药物分析第3章.ppt

单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,如何理解“,药物的纯度,是判定药品质量优劣的一个重要指标”这句话？,仿制药与被仿制药一致性要求,药学方面一致（含量、结构、杂质、其它检查项等）,杂质的数量和种类低于被仿制药，否则需要分析杂质的安全性并提供有关数据，必要时应进行相关的安全性试验,建立杂质适宜的杂质检查方法用于判断一致性,用于工艺优化、去除杂质、考察稳定性、控制药物质量,举例：仿制药的杂质检查,国内仿制药研究中杂质检查面临的困难,-,杂质来源不清,-,杂质检查方法缺乏针对性,-,杂质对照品制备困难（受限于工艺困难），方法验证不充分,-,杂质检查结果难于评价,一、概述,药物纯度的概念与要求,药物的纯度,药物的,纯净,程度,杂质,无治疗作用，影响药物稳定性和疗效，,对人体健康有害的物质,杂质检查,也称,纯度检查,药用纯度与化学纯度的区别？,杂质的来源与种类,来源：,生产过程中引入,贮藏过程中引入,原料，中间体，副产物；,试剂，溶剂，催化剂；,器皿、装置、管道等影响；,制剂过程中产生的杂质；,同分异构及同质异晶现象,保管不当、贮藏时间过长；,温度、湿度、光、空气影响；,微生物作用，产生：,降解物、水解物、聚合物、,氧化物、异构化、霉变等,种类：,按来源分：,一般杂质、特殊杂质,按结构分：,无机、有机杂质；残留溶剂,按性质分：,信号杂质、有害（毒）杂质,无效、低效的异构体或晶型,光学异构体,（左旋体，右旋体）,几何异构体,（顺式体，反式体）,多晶型,（晶型不同，理化常数，溶解度，稳定性，体内吸收和疗效也不同）,注意：,药典中规定的检查项目，是指正常生产和储存中可能产生并需控制的杂质。药典中未规定的杂质，一般有以下几种情况：,指正常生产和储存中不可能引入,含量甚微，对人体和药物质量无不良反应,限量要求较宽，现有产品均能达到,对杂质认识不足，有待于积累资料,杂质的限量,药物中的杂质在不影响疗效和不发生毒性的原则下允许有一定量的杂质存在。,杂质的限量就是指药物中所含杂质的最大允许量，通常用,%,，百万分之几（,ppm,）,表示。,对人体有毒的杂质控制较严：,砷,不得过百万分之十,重金属,不得过百万分之五十,杂质量的控制方法,限量检查（,Limit test,）,通常不测定其准确含量，只检查杂质的量是否超过限量，所以称为杂质的限量检查（对照法、灵敏度法、比较法）,对照法：,取一定量杂质对照品与一定量供试,品在相同条件下处理后，比较结果，,以确定杂质含量是否超过规定量,药物中杂质的限量计算,式中：,或：,式中标准溶液浓度是药典规定的,固定值,平行操作原则,例,1,对乙酰氨基酚中氯化物的检查,取对乙酰氨基酚,2.0g,，加水,100mL,加热溶解后冷却，滤过，取滤液,25mL,，依法检查氯化物，发生的浑浊与标准氯化钠溶液,5.0mL,（每,1mL,相当于,10,g,的,Cl,）制成的对照液比较，不得更浓。求氯化物的限量是多少？,例,2,谷氨酸钠中重金属的检查,取本品,1.0g,，加水,23mL,溶解后，加醋酸盐缓冲液（,pH3.5)2mL,，依法检查，与标准铅溶液（,10,gPb/1mL,）所呈颜色比较，不得更深，重金属限量为百万分之十，求所取标准铅溶液多少,mL,？,例,3,卡比马唑片中甲疏咪唑的检查,供试液,取,20,片，研细，加三氯甲烷适量研磨使溶，滤过，置,10mL,量瓶中，加三氯甲烷置刻度，摇匀（规格,5mg,）,对照液,甲疏咪唑的三氯甲烷溶液（,100,g/mL,）,分别取,10 L,点于同一,薄层板,上，展开，显色，供试液若显与对照品相应的杂质斑点，不得更深，求杂质限量？,例,4,肾上腺素中酮体的检查,取本品,0.10g,，置,50mL,量瓶中，加盐酸溶液溶液并稀释至刻度，摇匀，在,310nm,处测定吸光度，不得超过,0.05,，已知酮体的吸收系数,E,1%,1cm,=435,，求酮体的限量？