医学细胞生物学实验.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,【,实验目的,】,了解普通光学显微镜的构造及原理，熟练掌握其操作方法；,掌握光镜下多种细胞的形态和结构特征,【,实验原理,】,显微镜种类：,显微镜的组成系统：光学、机械、电子。,普通光镜的光学系统：物镜、目镜、聚光器、光阑等。,普通光镜的机械系统：镜筒、镜臂、物镜转换器、调焦螺旋（粗调和细调）、载物台、镜座等,动物各种不同组织的细胞具有不同的形态大小等特征,【,实验步骤,】,B,：操作练习：,1,）,血细胞涂片的观察：观察血细胞的组成,2,）不同细胞的形态观察：分别观察,肠上皮细胞,、,骨骼肌细胞,、,肝细胞,切片和,神经细胞,等，注意比较鉴别细胞的形态结构、核形态数量和位置等特征。,红细胞,淡红色，无核的圆形细胞，双凹形，边缘部分染色较深，中心较浅，直径,7-8,微米,颗粒白细胞,嗜中性颗粒白细胞；嗜酸性颗粒白细胞；嗜碱性颗粒白细胞,无颗粒白细胞,淋巴细胞；单核细胞,血小板,【,作业,】,绘图：各种细胞的形态结构，并标示出细胞的各部分,实验报告要求：,实验名称：,实验目的：,实验原理：,实验步骤：,实验结果和分析：,实验二 线粒体的超活染色和细胞显微结构的观察,【,实验目的,】,了解光镜下细胞器的形态和分布,掌握超活染色法制作光镜标本的基本方法,【,实验原理,】,活体染色是能,使活的细胞或组织着色且无毒害的一种染色方法,。可用于研究生活状态下的细胞形态结构和生理或病理变化。,活体染色分为体内活染和体外活染（超活染色）。,活体染料被特异性地固定和堆积在细胞内某种细胞器上而显色。,詹纳斯绿,B,是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色。其原理是由于线粒体内细胞色素氧化酶系的作用，使,JGB,保持氧化状态，呈亮绿色；而周围的细胞质中染料被还原为无色的色基。,【,实验步骤,】,线粒体的超活染色与观察,用牙签刮取口腔颊部粘膜的上皮细胞，在洁净的载玻片上与,1d JGB,染液混匀，染色,15min,以上。,盖上盖玻片，光镜下观察线粒体的形态和分布。,B.,线粒体标本的观察,小鼠肝脏切片,C.,高尔基复合体标本的观察,兔脊神经节切片,【,作业,】,绘图：人口腔上皮细胞（显示线粒体）,小鼠肝细胞（显示线粒体）,兔脊神经节细胞（显示高尔基体）,光镜下高尔基复合体,实验三 细胞内核酸的定位和细胞计数,【,实验目的,】,掌握细胞化学技术定位细胞组分的一般方法；,掌握细胞内核酸的分布特点；,掌握活细胞计数的方法。,【,实验原理,】,A.,细胞化学染色与,DNA,和,RNA,的定位,核酸分为,DNA,和,RNA,，呈酸性,可与碱性染料反应而显色和定位。由于两类核酸分子聚合程度不同，对不同的碱性染料亲和力不同，甲基绿,-,哌洛宁染料的两种组分分别对,DNA,和,RNA,有高亲和力，并分别将二者染成蓝绿色和红色。,【,实验原理,】,B.,细胞计数,血细胞计数板包括,2,个计数室，每个计数室有,9,个大格，每大格的体积为,0.1mm,3,，计数,4,大格内（,4,个角）的细胞数，根据每大格的体积和细胞悬液的稀释倍数即可算出细胞密度。,【,实验步骤,】,A.DNA,和,RNA,的定位,制备蛙血涂片,1,张，晾干。,固定：,70,乙醇固定,5min,。,染色：滴,1d,甲基绿,-,哌洛宁染液染色,5-10min,，水冲洗后在纯丙酮中分化处理,2-3s,。,观察绘图,【,实验步骤,】,B.,血细胞计数,制备蛙血细胞悬液，稀释,400-600,熟悉血细胞计数板，找到计数室和计数区域,盖玻片盖在计数板槽上，吸取,1d,血细胞悬液滴在盖玻片外侧边缘，使其渗入计数室,10,物镜下计数（四角的,4,大格）,细胞密度换算：,细胞数,/ml=4,大格细胞数,/4 10000,稀释倍数,【,作业,】,绘图：核酸的细胞内定位,细胞计数结果和密度换算,