科研选题11-02.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,联系方式：,86862035,（办）,cymanj,;,cyma,提纲,1,、,科研,选题的重要性,2,、科研选题的一般步骤,3,、科研选题的原则,4,、科研选题的方法,关于学位论文选题,1,、学位论文选题存在的问题和风险,2,、选题线索和战术,3,、学位论文选题方法,4,、学位论文选题的风险规避,研究生培养过程包括,课程学习,和,论文工作,两个阶段,前者侧重于提高其专业理论水平,后者是提高研究生,实践能力,和,科学研究能力,的主要手段,也是培养研究生具备创新能力必不可缺的重要举措。,一、,科研,选题的重要性,广义上讲，,科研选题,包括两个方面，一是确定研究方向，二是选择研究课题。,前者决定研究集体和研究者个人在较长时间内进行科学探索的主攻方向，后者则是在这个主攻方向下选定进攻的突破口与制高点，明确在这个方向逐步实现全面占领的具体课题任务，制定实施的计划和步骤以及采取的方法和途径。,科研选题虽然没有固定模式，但选择一个好的研究课题却需要遵循一些基本的步骤，如必须了解前人的工作和现实需要，进行文献调研和实际考察等，以确定选题的价值和意义。,科研选题的一般步骤：,文献调研、实际考察,提出选题,初步论证,评议和确定课题,选题过程是一个不断反馈调整的过程，常常需要反复调研和多次论证。,二、科研选题的一般步骤,选题是科学研究的开端，在开始时所依据的事实是不完全的，可能存在错误；理论也受一定条件限制，会随着科学实践的发展而发展。,科研选题既要尊重所依据的科学理论和科学事实，又要随着基础事实和背景理论的改变而对选题进行调整。,三、科研选题的原则,第一，科学性原则。,选题必须以一定的科学理论和科学事实为根据。,没有创新就谈不上科研。,有可能导致新理论、新概念、新方法、新应用出现的课题，应成为优先被选择的课题。,第二，创新性原则。,选题应是前人没有解决或没有完全解决的疑难问题。,原始创新,填补空白或修改传统的理论,新技术、新方法的发明创造,需要丰富的想象力、探索精神、独立思考，不惟上、,不惟书,跟踪创新,在前人工作基础上补充、完善现有理论,对原有技术、方法进行修改后产生,1,1,2,的效果,前提是善于和勇于,“,怀疑,”,和,“,批判,”,，创新的死敌是,“,惟命是从,”。,第三，应用性原则。,选题应满足满足社会需要和科学自身发展需要。,不同类型的课题，其需要性的表现是不同的。,基础研究,要从学科理论发展的需要出发，去研究和发现自然界的新现象和规律。立足于本学科前沿进行选题。,应用研究,致力于解决国民经济和社会生活中所提出的实际科技问题，其任务在于把理论推进到应用的形式。它的选题方向应指向加强生产活动的技术基础，弄清技术机理。,发展研究,担负着把科学技术直接转化为社会生产力的任务。其选题应将当前社会需要置于首要位置，充分注意所开发技术的经济效益、社会后果和对环境的影响。,第四，可行性原则。,选题应与自己的主、客观条件相适应。,选题时从实际出发，扬长避短、发挥优势，才容易取得研究成果。,主观方面：,包括研究队伍的结构、研究者的素质、能力、研究兴趣等；充分发挥科研工作者的特长，结合个人的兴趣和爱好来选题。,客观方面：,包括科研经费、实验设备、原材料供应、图书情报资料等。强调客观条件的重要性，但不能陷入“唯条件论”。居里夫妇在简陋的实验室里，利用手中仅有仪器对天然放射现象进行研究，从数以吨计的沥青铀矿渣中提炼出镭的事迹，已为人熟知。,上述选题原则既是,限制性原则,，也是,启发性原则,。,选择,既能实现、又具有创造性和满足需要,的课题。,上述原则之间常会有,矛盾,，难以在各方面做到周全。如完全考虑需要性原则，则可能选题的创新性不够，或不具备可行性；创新性与科学性原则也可能有矛盾，具有高度创新性的选题，可能包含着某种科学上的不成熟因素，具有较大的风险。,科研选题既是一门科学也是一门艺术。不可能有一种良方能够找到某个既最有必要又最有可能、既最有创新性又最合科学的课题，而只能在上述原则的综合乃至折衷上选出某种相对合理的课题。,原则,:,最新的科研进展,寻找最新动态,结果,:,站在,科学最高峰,引领相关科研方向,到哪里找最新进展或动向？,四、科研选题的方法,前瞻性选题,追踪最新的医学进展,生命科学的最新动态或热点？