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,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,微生物基础知识及洁净区微生物控制,1,一,、,微生物简介,二、微生物的分布,三、微生物的作用及危害,四、微生物的形态结构,五、微生物污染及消毒灭菌,六、洁净区微生物的控制,2,一、微生物简介,1,、,微生物的定义,微生物是一类形体微小、结构简单、进化低级、肉眼直接看不见或看不清，必须借助于显微镜才能观察到的微小生物。,2,、微生物的分类,（,1,）根据其进化水平和各种性状上的明显差别，可分为：,原核类,：,仅有原始核质，无核仁或核膜，细胞器很不完善。如细菌、放线菌、支原体、立克次氏体等。,真核类,：,细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁和染色体，细胞器完整。如真菌（酵母菌和霉菌）、原生动物、藻类等。,非细胞类：,体积微小，能通过除菌过滤器。如病毒和朊病毒等。,3,（,2,）按其致病性，可分为,:,病原性微生物：有致病性。,非病原性微生物：无致病性。,3,、微生物的五大特点（共性）,体积小，面积大,：细胞大小以微米和纳米计量，肉眼看不见或看不清，需借助于显微镜观察；,吸收多，转化快,：发酵乳糖的细菌在,1,小时内可以分解其自重量,1000,10000,倍的乳糖；,生长旺，繁殖快,：大多数微生物在几十分钟至几小时内就可以繁殖一代，繁殖速度惊人；,适应强，易变异,：相对于高等生物而言，微生物较容易发生变异，因此其种内的遗传多样性非常丰富；,分布广，种类多,：有高等生物的地方就有微生物的存在，动植物不能生活的极端环境也有微生物存在。,4,二、微生物的分布,1,、微生物在自然界的分布：,土壤：,土壤是微生物的大本营，具有“微生物天然培养基”的称号。土壤中的微生物又可分为以下几类：,细菌：,占土壤微生物总数的,70%90%,。,放线菌,：占土壤中微生物含量的,5%30%,。,霉菌,：主要生活在靠近地面的土壤中，在通气良好的土壤中，霉菌数量很多。,酵母菌,：普通土壤中酵母菌含量很少。,水：,微生物分布、定居的第二个天然环境，,90%,为革兰氏阴性菌，主要有假单胞菌、黄杆菌等。,5,空气,：,空气中的微生物主要来源于带有微生物菌体及孢子的灰尘（这类微生物大多数是腐生性的），还来源于人和动物，它们大多数是通过呼吸道排出的，其中也包含有病原微生物，悬浮在大气中。,2,、微生物在人体中的分布：,在正常人体皮肤、粘膜及外界相通的各种体腔（如口腔、鼻咽腔、肠道和泌尿道）等部位，存在着一定种类和数量的微生物，包括细菌、真菌、螺旋体、支原体等，它们对人体无害，称为人体的正常微生物群落。,能使宿主致病的为致病菌或病原菌，不能造成宿主感染的为非致病菌或非病原菌。有些细菌在正常情况下并不致病，但当在某些条件改变的特殊情况下可以致病，这类菌称为条件致病菌或机会致病菌。,6,人体中的微生物,部位,常见的微生物,皮肤,葡萄球菌、枯草杆菌、类白喉杆菌、大肠杆菌、非致病性抗酸杆菌、真菌等,口腔,葡萄球菌、甲型链球菌、奈氏菌属、类白喉杆菌、乳酸杆菌、梭形杆菌、放线菌、拟杆菌、螺旋体、真菌等,肠道,类杆菌、双歧杆菌、大肠杆菌、厌氧性链球菌、粪链球菌、葡萄球菌、白色念球菌、乳酸杆菌、变形杆菌、破 伤风杆菌、产气荚膜杆菌等,眼结膜,皮表葡萄球菌、结膜干燥杆菌、类白喉杆菌等,胃,正常 一般无菌,鼻咽腔,葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、奈氏菌属、铜绿假单胞菌、大肠杆菌、变形杆菌、真菌、腺病毒,7,三、微生物的作用及危害,1.,微生物的作用,绝大多数微生物对人和动物是有益的。