《中药分析》2章中药的一般质量控制.ppt

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第一节 中药材及制剂的检查项目,一检查项目的类型,1.,剂型要求类型,2.污染控制类型,（1）异物污染：可分为钝性异物和有害异物两类,（,2,）微生物污染：系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的检查法，包括染菌量及控制菌的检查,（,3,）化学污染：来自土壤、化肥、农药和水源等的污染以及中药材仓贮过程中，为防止霉变、虫害和鼠害所使用的重金属熏蒸剂的污染,3.质量参数类型,是指与质量直接有关的专项检查项目，用以监测伪品的掺入、保证药物纯度及安全性等，属于特殊杂质的检查,二杂质来源及限量检查,杂质检查是指控制药材或制剂中可能引入的杂质或与药品质量有关的项目。目的是保证药物的安全、有效、均一和纯度四个方面。,杂质虽然是无效甚至是有害的，但药物中仍然允许有少量的杂质存在，这是因为要完全除掉药物中的杂质，既不可能也没必要。,所以在不影响疗效和不发生毒性的前提下，对于药物中可能存在的杂质，允许含有一定的量。药物中所含杂质的最大允许量，为杂质限量。药物中杂质的检查一般不要求测定含量，而只检查杂质的量是否超过限量。这种杂质检查的方法为杂质的限量检查。,2001,年,4,月我国实施的中华人民共和国外经贸行业标准,-,药用植物及制剂进出口绿色行业标准中规定的限量指标为：,重金属总量,20.0 mg/kg,；铅（,Pb,）,5.0 mg/kg,；镉（,Cd,）,0.3 mg/kg,；汞（,Hg,）,0.2 mg/kg,；铜（,Cu,）,20.0 mg/kg,；砷（,As,）,2.0 mg/kg,；,黄曲霉毒素,B,1,（,Aflatoxin,）,5g/kg,（暂定）；,六六六（,BHC,）,0.1 mg/kg,；,DDT,0.1 mg/kg,；五氯硝基苯（,PCNB,）,0.1 mg/kg,；,（,3,）供试品溶液的制备：取供试品适量（含水量约,0.2g,），粉碎或研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇,50ml,，混匀，超声处理,20min,，放置,12h,，再超声处理,20min,，离心，取上清液，即得。,（,4,）测定法：无水乙醇、标准溶液及供试品溶液各,5,l,，注入气相色谱仪，计算，即得。,2.注意事项,（,1,）本法适用于含挥发性成分或贵重药品。中国药典中辛夷中水分即采用此法，规定水分不得过,18.0,。,二灰分测定及炽灼残渣检查,（一）灰分测定法,（二）炽灼残渣检查法,三干燥失重测定法,是指药品在规定的条件下，经干燥后所减失的重量，主要是指水分、结晶水，但也包括其他挥发性的物质如乙醇等。,（一）常压恒温干燥法,（二）干燥剂干燥法,（三）减压干燥法,四浸出物测定法,浸出物包括有效成分浸出物和大类成分浸出物。由于中药中的某一个成分不能代表其功能主治，或有效成分的含量太低，都可采用浸出物测定法，因此，该方法是非常有效的质量控制检查内容。,（一）水溶性浸出物测定法,（二）醇溶性浸出物测定法,五,pH,值测定法,六氯化物检查法,七铁盐检查法,八黄曲霉毒素测定,黄曲霉毒素（,aflatoxin,）是黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物。国内外对黄曲霉毒素的研究已经证实其有较强毒性，并且能在各种实验动物体上诱发实验性肝癌，其中以黄曲霉毒素,B,1,的致癌性最强。,黄曲霉毒素是一类结构相似的化合物，其基本结构都有二呋喃和香豆素（氧杂萘邻酮）。在紫外线照射下都能发出荧光，根据荧光颜色、,R,f,值及结构等不同，分别命名为,B,1,、,B,2,、,G,1,、,G,2,、,M,1,、,M,2,、,P,1,、,Q,、,GM,等。目前，已明确其结构的共有,10,多种，并认为其毒性，致癌性与结构有关，,最重要的六种毒素结构如下：,黄曲霉毒素,B,1,黄曲霉毒素,B,2,黄曲霉毒素,M,1,黄曲霉毒素,M,2,黄曲霉毒素,G,1,黄曲霉毒素,G,2,（一）微柱法,本法简便、快速，灵敏度为,10,g/kg,。主要做中成药中黄曲霉毒素筛选用，不能分辨黄曲霉毒素,B,1,、,B,2,、,G,1,、,G,2,等。测得结果为黄曲霉毒素的总量。,1.原理,将样品提取液通过氧化铝,-,硅镁型吸附剂填充的微柱，样品中的杂质被氧化铝吸附，黄曲霉毒素则被硅镁型吸附剂吸附。