流式细胞术在白血病中的应用.ppt

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,流式细胞术在白血病,/,淋巴瘤分型和监测中的应用,1,世界卫生组织血液肿瘤分类方案（,1999,年）,“,新分类方案的基本原则是：结合形态学、免疫表型、遗传改变和临床特征来鉴定疾病的真实本质”。,“这为世界各国肿瘤学家和病理学家提供了一个全新的与令人兴奋的合作交流新篇章，必将极大促进人们对血液肿瘤的治疗与认识。”（美国临床肿瘤协会，临床肿瘤杂志,17,卷,3835-3849,页，,1999,年）,更重要的是提供了疾病分类与治疗选择和预后判断的较明确关联性，开启了血液肿瘤靶向性治疗和个性化方案的新时代。,2,白血病分子诊断的意义,系统诊断,白血病初发,异常标记,精确诊断,准确预后,指导治疗,科研资料,残留监测,靶向治疗,免疫,/,遗传学靶标,MICM,诊断,3,WHO,血液肿瘤新分类实验技术平台,实施,WHO,血液肿瘤新分类方案高度依赖流式细胞、细胞遗传和分子生物学实验技术平台以及掌握这类实验技能并具有专业知识的人员。,4,5,Investigative Tools for MM diagnosis and Management,(2008 ASH Education Program Book p298),Patient Evaluation,诊断,单克隆蛋白数量和特征,血清蛋白电泳和免疫球蛋白定量,24,小时尿蛋白；总蛋白；本周蛋白,尿和血清免疫固定,血清自由轻链和比例,骨髓检查和骨髓活检,Bone marrow aspiration and biopsy,组化,免疫分型,-,克隆检定，及通过,CD38/CD56/CD19/CD45,抗体组合能从,90,余,例患者正常浆细胞中找到检测残留,MM,细胞,终末器官损害评价,全血细胞计数；生化检查,:,血清肌酐和骨钙测定,预后评估,球蛋白，,betta-2,微球蛋白,LDH,CRP,骨髓细胞遗传学和,FISH t(4;14),t(14;16),del 17p,针对某些特定患者的特殊研究,8,应该使用何种抗体？,所有抗体必须为标准的商业化试剂,没有什么“秘密武器”或者专门特异的抗体,抗体的联合应用能使你从有限的标本中得到最大化的信息量,对正常抗原表达的正确认识能帮助你有效地鉴别疾病状态相关的改变,9,高 分 辨 流 式 细 胞 术 能 够 鉴 别 和 分 类 所 有 骨 髓 细 胞,可 以 对 每 一 个 细 胞 进 行 多 特 征 性 的 检 测,并 对 其 相 应 的 系 列 和 成 熟 的 阶 段 进 行 分 类,至 少 检 测 一 万 个 细 胞，分 辨 率 达 到,0.5%,10,11,CD45/SS,Wood(2004)Methods Cell Biology 75:559-576,12,正常粒系成熟模式,正常,B,系成熟,Wood(2004)Methods Cell Biology 75:559-576,14,表达交叉系列的抗原,非同步抗原共表达：,CD34,与,CD15,、,CD11b,、,CD56,、,CD14,抗原的过度表达：早前,B-ALL,中,CD10,抗原表达缺失：泛,T,抗原,易位抗原表达：,CSF,中,TdT+,淋巴细胞，骨髓中胸腺发育阶段的,T,淋巴细胞,光散射异常：,FSC,和,SSC,白血病相关的免疫表型特点,15,AML-M0,16,AML-M2,17,AML-M3,18,AML-M4,19,AML-M5,20,B-ALL,21,Burkitt,淋巴瘤,/,白血病,成熟,B-ALL,22,MAL T+G,MAL T+B,23,AUL,24,B-CLL/SLL,25,HCL,26,大,B,细胞淋巴瘤,27,MM,28,T-ALL,29,NK-LGL,30,报告,包括,出现或缺乏的异常细胞群,异常免疫表型,相比正常细胞群的抗原强度,增强，减弱，缺失,定量层面的判断,相对于全部,CD45,阳性细胞,(WBCs),出现的其它细胞群,31,32,TCRV,克隆,33,小结,流式细胞术有助于血液系统异常疾病的诊断,更加确定的诊断,排除其他疾病,有助于细分亚型,更准确的原始细胞辨别和定量,有助于预后判断,治疗后监测,快速,34,免疫表型分析与,FAB,分型基于不同的参数对白血病进行分型，两者的结果可一致或不一致；,对有些病例，尤其是髓系白血病亚型，免疫表型分析并非特异；对于复杂的病例，需结合多种检查，如特异性染色体核型分析或融合基因综合判断。,35,MRD,背景,目前由于多种化疗药的联合应用，使多数白血病患者可以获得形态学的完全缓解（,CR,）。,但多数患者不能维持长期缓解，仍有相当多的患者再次复发。复发的主要原因是患者体内存在少量的形态学难以辨认的残存白血病细胞。,如果能够准确检测患者体内残存的白血病状态，可以有的放矢地进行治疗，使患者避免许多不必要的痛苦。