,比较法,二、一般杂质的检查方法,在自然界分布广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中易引入的杂质,如：,氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、干燥失重、炽灼残渣、有机溶剂残留量,等,1.,氯化物检查法,原理：在稀硝酸溶液中,与一定量标准,NaCl,溶液按同法操作结果比较,加硝酸的作用：,（,1,）避免,Ag,2,CO,3,，,Ag,3,PO,4,，,Ag,2,O,等的形成，消除这些阴离子的干扰,（,2,）加速,AgCl,生成，产生较好的乳浊,注意事项,Cl,-,的浓度：,50,80,g/50mL,为宜，相当于标准,NaCl,溶液（,10 g Cl/mL,）,5.0,8.0mL,供试品 不澄明,过滤,供试品有色,外消色法或内消色法,用含硝酸的水洗净滤纸中,Cl,-,至洗液与,AgNO,3,不产生浑浊，再过滤供试液,例,KMnO,4,中,Cl,-,的检查，样品（紫色）,+,乙醇，颜色消退后再检查,如果供试溶液带颜色,内消色法,供试液（,2,倍量），等分成两等分：,量,+AgNO,3,过滤至澄清,+,标准,Cl,-,对照,量,+AgNO,3,样品,比较对照与样品的浑浊程度,2.,硫酸盐的检查方法,原理：在稀盐酸溶液中,SO,4,2-,+Ba,2+,BaSO,4,（白色浑浊）,与一定量标准,K,2,SO,4,溶液按同法所得结果比较,加酸的作用：,加稀,HCl,使成酸性，可防止,BaCO,3,Ba,3,(PO,4,),2,形成,注意事项,SO,4,2-,的浓度：,0.1,0.5mgSO,4,/50mL,为宜，相当于标准硫酸钾溶液（,0.1mgSO,4,/mL,）,1.0,5.0mL,；溶液浑浊或有色，处理方法与,Cl,-,检查法相似,3.,铁盐检查法,原理：在盐酸酸性溶液中,红色,反应在,HCl,酸性中进行，可防止,Fe3+,水解,Fe,2+,无此反应，需加入氧化剂,过硫酸氨,氧化，同时防止硫氰酸铁分解；或加,硝酸,处理，但需加热煮沸除去,NO,Fe,3+,的浓度：,10,50,g Fe,3+,/50mL,为宜，相当于标准硫酸铁铵,FeNH,4,(SO,4,),2,12H,2,O 1.0,5.0mL(10,g Fe,3+,/mL),；标准液配置时为防止水解，需加适量硫酸,注意事项,反应可逆,，加过量试剂可提高反应灵敏度，同时可消除一些阴离子（,Cl,-,，,PO,4,3-,，,SO,4,2-,，枸橼酸根）与,Fe,3+,形成有色配位物而引起的干扰,供试品与对照品,色调不一致,或呈色浅；可加正丁醇或异戊醇提取,环状结构,的有机药物；需经炽灼破坏后测定,4.,重金属检查法,重金属原义是指,比重大于,5,的金属，包括金、银、铜、铁、铅等，重金属在人体中累积达到一定程度会造成慢性中毒。,密度在,4.5g/cm,3,以上的金属，,称作重金属。,最终在工业上真正划入重金属的为,10,种金属元素：,铜、铅、锌、锡、镍、钴、锑、汞、镉和铋,。,重金属系指在一定的条件下，能与硫代乙酰胺（,CH,3,CSNH,2,）试液或,Na,2,S,试液作用而显色的金属杂质。,（一）第一法（硫代乙酰胺法）,本法适用于无需有机破坏，在酸性条件下可溶解的、无色的药物的重金属检查。,1,原理,2.,操作方法,样品管,对照管,结果观察,样品 对照,生成有色的硫化物，,观察颜色的变化,3,注意,标准铅溶液浓度：,27ml,溶液中,Pb,2+,标准溶液,10,g/ml,12ml,溶液的,pH,：,pH,在,3.03.5,时,呈色较完全,.,供试品溶液有颜色时的处理,a.,外消色法：,.,稀焦糖溶液调节，,.,指示剂调节,b.,内消色,（二）第二法（炽灼破坏后检查重金属）,本法,适用于含芳香环、杂环以及不溶于水、稀酸及乙醇的有机药物的重金属检查,。先炽灼破坏有机结构，得到重金属盐或氧化物残渣，然后同第一法检查。炽灼温度为,500,600,。,（三）第三法（硫化钠法）,本法,适用于溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物,。在氢氧化钠碱性条件下加硫化钠试液（显色剂），比色，检查重金属。,（四）第四法（微孔滤膜法）,本法,适用于含,2,5,g,重金属杂质及有色供试液的检查,。因重金属限量低，用纳氏比色管难以观察比较，改用此法，重金属硫化物沉淀富集于滤膜上，比较其色斑，以提高检测的灵敏度。,5.,砷盐检查法,中国药典,采用古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸银法。