在紫外光灯下观察荧光环与标准比较定量。,2.方法,（,5,）观察结果与结论：将层析后的微柱置于,365nm,波长的紫外灯下，观察样品柱的硅镁型吸附剂层是否有荧光，并与空白柱比较定性，与标准各柱比较蓝色荧光强度即测得黄曲霉毒素含量。,例如：空白柱无蓝色荧光，,1.0ml,样品处理液（含样品,0.5g,）产生的荧光与标准柱,0.005,g/ml,产生的荧光相当（强度），则样品中黄曲霉毒素的含量为：,0.005/0.5,1000=10,（,g/kg,）,（二）薄层色谱法,1单向展开法,本法适用于中成药及食品的黄曲霉毒素,B,1,的测定，测定灵敏度达,5g/kg,。,（,1,）原理：样品中的黄曲霉毒素,B,1,经提取、浓缩和用单向展开法在薄层上分离后，在,365nm,紫外光灯下产生蓝紫色荧光。根据在薄层上显示荧光的最低检出量定量。,（2）薄层分析：吸取黄曲霉毒素B,1,标准溶液 10l、供试品溶液20l、供试品溶液20l+标准稀释液10l、供试品溶液20l+标准稀释液10l（共4点），分别点于同一硅胶G薄层板上，以无水乙醚为展开剂，展开12cm时，取出，晾干，再以氯仿-丙酮（92：8）混合溶液展开10cm，取出，晾干。置紫外光灯（365nm）下观察，确定供试品溶液中黄曲霉毒素B,1,的位置与含量。,2.双向展开法,用薄层色谱法单向展开后，由于黄曲霉毒素,B,1,含量低，受到杂质干扰，无法观察毒素,B,1,的荧光时，需要改用双向展开法进行分离。双向展开法由于比较有效的消除了杂质干扰，因而能提高检出灵敏度。,（,1,）方法,先用无水乙醚对薄层做横向展开，将干扰的杂质推到样品点的一侧而黄曲霉毒素,B,1,留在原点处。然后再用氯仿,-,丙酮（,98,：,2,）混合液做纵向展开，黄曲霉毒素,B,1,所在位置的杂质底色大大减少，因而有利于观察。,（三）高效液相色谱法,1.原理,黄曲霉毒素都具有紫外吸收，如黄曲霉毒素,B,1,在苯,-,乙腈溶剂中的,max,为,346nm,，,为,19800,，在紫外线照射下能产生荧光，但荧光较弱，常通过衍生使荧光增强。可用柱前三氟乙酸衍生、柱后碘衍生和柱后过溴化溴化吡啶（,PBPB,）衍生，用荧光监测器进行检测，最小检出量为,0.2g/kg,。,HPLC,具有灵敏度高，特异性好，分离能力强等优点。,（6）色谱条件：流动相为甲醇-0.01mol/L KH,2,PO,4,（4：8），流速0.4ml/min，荧光检测器，激发波长360nm，发射波长425nm。,（7）分析测定：按以上条件进行测定，进样量为510l。本法的最低检出浓度毒素B,1,为0.2g/kg，B,2,为1.2g/kg，G,1,为0.8g/kg，G,2,为0.8g/kg。回收率大于77.0%。,（四）荧光分析法,（五）免疫化学分析法,九砷盐检查法,砷盐为剧毒物质。中药材由于受除草剂、杀虫剂和化学肥料及地下水源的影响，容易引入砷元素。砷是原生质毒，能与细胞系统的巯基（,-SH,）相结合，从而抑制巯基酶的活性，影响细胞的正常代谢，导致细胞死亡，并引起一系列严重的中毒症，如血小板减少，诱发肝肿瘤等。因此控制砷盐的量是保证中药安全的一个很重要的方面。,中国药典一部收载的砷盐检查法有古蔡氏法和二乙基二硫代氨基甲酸银法。,砷属一种很分散的元素，在自然界很少遇到单质砷，主要是砷的化合物。常见的有：,氢化物：As,2,H,2,、As,4,H,2,、AsH,3,（砷化氢）；,氧化物：As,4,O,6,（氧化砷）、As,2,O,3,（三氧化二砷、氧化亚砷）、As,2,O,5,（五氧化二砷）、H,3,AsO,3,（亚砷酸）、H,3,AsO,4,（砷酸）；,硫化物：As,2,S,3,（雌黄矿）、As,2,S,2,（雄黄矿）、As,2,S,5,（硫化砷）；,砷酸盐类：,有机砷类。,砷的毒性依下列顺序而减少：,砷化氢 三氧化二砷（As,2,O,3,）亚砷酸（无机）砷酸 砷的化合物（四个有机基团带正电荷的砷）单质砷,砷化氢 是一种溶血剂，它阻断红血球过氧化氢酶，导致过氧化氢的累积和膜的破坏，其毒性至今还无有效的解毒药。,三氧化二砷（白砷、砒霜），它的毒性效果是急剧性的，潜伏一个时期后就衰退，中毒后立即使人休克、死亡。常用2，3-二巯基丙酮可成功急救砷的急性和慢性中毒。,砷在自然界普遍存在。在所有的生物体中均可检出低含量的砷。,国外有规定食品中砷的限量为 1ppm；我国原粮卫生标准规定含砷量不超过0.7 ppm。,砷的测定方法,1.