,36,MRD,Outline of Leukemic Diagnosis,Morphology:1-5%,Cytogenetics:1-5%,Flow cytometry:0.1-0.01%,RT-PCR:0.01-0.001%,CR,Primary leukemia,OS,Chemotherapies,Auto SCT,Allo SCT,Induction,Leukemic cells,10,12,10,10,10,9,10,8,10,7,10,6,100%1%0.1%0.01 0.001,37,38,Molecular Measurements of Treatment Response,Clinical Application,(2008 ASH Education Program Book p367),Application Action,检测治疗早期的反应佳 加强治疗,检测治疗早期的反应差,无需加强治疗,检测复发加强治疗，准备,HSCT,HSCT,前,MRD,评估 优化,HSCT,的时间,HSCT,后,MRD,评估 调整免疫抑制治疗时间，等,临床试验结束时的,MRD,评估 评价新的抗,ALL,药物或治疗的结果,39,MRD,与预后,当残存白血病细胞,10,-2,，,3,年复发率为,76-94%,10,-3,残存白血病细胞,10,-2,3,年复发率为,37-53%,残存白血病细胞,10,-3,3,年复发率为,8-20%,残存白血病细胞,95%,儿童,ALL,90-95%,成人,ALL,AML,85%,儿童,AML,80-95%,成人,AML,43,报告模板,44,病例一,AML,病例资料：,女，,3,岁，,2009.6,初发,FCM,印象,：在,CD45/SSC,点图上设门分析，原始细胞分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞的,26%,，主要表达,HLA-DR,、,CD13,、,CD15,、,CD33,、,CD34,、,CD38,、,CD117,，（,CD19+2.27%,）。淋巴细胞比例降低。,提示：急性髓系细胞白血病（,AML-M2,可能）。,基因,：,AML1/ETO,阳性。,45,病例一（续,1,）,2009.7,化疗,D33,：,FCM,：可见残留，,CD33+CD19+,细胞约占,0.04%,。,基因,：,AML1/ETO,阳性。,46,2009.9,D70,：,FCM,：未做。,基因,：,AML1/ETO,阴性。,2010.3,D245,：,FCM,：,未见免疫表型明显异常的细胞。,基因,：,AML1/ETO,阴性。,病例一（续,2,）,47,病例二,B-ALL,病例资料：,男，,3,岁，,2007.3,初发,FCM,印象,：在,CD45/SSC,点图上设门分析，,CD45,弱表达分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞的,45%,，表达,HLA-DR,、,CD10,、,CD19,、,CD22,、,CD34,、,CD38,、,Gly-A,、,cCD79a,、,TdT,。提示：急性,B,淋巴细胞白血病（,普通型,B-ALL,）。,基因,：,BCR/ABL,阴性,。,48,2008.11,化疗,第,20,个月,：,FCM,：,未见明显表型异常的残留白血病细胞。（未附图）,基因,：未做。,2009.09,化疗,第,30,个月,：,FCM,：可见残留，,在,CD45dim/-,区域可见约,1.87%,的,CD10+CD19+CD20-,细胞和约,1.55%,的,HLA-DR+CD19+CD34+,细胞，考虑为残留白血病细胞。（见右图）,基因,：未做。,病例二（续,1,）,49,病例二（续,2,）,2010.03,化疗,+DC-CIK,第,36,个月,：,FCM,印象,：,在,CD45/SSC,点图上设门分析，,CD45,阴性略向原始延伸的分布区域可见异常细胞群体，与有核红细胞无分界，共约占有核细胞的,89%,，主要表达,HLA-DR,、,CD10,、,CD15,、,CD19,、,CD20,、,CD22,、,CD34,、,CD38,、,cCD79a,、,TdT,。提示：结合病史，考虑急性,B,淋巴细胞白血病（普通型,B-ALL,）复发。,基因,：,ALL,基因筛查示,TSL/ERG,阳性，其余均阴性。,50,病例三,T-ALL,病例资料：,女，,3,岁，,2008.10,初发,FCM,印象,：在,CD45/SSC,点图上设门分析，原始细胞分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞的,59%,，与淋巴细胞分界不清，表达,HLA-DR,、,CD5,、,CD7,、,CD33,、,CD34,、,CD38,、,cCD3,。,提示：急性,T,淋巴细胞白血病,。,基因,：,E2A,、,MLL,、,TEL,、,BCR,融合基因均阴性,。,51,病例三（续,1,）,2009.05,化疗,第,7,个月,：,FCM,印象,：,存在,CD33+CD5+HLA-DR+,（,0.01%,）,、,CD34+cCD3+,（,0.11%,）,、,CD7+CD117+,（,0.07%,）等免疫表型明显异常的,T,淋巴细胞，考虑为残留白血病细胞。,。,基因,：,未做。,