,（一）古蔡法,1,原理,利用金属锌与酸作用产生新生态氢，与供试品中微量砷盐反应生成具有挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸产生黄色至棕色的砷斑，与同等条件下一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较，判断供试品中的砷盐是否超过限量。,砷化氢与溴化汞试纸反应，生成砷斑的反应如下：,阅读标准砷斑的制备（,P61,），回答如下问题：,导气管中填充醋酸铅棉花的作用是什么？,Zn,和,HCl,的作用是（）？,A.,产生,AsH,3,B.,调节酸度,C.,生成新生态,H,2,D.,使,As,5+,As,3+,与溴化汞试纸生成砷斑的物质是,（）？,A.HgBr,2,B.,AsH,3,C.,H,2,S D.,SnCl,2,碘化钾和氯化亚锡的作用是（）？,A.,有利于,AsH,3,生成,B.,抑制,Sb,H,3,生成,C.,除去,H,2,S,干扰,D.,将,As,5+,还原成,As,3+,E.,使氢气均匀连续的产生,溴化汞试纸的作用是（）？,A.,消除,H,2,S,干扰,B.,与,Sb,H,3,形成色斑,C.,与,As,H,3,形成色斑,D.,消除砷化氢的干扰,（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法,【Ag,（,DDC,）法,】,1,原理,第一步：同,古蔡氏法,生成砷化氢,第二步：砷化氢还原,Ag-DDC,溶液,产生,红色的,胶态银,.,目视比色法,仪器分析,510nm,，,可定量,6.,干燥失重,药品在规定的条件下，经干燥后所减失的重量，,包括水分及其他挥发性成分。,检查方法,常压恒温干燥（烘干法）,受热较稳定的中药制剂,恒重：连续,2,次干燥后的重量差异不超过,0.3mg,，间隔,1h,1g,；,105,，,3h-1h,注意：温度降至,70,80,时取出,检查方法,干燥剂干燥,受热易分解或挥发的供试品,变色硅胶，五氧化二磷，无水氯化钙等干燥剂,减压干燥,熔点低、受热不稳定及较难赶除水分的供试品,干燥器的使用,7.,水分测定法,检查方法,费休氏法,甲苯法,-,含挥发性成分的供试品,烘干法,-,不含或含少量挥发性成分的供试,减压干燥,-,含挥发性成分的贵重药品,气相色谱法,-,散剂、颗粒剂、丸剂、片剂等,各类型制剂中,微量水分,的测定,二部,一部,Karl Fischer,滴定基本理论,卡尔,费休法简称费休氏法，是,1935,年卡尔,费休,(,KarlFj,scher,),提出的测定水分的容量分析方法。,费休法是测定物质水分的各类化学方法中，对水最为专一、最为准确的方法。,Karl Fischer,1901-1958,1.费休氏法化学反应原理,化学反应,I,2,+SO,2,+H,2,O,2,HI+SO,3,吡啶存在时,无水吡啶能定量地吸收,HI,和,SO3,，,生成氢碘酸吡啶和亚硫酸吡啶。,C,5,H,5,N,I,2,+C,5,H,5,N,SO,2,+C,5,H,5,N+H,2,O,2C,5,H,5,N,HI+C,5,H,5,N,SO,3,亚硫酸吡啶不稳定，能与水发生副反应，消,耗一部分水，因而干扰测定。如下反应：,C,5,H,5,N,SO,3,+H,2,O C,5,H,5,NHSO,4,H,加入无水甲醇避免了上述副反应的发生。,C,5,H,5,N,SO,3,+CH,3,OH C,5,H,5,NHSO,4,CH,3,综上总的反应式:,C,5,H,5,N,I,2,+C,5,H,5,N,SO,2,+C,5,H,5,N+CH,3,OH+H,2,O,2C,5,H,5,N,HI +C,5,H,5,N,HSO,4,CH,3,终点指示法有两种：,碘和二氧化硫在吡啶和甲醇溶液中能与水起定量反应，当水完全消耗掉，稍有过量的费休氏试剂使溶液由淡黄色变成浅红棕色。,永停滴定法。,另作空白试验,2.费休氏水分测定电化学反应原理,一旦所有的水都与碘进行了反应，滴定杯中的混和液里就会有游离态的碘，此游离碘将促使离子导电并且降低电压，以使极化电流稳定，当电压降至某一设定值时，滴定终止。,水分测定仪的基本操作步骤,1.准备工作,2.加入试剂,3.预滴定、标定和漂移值测定,4.,供试品水分测定,5.