,医学或生理学诺贝尔奖,RNA interference,RNA-polymerase-related transcription process,Gene targeting.,Nature,Science,Cell,等杂志上的论文,自己专业相关的高影响力杂志,The Nobel Prize in Physiology or Medicine for 2006,Andrew Z.Fire and Craig C.Mellofor their discovery of,RNA interference gene silencing by double-stranded RNA,Andrew Z.Fire,Craig C.Mello,The Nobel Prize in Chemistry 2006,for his studies of the molecular basis of eukaryotic transcription,Roger D.Kornberg,Stanford University,Stanford,CA,USA,2007,年诺贝尔生理学或医学奖得主,马里奥,卡佩奇（,Mario R.Capecchi,）,奥利弗,史密斯（,Oliver Smithies,）,马丁,埃文斯（,Martin J.Evans,）,为“基因靶向”技术的发展奠定了基础。这种技术利用胚胎干细胞，改造老鼠体内的特定基因。,2008,年诺贝尔生理学或医学奖揭晓德法三科学家因发现人类乳突淋瘤病毒致宫颈癌和,HIV,病毒而获奖。,2009,年诺贝尔生理学或医学奖授予美国加利福尼亚,旧金山大学,的,伊丽莎白,布莱克本,(Elizabeth Blackburn),、美国巴尔的摩约翰,霍普金医学院的卡罗尔,-,格雷德,(Carol Greider),、美国哈佛医学院的,杰克,绍斯塔克,(Jack Szostak),以及霍华德休斯医学研究所，以表彰他们发现了端粒和端粒酶保护染色体的机理。,2010,年度,诺贝尔,生理学或医学奖在瑞典首都斯德哥尔摩揭晓。被誉为“试管婴儿之父”的英国科学家罗伯特,爱德华兹，因“在试管受精技术方面的发展”而被授予该奖项。,2011,年诺贝尔生理学或医学奖授予美国科学家布鲁斯,博伊特勒,(,前译巴特勒,),、生于卢森堡的法国籍科学家朱尔斯,霍夫曼以及加拿大科学家拉尔夫,斯坦曼，以表彰他们在激活先天免疫方面的发现以及树状细胞和它在适应性免疫中的作用。,21,世纪诺贝尔生理学或医学奖,2006,年，发现,RNA,干扰技术，已被广泛用作研究基因功能的一种手段。,2005,年，发现幽门螺杆菌，改变了世人对胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡的认识和治疗。,2004,年，发现让人类分辨出,1,万多种气味的接收器，揭示了人类嗅觉系统的奥秘。,2003,年，发现核磁共振成像技术，最终导致核磁共振成像仪的出现。,2002,年，器官发育和程序性细胞死亡过程中的基因调节。,2001,年，发现导致细胞分裂的关键性调节机制，为研究治疗癌症的新方法开辟了途径。,2000,年，发现神经元突触可塑性是记忆的基础。,美国,2007,年拉斯克奖（,Lasker Award,）,基础医学奖：,发现树突状细胞（,dendritic cells,）并阐明其在免疫系统中的“哨兵”作用,临床医学奖：,利用机械手段和动物源获得了心脏瓣膜,回顾性选题,阅读文献,经典著作,通常是该领域和方向学术奠基人的著作,善于并敢于对“权威”提出质疑,最新文献,本领域高,IF,综述、低,IF,论文热点专题：提出研究思路，建立假说，利用新技术进行研究,相关领域功能分子的借鉴,关注有关大研究项目的结局,爱滋病疫苗临床实验的失败,利用,新的研究手段,证实原有结论,(,理论不变,),新的发现,(,开创新的研究领域,),例,:,“,神经轴突生长模式,”,回顾性选题的两种可能结果,目前，学位论文选题大致有三种方式：,一是学生在导师指导下，自己独立选题；二是由导师出若干个题，由研究生从中挑选一个；三是由导师指定。,关于学位论文选题,一、学位论文选题存在的问题和风险,1,难易不当、大小失衡,难易不当是指所选题目太难，与作者实际的研究水平相去甚远，大大超出本人的研究能力，在现有的研究条件或规定的学制内个人无力完成。较难的选题还体现在实验条件不规范，经费不足等方面。,大小失衡则指题目涉及范围太广或太窄。太广会给文献资料的搜集带来困难，众多的材料也难以筛选和驾驭，并使文章给人以假大空的印象，主题不够突出；太窄则使内容流于空泛，缺少亮点和吸引力，创新性不强，难以充分展示作者本人的研究能力。