,微生物已广泛应用于农业、食品、医药、酿造、化工、制革、石油等行业，发挥了越来越重要的作用。例如与我们日常生活密切相关的如酸奶、酒类、抗生素、疫苗等。,2.,微生物的危害,微生物中也有一部分能引起人及动、植物发生病害，如人类的许多传染病，如伤寒、结核、病毒性肝炎，鼠疫等。,从药品生产的而言，微生物对药品的原料、生产环境和成品的污染是造成生产失败、成品不合格的重要因素,。,8,四、微生物的形态结构,（一）细菌,细菌是一类细胞细而短、结构简单、细胞壁坚韧，以二分裂方式无性繁殖的原核微生物，分布广泛。,1,、细菌的形态与结构,（,1,）球菌,多数球菌直径在,1,微米左右，外观呈球形或近似球形。常见的有双球菌、链球菌、葡萄球菌等。,（,2,）杆菌,形态多数呈直杆状，也有的菌体稍弯，多数呈分散存在，也有的呈链状排列，分为棒状杆菌、链状杆菌、球杆菌等。,（,3,）螺形菌,菌体弯曲，呈弧形或螺旋形。如幽门螺杆菌。,细菌虽小，仍具有一定的细胞结构和功能。细胞壁、细胞膜、细胞质和核质是细菌的基本结构。,9,大肠菌群,大肠菌群为人和动物肠道中的常居菌，在一定条件下可引起肠道外感染。,生存环境：大肠菌群在自然界中分布广泛，在,15,46,均可生长，最适生长温度为,37,。在水和土壤中大量存在，对自然环境有较强的抵抗力。主要污染肉类、水产品、蔬菜、药品等。,金黄色葡萄球菌,金黄色葡萄球菌在自然界中分布广泛，空气、水、地面、物体表面、人和动物的体表、粘膜等处均有存在。能在,12,45,生长繁殖，最适生长温度为,37,。,食品药品中生长有金黄色葡萄球菌，是食品药品卫生的一种潜在危险，因为金黄色葡萄球菌可以产生肠毒素，食后能引起食品中毒。,10,（二）真菌,真菌是一类有细胞壁，无叶绿素，以寄生或腐生方式生存，少数为单细胞，多数为多细胞，能进行无性或有性繁殖的一类真核细胞型微生物。,真菌包括单细胞与多细胞两类。单细胞真菌呈圆形或卵圆形，称为,酵母菌,；多细胞真菌由菌丝和孢子组成，并交织成团，称丝状菌或,霉菌,。,真菌的最适生长温度为,22,28,，最适的,pH,值为,4,6,。其繁殖能力强，但生长速度比细菌慢。真菌对热的抵抗力较弱，一般加热,60,70 1,小时即被杀死，但对干燥、日光、紫外线和一些化学消毒剂有抵抗力，对,2.5,碘酒、,10,甲醛比较敏感。,11,（三）病毒,病毒属非细胞型微生物，在自然界分布非常广泛，可在人、动物、植物、真菌和细菌中寄居并引起感染。病毒是体积最小、结构最简单的微生物，它仅有一种核酸（,DNA,或,RNA,）作其遗传物质。病毒必须在宿主活细胞内寄生，依靠细胞提供的能量、营养物质及生物大分子合成机制，完成病毒的复制过程。,病毒与人类的关系极为密切，人类的传染病约,75,是由病毒引起的。有些病毒传染性强，可引起世界大流行（如流感、艾滋病等）。,12,葡萄球菌,酵母菌（芽痕）,棒状杆菌,大肠杆菌,弧状菌,链球菌,13,14,菌落形成单位（,cfu,）,菌落就是在固体培养基上（内）以母细胞为中心而形成的一堆肉眼可见的，具有一定形态、构造等特征的子细胞集团，常以,cfu,（菌落形成单位）为计数单位。,15,五、微生物污染及消毒灭菌,1,、药品微生物污染,药品微生物污染：微生物的产生、附着而给药品带来不良影响。