物实验室人员进出的标准操作规程,屏障环境动物实验室物品进出的标准操作规程,屏障环境动物实验室动物进出的标准操作规程,使用屏障环境动物实验室的标准操作规程,屏障环境动物实验室实验动物购买的标准操作规程,屏障环境动物实验室实验动物接收和检疫的标准操作规程,屏障环境动物实验室实验动物饲料、饮水、垫料管理的标准操作规程,屏障环境动物实验室实验动物抓取和保定的标准操作规程,屏障环境动物实验室实验动物逃脱处理的标准操作规程,屏障环境动物实验室实验动物死亡和伤病处理的标准操作规程,高压蒸汽灭菌器使用与维护的标准操作规程,屏障环境动物实验室传递窗使用与维护的标准操作规程,屏障环境动物实验室渡槽使用与维护的标准操作规程,SPF动物室标准操作规程,屏障环境动物实验室内喷雾消毒器使用与维护的标准操作规程,屏障环境动物室照明及紫外线设备使用与维护的标准操作规程,屏障环境动物实验室消毒灭菌方法的标准操作规程,屏障环境动物实验室日常管理的标准操作规程,屏障系统日常卫生与消毒的标准操作规程,屏障环境动物实验室空调净化系统使用与维护的标准操作规程,屏障环境动物实验室净化的标准操作规程,屏障环境动物实验室动物实验室内环境监控的标准操作规程,屏障环境动物实验室实验动物笼子标记的标准操作规程,屏障环境动物实验室纯水系统使用的标准操作规程,屏障系统动物实验室实验动物尸体和废物处理的标准操作规程,SPF动物室标准操作规程,4、科学的实验设计,5、有效的质量保证体系。,第五节 试验结果的综合分析,分析目的,各组间的数据差异是否有统计学意义。,差异的生物学意义与统计学意义的关系：,没有统计学意义不等于没有生物学意义；有统计学意义也不等于有生物学意义；,分析原则,综合分析，注意系统性和关联性。,分析步骤,分析计数和计量资料，数据属于正态分布，用t检验或方差分析；数据是非正态分布，应用非参数统计分析Ridit或秩和检验（如半定量的计分数据）,具体分析方法（计数和计量资料）,统计学家：,往往强调,P,值，不考虑实际情况；,临床医生：,更多考虑临床的实际意义；,动物实验研究者：,应将二者结合起来考虑，才是客观、可信、可靠的结论。,分析受试动物流行病学的背景资料,动物饲养条件、实验人员的责任心等等，有必要结合参考；,考虑文献资料和所在实验室正常值范围,不同时间点检测数据的波动情况；自己实验室的,(data background),正常范围值；,注意别将动物结果不加分析地外推到人,药品动物试验毒性与临床毒性一致性的国际研究,动物毒性试验与人临床毒性反应的阳性一致率为,70%,非啮齿类动物单独预测的阳性一致率为,63%,啮齿类动物为,43%,结论表述的科学性,可以认为。，,本试验条件下所得的结果提示。，,在本试验条件下未见。,The results obtained in this study indicated that,There was no evidence of a consistent inter-group different,It is consider that these findings are of doubtful toxicological significant.,No adverse reactions were observed in.,试验报告应包括：,试验题目,试验单位名称和地址,试验起止日期,试验的管理,受试物和对照品的名称、批号、含量、组分以及其它。,受试物和对照品在给药条件下的稳定性。,溶媒及其它介质,仪器与试剂,实验动物的种、系、年龄、性别、体重范围、来源、动物合格证号,动物接收日期、饲养条件（环境、饲料、饮水、垫料）、动物使用许可证号。,剂量设计依据。,给药途径与方法、剂量、频率、用药期限。,各种指标检测的频率和方法。,分析数据所用的统计方法。,研究结果、讨论和摘要。,影响研究可靠性和造成研究工作偏离试验方案的异常情况。,