,2,标新立异或陈旧重复,贪怪求偏；脱离了现实；或受专业过窄的限制，导致选题缺乏新意，只是原地转圈，陷入“炒冷饭”、“赶时髦”的误区，缺乏学术生命力；又或者受功利主义思想的影响，堕入学术抄袭的漩涡。,3,选题滞后,4,脱离专业，无大价值,学位论文的基本特征之一是其专业性，专业性指“学位论文的选题和研究的内容，是学位点所在学科的学科研究领域。”若论文的选题脱离了本专业，论证再有力的论文也失去了研究价值，且答辩时容易遭到批驳，特别对于新兴的交叉学科、边缘学科等，专业性问题尤为突出。选题有价值，文章不一定有价值；选题若没多大价值，文章则难以有大的价值，论文必须明确其所在学科的研究领域。,二、选题线索和战术,选题者有广博的知识、敏锐的洞察力和高度的鉴赏力。以下一些方面是值得注意的,选题线索,：,1,自然科学和技术理论中的空白区和“处女地”；,2,两门或几门学科相接触的边缘区和“结合部”；,3,科学理论的实际应用，包括科科学理论应用于新领域的,探索性研究，扩大科学理论在新领域中应用范围的发展,研究；,4,寻求古老经验事实的理论解释，揭示蕴藏在新的自然现,象背后的机理和规律；,5,解决旧理论与新事实之间的矛盾的冲突；,6,消除科学理论内在的逻辑不完备性，包括相对立的理论的辩证综合；,7,对科学假说的实践检验；,8,某一领域中的概念和理论向其他领域的移植，扩展或限定其适用,范围，加以修改，完善；,9,某一领域中新的实验或测试技术在其他领域中的推广应用和改进、,变革；,10,取得研究成果为起点，跟踪追击；,11,抓住研究中意外出现的新问题和副产品，调整课题，转向进攻，,甚至变副为主；,12,以失败的探索为借鉴，从反面提出问题；,13,接受正确的哲学预见和科学幻想的启迪。,(1),瞄准学科发展的前沿方向选题,科研是创造性的劳动，选题应涉入当代科学上的未知领域并具有较高的价值。为达到硕士学位，论文对所研究的课题要有新的见解，博士学位论文在科学或专门技术上要做出 创造性成果，要提供良好基础。,三、选题方法,(2),结合现有的科研项目选题,首先要结合国家重点攻关项目，自然科学基金项目，部委或其它横向项目，这些课题立项时经过专家论证，具有较高学术水平。这样不仅论文起点高，而且有基金或科研经费，可以弥补研究生经费不足的问题。同时也为完善和开辟系列科研课题起到促进作用。其次，选题还要注重结合学生本人的特点和兴趣，对学生自主型的选题给予支持和积极指导。,(3),拓宽选题的学科范围,有些学科的交叉合作，能发挥已有学科之间的综合优势，建设适应当今经济、技术发展的新兴学科、边缘学科，为学校的科学研究建立在新的学术领域上，开辟更宽广的前景。当然这样的课题有可能超出了导师的研究方向，在业务指导上增加了难度或力不从心，在这种情况下可以通过组织指导小组，或聘请有关专家协助联合培养。,(4),选题可以来源于社会生产需要，使其具有实用价值；也可 以是指导认识实践问题的基础理论研究，使其具有理论意义。,在选择课题时，可以面向企业，走向社会，使研究成果直接为社会生产实践服务，产生经济效益和社会效益。有些工厂、企业开发新产品，引进、消化、吸收国外先进技术与设备，这样的课题从经费到实验基地等条件基本有保证，但需要导师掌握方向，关心和质疑选题是否符合原则，能否保证论文质量和进度，防止工作量很大，而理论水平不足，因缺乏科研内容而影响论文质量及水平。,2,四、学位论文选题的风险规避,1,多方求教，集思广益,确定选题时，既要师生共同研究，充分讨论，进行价值评估，又要多方拜访专家教授请求指点。专家教授们作为学界权威，知识储备丰富，视野开阔见解深厚，更能全方位多角度地提供参考意见，对论文大方向提供原则性的把握，保证论文不脱离专业方向，避免论文出现“硬伤”。一方面要拜访对自己立论的支持者，还可以拜访对立论持反对意见的学者，充分考察“敌情”，害怕权威、讳疾忌医等都不是应有的学术态度。,2,广挖渠道，开发新选题,密切关注国内外医学发展，寻找焦点问题；紧跟科技前沿了解最新业绩；深入实际不断积累，立足交叉学科领域，寻求突破；研究历史，了解不同学派的基本情况，开阔思路；检索文献，旁征博览；运用创新思维多观察、多思考、多交流，积极参加学术讨论会，善于捕捉新论等，都是开发新选题的有益途径。相对重要的是进行必要的文献收集工作，平日做好读书笔记，保持对本专业话题的敏感。加之个人要勤奋思考善于发掘，必能从新的角度得出独到的见解，避免标新立异或单调重复。