药品的微生物污染也称染菌。,污染药品的细菌：常见污染药品的细菌是一些生命力较强的细菌，如葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、枯草杆菌及一些霉菌，抵抗力弱的细菌一般不易造成污染。,药品的微生物污染源：空气、水、厂房与设备、药品生产用原辅料、包装材料、昆虫、生产操作人员等。,16,2,、消毒与灭菌,消毒：,杀死物体上病源微生物的方法，并不一定能杀死细菌的芽胞。消毒所用的试剂称为消毒剂。,灭菌：,杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽孢在内的全部病原微生物和非病原微生物。,抑菌：,抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常用的抑菌剂为各种抗生素，可抑制细菌的繁殖。,防腐：,防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。同一种化学药品在高浓度时为消毒剂，低浓度时常为防腐剂。,无菌：,不存在活的细菌。防止细菌进入人体或其他物品的操作技术，为无菌操作。,17,3,、常用的消毒和灭菌法：,物理灭菌法和化学消毒法,（,1,）物理灭菌方法,热力灭菌法,辐射杀菌法,过滤除菌法,超声波杀菌法,干燥与低温抑菌法,18,热力灭菌法,：,使蛋白质、酶及核酸永久性破环，细胞膜溶解，导致细胞发生不可逆转的死亡。,干热灭菌法：,采用灼烧或干热空气灭菌。常用方式是把待灭菌的物品均匀的放入烘箱，升温至,160,，恒温,1h,。此方法适合玻璃皿，金属用具的灭菌。,湿热灭菌法,：,利用热蒸汽杀死微生物。相同条件下，湿热灭菌效果比干热灭菌效果好。这是因为一方面细胞内蛋白质含水量高，容易变性，另一方面高温水蒸气对蛋白质有高度的穿透力，从而加速蛋白质变性和死亡。,高压蒸汽灭菌,：,湿热灭菌法的一种，是最可靠、最适用、最广泛的灭菌方法。,19,辐射灭菌法：,是采用辐射进行灭菌消毒。包括可见光、红外线、紫外线、,X,射线和,射线等。,紫外线：波长,200,300nm,的紫外线具有杀菌作用，,265266nm,波段杀菌能力最强。但紫外线穿透物质的能力较差，一般只用于空气及物体表面消毒。,电离辐射：高速电子、,X,射线、,射线，适用于不耐热物品的灭菌，常用于药品和医疗用品的灭菌。,过滤除菌法：,用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去,以达到除菌目的。,滤菌器含有微细小孔,0.22,微米,只允许液体或气体通过,而大于孔径的细菌等颗粒不能通过。,适用范围：血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌。,20,化学消毒法法：,一般化学药剂无法杀死所有的微生物，而只能杀死其中的病原微生物，所以是消毒的作用，而不是灭菌的作用。,消毒剂：能迅速杀灭病原微生物的药物。,防腐剂：能抑制或阻止微生物生长繁殖的药物。,消毒剂、防腐剂没有选择性，对一切活细胞都有毒性，不仅能杀死或抑制病原微生物，而且对人体组织细胞也有损伤作用，所以常用于器械，体表、环境的消毒。,常用的化学消毒剂有：碘酒、酒精等。