医学遗传学课(诊断)8.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,遗传病的诊断,是一项复杂的工作，需要各学科的密切配合,常规诊断：,即通过对病人的病史、症状、体征和,实验室、影像学等检查建立初步诊断。,特殊诊断：,利用系谱分析、染色体和染色质检查、,基因分析、特殊酶和蛋白质生化分析等检查进行诊断。,临床诊断,症状前诊断,出生前诊断,一、病史、症状和体征,病史采集：遵循准确、详细的原则,家族史,婚姻史,生育史,临床诊断,系统、完整,三代以上各个成员的资料,死者的死因调查及核查,近亲婚配、死胎、流产和新生儿死亡等,系谱分析,去伪存真,患者及家属提供资料,遗传咨询医师核实资料,新的基因突变,适合度低的显性遗传病,适合度低的,XR,遗传病,两个DMD家系,DMD家系1,DMD家系2,系谱分析,孟德尔式遗传病,AD,遗传病,外显率：不完全外显、延迟显性,表现度：不规则显性,性别影响：从性显性、限性显性,基因多效性,系谱分析,孟德尔式遗传病,AR,遗传病,遗传异质性,系谱分析,孟德尔式遗传病,X,连锁遗传病,Lyon,化,系谱分析,非,孟德尔式遗传病,线粒体遗传病,母系遗传,晚发、进行性疾病,系谱分析,多基因病,非,孟德尔式遗传病,出生缺陷,慢性晚发性疾病,家族聚集性,系谱分析,遗传印记,特殊遗传方式,来自双亲的同一基因或染色体区域的表达不是等同的，这些等位基因在传递上符合孟德尔遗传规律，但在表达方面受传递的双亲性别影响。,系谱分析,动态突变,特殊遗传方式,三、细胞遗传学检查,即,染色体检查,或称,核型分析,智能发育不全、生长迟缓或伴有其他先天畸形者,夫妇中有染色体异常，如平衡易位、嵌合体等,家族中已发现染色体异常或先天畸形个体,多发性流产的妇女及其丈夫,原发闭经和女性不育症者,无精子症和男性不育症者,有两性内外生殖器畸形者,疑为先天愚型的患儿及其父母,原因不明的智力低下伴有大耳、大睾丸和多动症者,35,岁以上的高龄孕妇,染色体检查的指征,1、性染色质检查,X,性染色质检查,Y,性染色质检查,2、染色体显带技术,3、染色体荧光原位杂交(FISH),四、生物化学检查,苯丙酮尿症,PKU,酶活性检查,PAH,肝脏,血液滤片法,Guthrie test,FeCl,3,显色反应,苯丙酮酸,绿色,Guthrie test,上海：19811987年对284,396名新生儿进行PKU筛查，查出PKU患儿15名，高苯丙氨酸血症4名。,五、基因诊断,利用分子遗传学技术在DNA或RNA水平上对某一基因进行突变分析，从而对特定的病症进行诊断,特点：,直接对基因诊断,高特异性、灵敏性,早期诊断性,应用的广泛性,（一）核酸分子杂交,斑点杂交,直接将待测DNA或RNA样品固定于小孔径硝酸纤维素膜或尼龙膜上，再与已标记的探针杂交,Southern,印迹杂交,斑点杂交,（一）核酸分子杂交,最经典和应用最广泛的杂交方法，用于分析DNA,Southern印迹杂交,-,+,Southern,印迹杂交,斑点杂交,Northern,印迹杂交,（一）核酸分子杂交,用于分析mRNA,Southern,印迹杂交,斑点杂交,Northern,印迹杂交,原位,杂交,（一）核酸分子杂交,（二）、聚合酶链式反应(,PCR,),PCR-A,SO,：,PCR-,等位基因特异性寡核苷酸探针杂交,使用只有几十个核苷酸的探针，检测被检DNA中的同源序列。由于探针比较短，当被检DNA序列与探针不完全互补，甚至只要有一个碱基的差异，杂交分子就不能稳定形成，因此该方法的灵敏度非常高，特异性也非常好。,PCR-ASO,ASO斑点杂交,PKU,AR,正常探针,突变探针,（二）、聚合酶链式反应(,PCR,),PCR-A,SO,：,PCR-,等位基因特异性寡核苷酸探针杂交,PCR-,RFLP,：,PCR-,限制性片段长度多态性连锁分析,PCR,利用一对或数对特异性引物，将目标DNA扩增；,酶切,利用某些限制性内切酶消化PCR产物;,电泳,利用琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶分离酶切后的PCR产物，根据电泳图谱判断结果。