,3,选题宜及早进行,在掌握一定的学科基本理论的基础上，尽早确立选题，有的放矢地从事阅读研究工作，有利于尽早发现问题和解决问题，对选题的纵向和横向把握更准确一些。充分的准备才能有充实的积累，并酝酿出闪光的智慧。所以选题的前期工作应扎实有效，方可厚积薄发，也能为下一步的论文撰写和顺利答辩做好铺垫，并为毕业找工作留出时间，以防最后“眉毛胡子一把抓”，工作学习焦头烂额，最终质量还难以保证，令自己和导师都为难。,4,选题要量力而行,有些研究生为寻找突破点，把大量力气花在研究方法的创新上，甚至认为研究方法越多越好，因此专选那些需要做大量实验或社会调查才可以完成的选题，认为这便是理论与实践相结合，结果在浪费了大量人力物力之后，又发现该选题根本超出了个人承受能力，数据、信息搜集艰难，最终骑虎难下。研究者在确定选题时应考虑好个人可利用的时间，在准确理解相关研究方法的基础上，慎重考虑作出选择，使选题保持在适当的范围之内，力求做到言之成理，论证有力。,2010-2011,部分硕士学位论文、博士学位论文选题分析,人,胶质瘤,中,骨桥蛋白,功能的初步研究,研究背景,:,骨桥蛋白,(osteopontin,OPN),是一种分泌型的磷酸化糖蛋白,其可与,av3,整合素受体和,CD44,家族受体作用,调节细胞黏附和迁移。近年来在乳腺癌、胰腺癌及卵巢癌等多种肿瘤组织中发现,OPN,高表达,且与肿瘤的转移复发关系密切。此外,OPN,共有,3,个剪切变体,分别为,OPN-a(OPN,全长,),OPN-b(,外显子,5,缺失,),OPN-c(,外显子,4,缺失,),。,He,等研究发现乳腺癌中,OPN,的三个剪切变体表达类型存在差异,并在乳腺癌细胞侵袭及克隆形成中发挥不同的作用。然迄今为止,尚未有关于,OPN,剪切变体在胶质瘤中功能的相关研究。,醋甲唑胺眼用温度敏感凝胶的研制,眼部药物传递系统作为控制释放领域的重要分支,一直备受人们的关注。眼睛的有效保护机制与高度敏感性促使人们探索开发更安全、合理的给药系统,同时又限制了许多药剂学手段的应用,为此类剂型的设计带来了极大的挑战。醋甲唑胺,(methazolamide),作为第一代碳酸酐酶抑制剂治疗青光眼已有,50,多年历史,具有显著的降眼压作用。本文选择醋甲唑胺作为模型药物,制备了具有适宜相转变温度的眼用温度敏感凝胶。,肥胖,是常见的能量代谢性疾病,是引起多种疾病包括,2,型糖尿病、高血压、心脏病、肿瘤的危险因素,已成为全球性的流行性疾病。近年来,儿童青少年人群肥胖率正逐年增高,儿童肥胖不仅对儿童身心健康造成极大危害,而且也给家庭和社会带来沉重负担。因此,探讨肥胖及其并发症的发病机制已经成为当今儿科学的重要研究方向之一,。肥胖是多因素疾病,近年来遗传因素在肥胖发生发展中的重要性已获得广泛认同。目前虽已发现,600,余种基因位点与肥胖的发生有关,然而这些已知基因并不能完全阐明肥胖的病因及发病机制。因此,积极寻找发现并研究新的、与肥胖相关的基因,将为肥胖的防治开拓新的思路。,人,C10orf116,基因是本研究小组,2004,年应用,SSH,技术,(,抑制性差减杂交,suppression subtractive hybridization),筛选肥胖与正常人网膜脂肪组织获得并克隆到的一条肥胖相关全长新基因。我们前期研究发现,:C10orf116,特异分布于细胞核,具有在脂肪组织高丰度表达的多组织表达特征,肥胖者脂肪组织中该基因表达显著上调,且在人前体脂肪细胞分化早期表达显著上调。为进一步阐明,C10orf116,基因在脂肪细胞中的功能,本研究以该基因为研究对象,观察了该基因过表达,(overexpression),对脂肪细胞增殖、凋亡、胰岛素敏感性的影响,并初步探讨了成熟脂肪细胞中该基因过表达时相关,microRNA,的表达变化。,C10orf116,在脂肪细胞中的功能研究及相关,microRNA,芯片分析,脂联素,在类风湿关节炎慢性炎症及骨破坏中的作用,目的,:,脂肪因子,和炎症的关系近来受到重视,其在关节炎中的作用是个全新话题。我们前期研究中也发现类风湿关节炎,(RA),关节液中的脂肪因子,脂联素,(AD),水平明显高于骨关节炎,(OA),。而我们的合作伙伴在强直性脊柱炎的芯片分析中发现另外一个脂肪因子,肝素结合性表皮生长因子,基因,(HB-EGF),明显高表达。本实验旨在研究,AD,及,HB-EGF,在,RA,慢性持续性炎症及骨破坏中的作用,探索其可能存在的意义,为进一步实验奠定基础。