,21,类别,作用机制,常用种类,用途,酚类,蛋白变性，,细胞膜损伤,石炭酸,地面、器具表,面、皮肤消毒,醇类,蛋白变性,75,酒精,皮肤、体温计消毒,氧化剂,氧化、蛋白沉淀,二氧化氯,地面、器具表面、皮肤消毒,过氧乙酸、碘酒,塑料、玻璃器材、皮肤消毒,重金属盐,氧化、蛋白酶变性,红汞、,硫柳汞,皮肤、粘膜、小创伤消毒,表面,活性剂,蛋白变性细胞膜损伤,0.1,新洁尔灭,地面、器具表面、皮肤消毒,化学灭菌法常用消毒剂种类和用途：,22,洁净区的主要污染源,：,空气、制药用水、操作人员、设备，原辅料等，,其中操作人员是主要的污染源,。,六、洁净区微生物的控制,23,药品生产质量管理规范,中明确规定：洁净区内的人员应严格控制，其工作人员应定期进行卫生和微生物学基础知识、洁净区作业等方面的培训和考核；进入洁净区的临时外来人员应进行指导和监督。,防止微生物污染的措施：,了解污染源、杜绝污染途径,洁净区洁净技术的的应用及卫生管理,制药用水的质量控制,进行微生物限度检查，控制药品质量,洁净区防污染必须以尘埃粒子和微生物为环境监控对象。,24,1,、洁净区的污染源：尘埃及细菌污染,来自人的尘粒污染占洁净室污染的,80%,生产工具和设备引起的污染占,15%,洁净区本身和过滤器的缺陷引起的污染占,5%,1.1,操作人员带来的尘埃粒子：,a.,成年人产生的皮屑：,10,万,1000,万粒子,/min,；,b.,操作人员身穿工作服，剧烈活动：可产生,100,万个粒径,0.1 m,的微粒,20,万个粒径,0.5 m,的微粒,c.,交谈,1min,：产生,1.52.0,万粒子,d.,咳嗽,:70,万个粒子；喷嚏：,140,万个粒子,25,1.2,人体微生物分布情况,人体部位,微生物种类名称,检出率（,%,）,皮肤,表皮葡萄球菌,疮疱丙酸杆菌,类白喉棒杆菌,金黄色葡萄球菌,85100,45100,55,525,鼻和鼻咽,表皮葡萄球菌,金黄色葡萄球菌,类白喉棒杆菌,黏膜炎布兰汉氏球菌,流感嗜血杆菌,90,2085,580,12,12,26,口腔,表皮葡萄球菌,-,溶血链球菌,唾液链球菌,消化链球菌,金黄色葡萄球菌,流感嗜血杆菌,产碱韦荣氏球菌,75100,100,100,占优势,常见,25100,100,口咽部,表皮葡萄球菌,类白喉棒杆菌,-,链球菌和非溶血链球菌,金黄色葡萄球菌,3070,5090,2599,3540,27,大肠,脆弱拟杆菌,产黑素拟杆菌,口腔拟杆菌,具核梭杆菌,坏死梭杆菌,肠球菌,大肠杆菌,100,100,100,100,100,100,100,因此，在洁净区内的人员数量应尽量少，应严格按照,SOP,要求操作以减少尘埃粒子和微生物，要有自我约束的概念。,28,2.1,洁净室的设计：,表面应光滑平整易于清洁消毒、无死角、无裂缝，不易藏灰尘；,不同洁净度级别的房间应有足够的压差；,天花板应密封、穿墙的管道与墙体之间应密封；,100,级洁净区内应无地漏、其它区域地漏应液封；,设置更衣室、缓冲间，并安装过滤器，门设计成连锁；,空气流动一般为杂流，上送风下排风，,100,级为层流；,更衣室的洁净度级别应与高级别的房间相同。,2,、洁净区洁净技术的应用,29,2.2,洁净区污染的控制,保持房间正压,洁净级别不同的相邻房间，之间的静压差,5Pa,洁净区对外界的静压差,10Pa,空气总是由洁净级别高的房间向低的房间流动,对洁净区空气进行净化,保持空调系统的设计符合洁净区洁净度要求,保持空调系统的净化功能符合要求,按规定对洁净区进行消毒、灭菌,保持洁净室联锁装置的正常,30,3,、洁净区操作注意事项,3.1洁净区人员工作要求：,个人卫生要求：,不得化妆,不得在洁净区内吃饭、喝水。