,PCR-RFLP,RFLP连锁分析,PAH,Sph,11.0 kb,Sph,Sph,9.7 kb,PAH,Sph,11.0 kb,Sph,Sph,7.0 kb,Sph,2.7 kb,正常,突变,RFLP连锁分析,PKU，AR,1 2,1 2,Sph,11.0 Kb,9.7 Kb,7.0 Kb,（二）、聚合酶链式反应,PCR-A,SO,：,PCR-,等位基因特异性寡核苷酸探针杂交,PCR-,RFLP,：,PCR-,限制性片段长度多态性连锁分析,可变数目串联重复序列（,VNTR,）和短串联重复序列（,STR,）多态性分析,STR连锁分析,X R,DXS84,gene,A,B,C,D,E,STR连锁分析,XR,DXS84,gene,A,B,C,D,E,STR连锁分析,A,B,C,D,E,STR连锁分析,A,B,C,D,E,（二）、聚合酶链式反应,PCR-A,SO,：,PCR-,等位基因特异性寡核苷酸探针杂交,PCR-,RFLP,：,PCR-,限制性片段长度多态性连锁分析,可变数目串联重复序列（,VNTR,）和短串联重复序列（,STR,）多态性分析,PCR-,SSCP,：,PCR-,单链构象多态性,当双链DNA变性为两条单链后，各自会在中性条件下形成各自特定的空间构象，因而在电泳时将在不同的位置上出现各自电泳条带。如果DNA序列发生变化，甚至只有一个碱基变化，空间构象也有可能发生变化，电泳条带也随之变化。,PCR-SSCP,1989年，Orita等建立的PCR产物单链DNA凝胶电泳技术。,（二）、聚合酶链式反应,PCR-A,SO,：,PCR-,等位基因特异性寡核苷酸探针杂交,PCR-,RFLP,：,PCR-,限制性片段长度多态性连锁分析,可变数目串联重复序列（,VNTR,）和短串联重复序列（,STR,）多态性分析,PCR-,SSCP,：,PCR-,单链构象多态性,PCR,产物变性梯度凝胶电泳（,DGGE,）,（二）、聚合酶链式反应,PCR-A,SO,：,PCR-,等位基因特异性寡核苷酸探针杂交,PCR-,RFLP,：,PCR-,限制性片段长度多态性连锁分析,可变数目串联重复序列（,VNTR,）和短串联重复序列（,STR,）多态性分析,PCR-,SSCP,：,PCR-,单链构象多态性,逆转录,PCR,（,RT,-PCR,）,PCR,产物变性梯度凝胶电泳（,DGGE,）,（三）、DNA测序,（四）、基因芯片技术,症状前诊断,常染色体显性遗传病的杂合子个体往往发病年龄延迟，可通过,系谱分析,及,DNA检查,作出症状前诊断,出生前诊断,在遗传咨询的基础上，对有高风险的妊娠进行产前诊断，确认正常胎儿则继续妊娠至足月生产，是预防遗传病患儿出生的有效手段。,需产前诊断的对象：,夫妇之一有染色体畸变，特别是平衡易位携带者，或者染色体正常，但出生过染色体异常患儿的夫妇；,35,岁以上的高龄孕妇；,夫妇之一有开放性神经管畸形，或出生过这种畸形患儿的夫妇；,夫妇之一有先天性代谢缺陷，或出生过这种患儿的夫妇；,X,连锁遗传病基因携带者孕妇；,原因不明的习惯性流产的孕妇；,羊水过多的孕妇；,夫妇之一有致畸因素接触史的孕妇；,具有遗传病家族史，又系近亲婚配的孕妇。,虽然具备了上述条件，但如果出现先兆流产、妊娠时间过长、有出血倾向者，则不宜做有创性产前诊断，另外应拒绝仅要求做胎儿性别的检查。,注意：,羊膜腔穿刺,有创性检查,用注射器经腹取羊水,时间：妊娠1020周，最适宜时间1516周,流产率：0.51%,羊膜腔穿刺,有创性检查,绒毛取样,经宫颈或经腹在绒毛区取绒毛作活检,时间：妊娠79周,流产率：1%,羊膜腔穿刺,有创性检查,绒毛取样,脐静脉穿刺,超声检查有异常、羊水培养失败时采用,时间：妊娠1921周,流产率：23%,羊膜腔穿刺,有创性检查,绒毛取样,脐静脉穿刺,胎儿镜检查,无创性检查,母体血清三项筛查,对具有较高妊娠风险的孕妇检测血清,AFP、uE3、HCG,时间：妊娠1520周,神经管缺陷：,AFP,Down综合征：,AFP、uE3,HCG,18三体综合征：,AFP、uE3、HCG,无创性检查,母体血清三项筛查,超声影像检查,无创性检查,母体血清三项筛查,超声影像检查,母体血中的胎儿细胞检测,胚胎植入前诊断（PGD）,胚胎活检技术,PGD,分子生物学方法：,PCR,、,FISH,等,取极体,6,8,个细胞卵裂球期取单个卵裂球细胞,囊胚期取滋养外胚层细胞,