,建立大鼠原位单肺移植模型的技术学研究,目的,:,对大鼠原位单肺移植模型的技术进行研究,从而能够更简单有效、安全可靠的建立大鼠原位单肺移植模型。,方法,:,结论,:,通过对大鼠原位单肺移植模型中,:,套管的选取及制备、供肺动静脉及支气管游离、供体肺灌注压、供体肺保存、受体大鼠气管插管、受体大鼠切口的选择、肺移植血管及气管吻合、围手术期管理、并发症的总结研究,可以更简单有效地建立大鼠原位单肺移植模型。,miR-100,在卵巢癌中的表达及其意义,卵巢癌,是常见的妇科肿瘤,其死亡率居妇科肿瘤之首。晚期卵巢癌的,5,年生存率仅为,20%-30%,。卵巢癌起病隐匿,症状只有在疾病蔓延至腹膜腔表面时才表现出来,很难在早期发现和诊断。但在这个时期,已不能通过手术清除所有病灶,导致手术后的再次复发。因此,晚期卵巢癌主要的治疗方案为化学治疗,但卵巢癌通常呈进展状态且易对化疗药物产生耐受性。所以,进一步研究卵巢癌的发病机制、寻找新的有效治疗卵巢癌的方法对治疗和手术后预防复发有非常重要的意义。,MicroRNAs,是近年来发现的一类在转录水平调控基因表达的、长度约为,18-24,个左右的核糖核酸分子,通过与靶基因的,mRNA-3UTR,区域配对调控基因的表达。已证明,miRNAs,能够调控多种生理学和病理学的过程,如细胞分化、细胞增殖和肿瘤形成。,miRNAs,可作为癌基因或抑癌基因,参与调节人类肿瘤形成的多个信号通路途径。,有学者利用,miRNA,表达谱芯片等多种方法对卵巢肿瘤和正常女性卵巢组织的,miRNAs,表达进行检测,发现卵巢癌中,miR-100,等多种,miRNAs,异常表达,但目前,miRNAs,在卵巢癌中的具体作用机制尚未明确。,塞来昔布提高,k562,细胞对干扰素,-,敏感性的研究,观察塞来昔布,(celecoxib),对,k562,细胞增殖、凋亡、细胞周期和,CD117,表达的影响及与干扰素,(IFN-),联用是否具有协同作用。,MicroRNA,在非小细胞肺癌耐药细胞株,A549/DDP,中表达及作用机制的研究,背景和目的,:,microRNA(miRNA),是在真核生物中发现的一类小分子非编码,RNA,在转录后水平调节基因表达。研究表明,miRNA,作为类似癌基因和抑癌基因作用参与细胞增殖、凋亡和分化的调控,在肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的生物学作用,且可能与肿瘤的耐药性密切相关。,顺铂,是非小细胞肺癌,(NSCLC),化疗的一线药物,但其获得性耐药制约了其疗效的发挥。本实验通过,miRNA,表达谱芯片,技术,检测顺铂耐药的,NSCLC,细胞株与敏感株中,miRNA,表达的差异,筛选出与,NSCLC,顺铂耐药相关的,miRNAs,表达谱。并进一步探讨,miRNA,在,NSCLC,顺铂耐药中的作用机制,进而为,miRNA,作为,NSCLC,顺铂耐药诊断和预后的标志物及基于,miRNA,的,NSCLC,逆转顺铂耐药治疗策略提供理论依据。,抑癌基因,TSPYL5,在胃癌发生发展中的作用及机制的初步研究,目的,:,探讨睾丸特异性,Y,样蛋白,5(testis-specific Y-like protein 5,TSPYL5),的表达对胃癌生物学行为的影响。研究,TSPYL5,在胃癌发生发展中对,Wnt/-catenin,信号通路可能的作用机制。,乳腺癌中微管相关蛋白,LC3A,和,LC3B,的表达及意义,目的：探讨微管相关蛋白,MAP1LC3(LC3A,和,LC3B),在乳腺癌组织中的表达,阐明其与乳腺癌发生、发展及转移的关系。方法以,8,例正常乳腺组织为对照,采用免疫组化,SP,法和半定量,RT-PCR,技术检测在乳腺增生性病变,(20,例,),乳腺非浸润性癌,(10,例,),乳腺浸润性癌,(40,例,),中,MAP1LC3A,、,MAP1LC3B,及其,mRNA,的表达水平。,MiR-143,通过下调,KRAS,表达抑制前列腺癌细胞增殖和迁移,目的,:,探讨前列腺癌细胞中,miR-143,低表达与,MAPK,信号通路中,KRAS,被抑制的关系,研究,miR-143,高表达对前列腺癌细胞增殖和迁移的影响及其作用机制。方法,:,通过,RT-PCR,和,Western blotting,的方法检测,miR-143,及其靶基因,KRAS,蛋白在前列腺癌组织中的表达,;,用,MTT,方法和集落形成和迁移实验分别研究,miR-143,对激素非依赖性前列腺癌细胞增殖和迁移能力的影响。