,不得在洁净区内抽烟,不得有可见伤口,不得留长手指甲、戴首饰、,传染病患者不得进入洁净区。,平时生产工作中，如患有腹泻、感冒、咳嗽、不明原因发热或体表有伤口等轻微疾病，不得进入洁净区。,31,正确的行为和操作：,保持在洁净区内工作，不随意出入洁净区,不随便说话，必要时才说话,不要通过传递窗说话，使用电话,总是戴上口罩以减少来自口腔的污染,机械和设备的维修保养必须有规律的进行,定期对洁净室和洁净室内物品进行清洁,始终保持洁净区的清洁和整齐,良好的行为很关键，请记住：穿着正确、移动正确、行动正确、工作正确。,32,防止不正确的行为和操作：,防止着装不正确而散播身体的粒子，引起污染,防止不戴手套接触物料，引起交叉污染,防止在洁净室内脱去洁净室工作服,防止用手指接触头发或身体的其他部位,防止在患感冒或其他疾病期间进洁净室工作,防止在洁净室内吃、喝、抽烟或读报等,防止在洁净室内戴首饰、手表,防止在洁净室使用错误清洁物料,防止在洁净室内快速地走、移动、转身,防止靠在工作台、产品或其它物料上,防止把手、手臂和手肘放在超净工作台上休息,防止搬运物料的顶部,防止在工作台上滑动物品,33,3.2维修人员进入洁净区维修工作要求：,必须按进入洁净区的,SOP,要求进入洁净区。,将工具清洁后从传递窗传入。,在生产状态下，不得从事可能影响产品质量的维修。,维修工具必须为专用工具，存放在专用地点，并有标识。,维修用具在使用完后必须马上清洁，并放回指定地点。,不得裸手直接接触药品。,不得高声谈笑，必须戴口罩。,不可穿着洁净服走出更衣室外面，然后再回到洁净区。,34,4,、洁净区的清洁和消毒,4.1,消毒剂的选择,地面和工作台面消毒,0.1%,新洁尔灭或,0.1%,洗必泰,不锈钢表面消毒,-75%,乙醇,手消毒,-75%,乙醇,消毒剂应轮换交替使用，避免产生耐药性。,4.2,正确配制、使用消毒剂,用纯化水配制消毒液,按,SOP,要求的浓度配制消毒液,不要将剩下的消毒液倒入新配的消毒液中,不要混合不同种类的消毒液,35,4.3,洁净区的清洁：,生产完成后应进行清场，对地面、门窗、用具、设备表面、水池、地漏等进行清洁。,定期对洁净区墙面、地面、天花、排风、地漏及其它辅助装置进行全面擦拭和消毒。,定期对洁净区内空气进行消毒。,交替使用,0.1%,新洁尔灭和,0.1%,洗必泰对洁净区地面、清洁工具进行消毒。,36,4.4,洁净区的熏蒸和消毒：,洁净区熏蒸一般使用甲醛和过氧乙酸两种消毒剂,甲醛：能破坏细菌繁殖体及许多芽孢、真菌和病毒。,过氧乙酸：广谱消毒剂，能杀死细菌繁殖体、芽孢、真菌与某些病毒。,4.5,洁净区的微生物监控：,洁净区尘埃粒子、沉降菌、浮游菌的监控。,产品及水质微生物限度监控等。,37,洁净区的尘粒及微生物要求,各级别空气悬浮粒子的标准规定如下：,洁净度,级别,悬浮粒子最大允许数,/,立方米,静态,动态,0.5m,5.0m,0.5m,5.0m,A,级,3520,20,3520,20,B,级,3520,29,352000,2900,C,级,352000,2900,3520000,29000,D,级,3520000,29000,不作规定,不作规定,38,洁净区微生物监测的动态标准如下：,洁净度,级别,浮游菌,cfu/m3,沉降菌（,90mm,）,cfu/4,小时,附着菌,接触（,55mm,）,cfu/,碟,5,指手套,cfu/,手套,A,级,1,1,1,1,B,级,10,5,5,5,C,级,100,50,25,D,级,200,100,50,39,40,