关机,1.KF,滴定的优越性(与其它几种水分测定比较,),卡氏水分测定法,干燥失重（常压、减压）,甲苯法（中药）,应用广泛（适用于多种有机物和无机物，还包括遇热易破坏的药品）,烘箱干燥（对热较稳定药品）,减压干燥（使用对热较不稳定或水分较难除尽的）,含挥发性成分药品,适合于,ppm,级至100水含量,100水含量,100水含量,检测快速,检测时间长,检测时间长,操作简易结果准确,操作简单，但精密度准确度不够高,操作存在甲苯用量大，毒性大,不受地方限制,受地方限制,受地方限制,(1)试剂对水的作用灵敏性和专一性高，是较理想的水分测定方法。,(2)适用于遇热易分解的物质或含有挥发性成分的供试品的水分测定。,(3)费休氏试剂本身可以作为指示剂，也可用永停滴定法指示终点。,2.KF,滴定的特点,8.,炽灼残渣,1,、定义：有机物经高温炽灼后残留的非挥发性物及杂质，多为金属的氧化物或无机盐类。,2,、,操作：供试品,1.0,2.0g,置已恒重的坩埚中 精密称定 炽灼至炭化放冷 硫酸,0.5,1ml,使湿润 低温除尽硫酸蒸气,700,800,至灰化 精密称定 恒重,3,、注意：如需将残渣留作重金属检查，则炽灼温度必须控制在,500,600,。,间隔,30min,。,例：铅测定时，若加热温度过高，会有什么影响？,9.,灰分测定,1,、总灰分：,药品经粉碎后加热，高温炽灼至灰化，则其细胞组织及其内含物成为灰烬而残留，由此所得灰分为“生理灰分”，即总灰分,2,酸不溶性灰分,：,药品经高温炽灼得到的总灰分加盐酸处理，得到不溶于盐酸的灰分，成为酸不溶性灰分。,注意：当灰分本身差异较大时，增加酸不溶性灰分的测定,10.,有害元素检查法,有害元素系指,铅、镉、砷、汞、铜,药典一部增加该法，并规定了有害元素的限度,（,1,）原子吸收分光光度法,铅、镉的测定,(,石墨炉法,),砷的测定,(,氧化物法,),采用适宜的氢化物发生装置,汞的测定,(,冷吸收法,),采用适宜的氢化物发生装置,铜的测定,(,火焰法,),空气,-,乙炔火焰,（,2,）电感耦合等离子体质谱法（,ICP-MS,）,药用植物及制剂进出口绿色行业标准,国家对外贸易经济合作部发部颁布,重金属总量,20,0mg,kg,铅（,Pb,）,5,0mg,kg,镉（,Cd,）,0,3mg,kg,汞（,Hg,）,0,2mg,kg,铜（,Cu,）,20,0mg,kg,砷（,As,）,2,0mg,kg,重金属元素检验不合格案例分析（铅、鎘、砷、汞）,1,、,铅、鎘不合格,已很少见，但仍然有。原料检验是否做到位，特别是本底值含量比较高的原料更要小心！,见于以茶叶、海藻为原料的保健产品,例子,1,：某产品，中药材磨粉，铅含量很高，浸泡提取则基本检测不到铅。,例子,2,：本身检验功夫不到家。,2,、,砷、汞不合格,对比前两者，多见。,海洋，水产为原料产品,海洋及水产品中含量很高,动物性产品的含量难做,三、特殊杂质的检查方法,药物中的特殊杂质一般是该药物在生产和储存过程中引入的原料、副产物、中间体、分解产物等有机物质，此类杂质的检查方法主要是利用其与药物在物理、化学、生物学等方面的性质差异来进行的，方法的专属性很关键。,如乙醇中的杂醇油，系将乙醇滴无臭清洁的滤纸上，待乙醇挥发后，不应遗留有杂醇油的异臭。,如葡萄糖中的糊精的检查，利用葡萄糖可溶于热乙醇，而糊精溶解度小的原理。,如硫酸阿托品应是外消旋体，无旋光性，当其中混有莨菪碱后，产生左旋。,如西洋参中人参的检查。,例题：,某中药丸剂,A,中含有附子，其中乌头碱为毒性成分，如何设计检查实验？,已知附子日服最高量,15g,，其乌头碱限量是,2.5mg,；A为,0.3g/,丸，一次最多,5,丸，每日,23,次。,参考：附子理中丸,【检查】乌头碱限量 取本品水蜜丸适量，研碎，取25g，加氨试液4ml，拌匀，放置2小时，加乙醚60ml，振摇1小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇溶解使成1ml，作为供试品溶液。取乌头碱对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录 B)试验，精密吸取供试品溶液12l、对照品溶液5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯-二乙胺(14：4：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上出现的斑点应小于对照品的斑点，或不出现斑点。,小结：一般杂质检查方法,杂质,原理与方法,标准溶液,注意事项,氯化物,硫酸盐,铁盐,重金属,砷盐,干燥失重,水分,炽灼残渣,灰分,Thank You!,