,MicroRNA-10b,与脑肿瘤侵袭性关系的初步研究,研究背景,:,微小,RNA(microRNAs,miRNAs),是一类长度为,20,25,个核苷酸,(nucleotide,nt),的内源性单链非编码小,RNA,。成熟的,miRNA,与其靶信使,RNA(messenger RNA,mRNA)3UTR(3 Untranslated Region),完全或不完全互补配对后,通过降解靶,mRNA,或抑制靶,mRNA,的转录后翻译,参与调节生物体的发育生长、细胞的分化、增殖和凋亡、参与肿瘤的发生、发展等生理病理过程。近年来发现某些,miRNAs,表达与肿瘤的侵袭转移生长有密切关系,miR-10b,是其中研究的较多的一员,定位于,2,号染色体短臂,3,区,1,带,1,亚带的,HOXD4,与,HOXD8,基因之间,其在胰腺癌、肝癌、转移性乳腺癌,食管癌、慢性淋巴细胞性白血病、急性髓性白血病等恶性肿瘤中均高表达且与肿瘤的侵袭生长密切相关,但,miR-10b,与脑肿瘤,特别是垂体腺瘤人脑及胶质瘤侵袭性关系的研究尚报道不多,。,STAT3,介导反义,miR-21,调控,hTERT,表达抑制胶质瘤细胞生长,背景与目的：微小,RNA(microRNAs,，,miRNA),是一类大小为,20,25,个核苷酸,(nucleotide,，,nt),的非编码小,RNA,。成熟的,miRNA,与其靶信使,RNA,（,messenger RNA,，,mRNA,）的,3,端,UTR,完全或不完全配对后，通过切割或抑制靶,mRNA,的转录后翻译，参与调节生物的发育、细胞的分化、增殖和凋亡等。近年来诸多研究表明,miRNA,与肿瘤的发生、发展关系密切，某些,miRNA,在胶质瘤中呈特异性表达。,在前期工作中我们利用芯片技术，借助于我科丰富的人脑胶质瘤标本库，,研究人类,WHO,各种组织病理分型的胶质瘤、正常人脑组织及胶质瘤细胞系中,miRNAs,表达谱，找到人脑胶质瘤中特异性表达的,miRNAs,，,miR-21,就是其中之一。,miR-21,作为一个致癌性微小,RNA,，已经被证实在多种肿瘤组织中呈高表达。本研究通过敲低,miR-21,在胶质瘤细胞中的表达，观察其对人脑胶质瘤细胞,U87,和,LN229,细胞生物学特征的影响，并且通过对其下游靶基因的研究，阐述,miR-21,在胶质瘤发生发展中的作用机制，从而为,miR-21,能够作为胶质瘤诊断和治疗靶点提供依据。,microRNA-143,基因启动子区多态性与前列腺癌遗传易感性的研究,MicroRNA-10b,与脑肿瘤侵袭性关系的初步研究,过表达,microRNA-23a,对急性,UVB,照射所致皮肤光损伤干预作用及其相关靶基因预测结果验证的研究,MicroRNA146a,在,UVB,诱导的急性光损伤中作用机制的研究,miR-451,增加,NSCLC,细胞系,A549,对顺铂敏感性的研究,DNA,甲基化异常对,miR-615-5p,在胰腺癌细胞株中表达影响的研究,C10orf116,在脂肪细胞中的功能研究及相关,microRNA,芯片分析,MicroRNA,在非小细胞肺癌耐药细胞株,A549/DDP,中表达及作用机制的研究,过表达,microRNA-23a,对急性,UVB,照射所致皮肤光损伤干预作用及其相关靶基因预测结果验证的研究,MicroRNA146a,在,UVB,诱导的急性光损伤中作用机制的研究,EMT,相关蛋白在肝细胞肝癌组织中的表达鉴定及相关,microRNA,表达谱的研究,miR-451,增加,NSCLC,细胞系,A549,对顺铂敏感性的研究,MicroRNAs,与急性白血病诊断分型及预后,干扰素调节因子,3,第二内含子内剪接异构体,1,的转录调控,干扰素调节因子,3(interferon regulatory factor 3,IRF-3),是调节,型干扰素,(IFN-/),基因表达的关键转录因子,在固有免疫反应和获得性免疫反应中的起重要性作用。目前,国内外关于,IRF-3,的研究几乎全部集中在,IRF-3,参与的抗病毒自身免疫信号通路中的作用,而关于,IRF-3,的自身转录调控机制尚不十分清楚。生物信息学分析结果表明,IRF-3,第一内含子和第二内含子内有新的转录起始位点,(transcription start site,TSS),表明该基因有多个启动子和多个剪接异构体,但现有文献未见该分子多个启动子鉴定和详细的剪接异构体分析的报道。,博士论文,miR-146a,基因遗传变异在前列腺癌发生发展的作用及其分子机制的探讨,前列腺癌的具体病因目前尚不完全清楚。普遍认为,前列腺癌的形成是一个多因素和多阶段的过程,是环境危险因素和遗传因素共同作用的结果。流行病学调查显示,环境危险因素暴露在前列腺癌发病中具有重要的作用,但尽管很多人接触相同的致癌危险因素,最终仅有少数人发生前列腺癌,提示个体易感性差异在前列腺癌发病过程中发挥作用。,microRNAs(miRNAs),属于非编码,RNA,主要通过在转录后水平调控基因表达。至今已发现的,miRNA,有数百种,在人类基因组中,miRNAs,调控大约,1/3,的蛋白编码基因,控制细胞的凋亡、增殖、分化、代谢以及个体的发育和肿瘤的发生、发展以及耐药。目前,有超过,50,个,miRNAs,被发现在前列腺癌中异常表达,包括,miR-146a,。另外,位于,miR-146a,前体基因序列上的一个单核苷酸遗传变异,(single nucleotide polymorphism,SNP),被发现影响成熟,miR-146a,的生成和功能。因此,我们推测,miR-146a,遗传变异可能与前列腺癌的发生发展有关。本研究旨在通过分子流行病学和分子生物学相结合的手段,对,miR-146a,遗传变异与前列腺癌遗传易感性的关系以及,.,人,IRF-3,基因启动子的克隆与初步鉴定,目的,:,克隆人干扰素调节因子,3(Interferon regulatory factor 3,IRF-3),基因启动子并寻找其核心功能区域,鉴定与,IRF-3,基因启动子结合的转录因子,为阐明其表达调控机制奠定基础。方法,:,以,HEK 293,细胞基因组,DNA,为模板,采用,PCR,方法获取,IRF-3,基因,5,侧翼序列,测序正确后插入,pGL3-Basic,载体。运用双荧光素酶报告基因检测系统鉴定其启动子活性。采用缺失分析法分别从,IRF-3,基因,5,侧翼的,5,端逐段缺失,克隆得到不同长度的截短片段,插入,pGL3-Basic,载体,使用双荧光素酶检测系统定位,IRF-3,基因启动子核心功能区域,鉴定其启动子活性。利用点突变技术、凝胶迁移实验,(EMSA),、染色质免疫沉淀,(ChIP),、,RNA,干扰和基因过表达等实验,分析,IRF-3,启动子区的转录因子结合位点。,PGE2,对肝癌细胞生长与侵袭能力的影响及相关机制的研究,研究背景,:,前列腺素,E2,（,PGE2,）是花生四烯酸代谢产物,国内外研究表明,PGE2,合成增加与多种肿瘤的生长与扩散有关。,PGE2,合成关键酶为环加氧酶（,cyclooxygenase,COX,）,目前已发现三种环加氧酶,其中,COX-2,主要由某些细胞因子、激素等诱导合成,因而在炎症与肿瘤组织中往往呈高表达。所合成的,PGE2,主要通过与细胞膜表面的四种,EP,受体（,EP1,、,EP2,、,EP3,、,EP4,）结合,激活下游信号转导通路,而发挥生物学调节作用。本实验室前期实验证明肝细胞癌细胞表面同时表达四种,EP,受体,;COX-2,过表达或外源性,PGE2,都有促进肝细胞癌细胞存活、生长的作用,;,而选择性,COX-2,抑制剂,celecoxib,则可抑制肝癌细胞存活,促进细胞凋亡。本课题在此基础上继续探讨,PGE2,对肝细胞癌细胞生长、粘附与侵袭能力的影响。,microRNA,在肾间质纤维化中作用的研究,1.,肾小管上皮,-,间充质转分化,(epithelial-mesenchymal transition,EMT),是肾间质纤维化的关键致病机理。,目前肾小管,EMT,的调控机制仍不十分明确。,近来微小核糖核酸,(micro ribonucleic acid,miRNA),在,EMT,中的作用备受国内外关注。我们借助,miRNA,芯片研究单侧输尿管梗阻,(unilateral ureteral obstraction UUO),大鼠病变侧肾脏,miRNA,的差异表达,筛选可能与肾小管,EMT,相关的,miRNA,。,2.,观察,miR-200,家族,在转化生长因子,-1(Transforming growth factor-1,TGF-1),诱导的,NRK-52E(normal rat kidney epithelial cell),细胞转分化中的作用,探讨,miR-200,参与调控肾小管,EMT,的机制。,3.,观察,miR-21,在慢性肾脏纤维化中的作用,寻找,miR-21,参与调控肾小管,EMT,的可能的靶点。,MiR-145,对乳腺肿瘤生长和新的血管生成的影响的研究,目前,肿瘤是人类第一大杀手,对人类的生存构成最严重的威胁。乳腺癌是全球妇女中发病和死亡率占继肺癌之后第二位的恶性肿瘤。由于肿瘤发生的异质性,乳腺癌发病机制存在许多因素,并且乳腺癌具有容易转移的特点,目前手术仍是治疗乳腺癌的重要手段。探索肿瘤发病的机制对肿瘤的诊断、治疗和手术后预防有非常重要的意义。,MicroRNA(miR),是近年来发现的一类在转录水平调控基因表达的长度约,17-22,个左右的核苷酸分子,通过与靶基因,mRNA3-UTR,区域配对调控基因的表达。它不仅在时空上调控动物的发育,而且在肿瘤中,miR,常异常表达,起到癌基因或抑癌基因的作用,参与调控肿瘤的发生发展转移。,MiR-145,靶向多个基因,但是,miR-145,调节肿瘤生成和新的血管的作用还有待于研究。,肿瘤发生早期直径仅为,1,2,毫米时就需要新的血管生成用以提供生长所需的物质,否则就无法继续生长而死亡,血管内皮生长因子,VEGF,在肿瘤新的血管生成中起重要作用。正常人体已形成完整的血管系统,不需要有新的血管生成。抑制新的血管生成对肿瘤细胞具有特异性杀伤作用,但是迄今为止还未见,miR-145,在肿瘤形成和新的血管生成中的作用的的报道。,microRNA,参与脑胶质瘤放射敏感性调节的机制研究,第一部分,人脑胶质瘤放射敏感性相关,miRNA,的筛选和鉴定,目的,:,筛选和鉴定可能参与调节人脑胶质瘤细胞放射敏感性的,miRNA,。方法,:1.,人脑胶质瘤细胞系,U87MG,、,U251MG,、,SHG-44,放射敏感性检测。给予各种人胶质瘤细胞不同放射剂量照射,绘制生长曲线,流式细胞仪检测各细胞系在不同放射剂量处理后的凋亡率,判定各细胞系放射敏感性差异,;2.,选择放射不敏感胶质瘤细胞系作为研究对象。不同放射剂量处理所选细胞系,MTT,检测其对应的生长抑制率,结合曲线拟合分析,确定后续实验组放射处理剂量,即生长抑制率为,50%,时的放射剂量,;3.,放射处理方案,:,模拟人脑胶质瘤分割照射放疗方案,即给予所选细胞,2Gy/,天,5,天,/,周的放疗方案,剂量率,400cGy/,分,;,4.miRNA,芯片检测放射处理前后所选细胞,miRNA,表达谱,分析并找出差异表达,miRNA;5,.,利用,quantitive real-time PCR,对,miRNA,芯片部分结果进行验证。,miR-199a,对肝癌的抑制作用及分子机制研究,MicroRNA,（,miRNA,）是近年来在生物体内发现的一类长度在,19,22,核苷酸、内源性单链小分子,RNA,它通过与靶基因,mRNA 3,非翻译区（,3-UTR,）相应靶序列碱基之间不完全或完全的互补结合,抑制,mRNA,的翻译或引起,mRNA,的降解,发挥对靶基因的沉默效应。,miRNAs,调节细胞增殖、凋亡、分化以及迁移等重要的生物学过程。越来越多的证据表明,一些,miRNAs,在肿瘤组织中表达异常,参与了肿瘤的发生和发展。,miR-199a,是高度保守的,miRNA,在多种肿瘤中表达异常,与肿瘤的发生密切相关。,本文用实时定量,RT-PCR,方法分析配对的肝癌组织和癌旁组织中成熟,miR-199a,的表达,发现,miR-199a,在肝癌组织中表达下调,和其它学者,miRNA,表达谱的结果一致。由此我们设想肝癌的发生可能和,miR-199a,的表达下调有关,miR-199a,可能通过调控靶基因的表达参与肝癌的发生发展,恢复,miR-199a,的表达可能会抑制肝癌的生长。,NYGGF4,对脂肪细胞胰岛素敏感性的影响及机制分析,肥胖是常见的能量代谢性疾病,是引起糖尿病、心脑血管疾病、高血压等多种疾病的危险因素。近年来,肥胖的发生率逐年增高,其中以儿童肥胖发生率的升高尤为突出,已在全球范围内呈流行态势。随儿童肥胖人数的不断增加,各国儿童期,2,型糖尿病的发病率也逐年增高并已出现明显的低龄化趋势,;,我国有关肥胖儿童、青少年的研究也发现,肥胖者中目前诊断为,2,型糖尿病的人数尽管不多,但却普遍存在胰岛素抵抗指数的升高与葡萄糖耐量试验的异常,而胰岛素敏感性降低或胰岛素抵抗是,2,型糖尿病发生的早期重要事件,因此探讨肥胖及肥胖所致胰岛素抵抗的发病机制也成为儿科研究领域的一个重要研究内容。,NYGGF4,基因,(,也称做,PID1,基因,),是本研究小组克隆到的一条人类全长新基因,(GenBank,登