容量法：,碘量法、溴酸钾法、硫酸铈法、重铬酸钾法、配位滴定法,2.分光光度法：,钼蓝法、砷钼黄法、砷-锑-钼三元络合物光度法、,砷钼酸结晶紫二元络合物光度法、砷化氢-Ag-DDC光度法、砷化氢还,原单质银分光光度法、N-苯甲酰苯胲法,3.电化学法：,经典极谱法、催化极谱法、微分脉冲极谱法、反向溶,出伏安法、悬汞电极阴极溶出法、碘离子电极间接电位法、电位滴定法、电导法,4.原子吸收法：,砷化氢挥发-火焰吸收法、氢氧化锆共沉淀-无火焰,原子吸收法、石墨炉原子化原子吸收法、间子原子吸收法、冷原子荧,光间接测砷法,5.其它方法：,中子活化法、微波发射光谱法、等离子电感偶合发射,光谱法（ICT）、放射分析法、离子光谱法、气相色谱法、化学发光法,（一）古蔡氏法（砷斑法）,原理,本法系采用锌和酸作用所产生的初生态氢与供试品中微量砷盐化合物反应生成挥发性砷化氢，再与溴化汞试纸作用生成黄色至棕色砷斑。比较供试品与标准砷溶液在同一条件下所显的砷斑的颜色深浅，以测得供试品的含砷限度。,AsO,3,3,3Zn,9H,AsH,3,3Zn,2,3H,2,O,AsH,3,2HgBr,2,2HBr,AsH(HgBr),2,(,黄色,),AsH,3,3HgBr,2,3HBr,As(HgBr),3,(,黄色,),五价砷在酸性溶液中也能被金属锌还原为砷化氢，但生成砷化氢比三价砷慢。三价砷生成砷化氢在,2h,内已反应完全，而五价砷在同时间内仅十分之二起反应。为了防止五价砷存在，影响测定结果的准确性，故必须加入碘化钾、酸性氯化亚锡还原剂，将五价砷还原为三价砷。碘化钾被氧化生成,I,2,，以氧化亚锡来还原，使反应液中维持有碘化钾的还原剂存在。,AsO,4,3,2I,2H,AsO,3,3,I,2,H,2,O,AsO,4,3,Sn,2,2H,AsO,3,3,Sn,4,H,2,O,I,2,Sn,2,2 I,Sn,4,溶液中的碘离子，与反应中产生的锌离子能形成配合物，使生成砷化氢的反应不断进行。,4I,Zn,2,ZnI,4,2,氯化亚锡与碘化钾存在，还可抑制锑化氢生成，在实验条件下，,100g,锑存在不至于干扰测定。同时氯化亚锡的作用可在锌粒表面形成锌锡齐（锌锡的合金）起去极化作用，使锌粒与盐酸作用缓和，放出氢气均匀，使产生的砷化氢气体一致，有利于砷斑的形成，增加反应的灵敏度与准确度。,Sn,2,Zn,Sn,Zn,2,2.检查方法,（,1,）仪器装置：如图,2-2,所示。,A,为,100ml,标准磨口锥形瓶；,B,为中空的标准磨口塞，上连导气管,C,（外径,8.0mm,，内径,6.0mm,），全长约,180mm,；,D,为具孔有机玻璃塞，其上部为圆形平面，中央有一圆孔，孔径与导气管,C,的内径一致，其下部孔径与导气管,C,的外径相适应，将导气管,C,的顶端套入旋塞下部孔内，并使管壁与旋塞的圆孔使相吻合，粘合固定；,E,为中央具有圆孔（孔径,6.0mm,）的有机玻璃旋塞盖，与,D,紧密吻合。,测试时，于导气管,C,中装入醋酸铅棉花,60mg,（装管高度为,60mm 80mm,），,再于旋塞,D,的顶端平面上放一片溴化汞试纸（试纸大小以能覆盖孔径而不露出平面外为宜），盖上旋塞盖,E,并旋紧，即得。,（,2,）标准砷斑的制备：精密量取标准砷溶液,2ml,，置,A,瓶中，加盐酸,5ml,与水,21ml,，再加碘化钾试液,5ml,与酸性氯化亚锡试液,5,滴，在室温放置,10min,后，加锌粒,2g,，立即将照上法装妥的导气管,C,密塞于,A,瓶上，并将,A,瓶置,2540,水浴中，反应,45min,，取出溴化汞试纸，即得。,（,3,）检查法：取按各药品项下规定方法制成的供试品溶液，置,A,瓶中，照标准砷斑的制备，自“再加碘化钾试液,5ml,”起，依法操作。将生成的砷斑与标准砷斑比较，不得更深。,（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法（银盐法）,1.原理,利用金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药品中的微量亚砷酸盐反应生成具有挥发性的砷化氢，用二乙基二硫代氨基甲酸银溶液吸收，使之还原生成红色胶态银，与同条件下一定量标准砷溶液所产生的红色胶态银在,510nm,处测吸光度，进行比较，以判定砷盐的限量或含量。,其反应式如下,：,（,以Ag-DDC代表,）,AsH,3,+6Ag(DDC),AsAg,3,3Ag(DDC)+3HDDC,AsAg3 3Ag(DDC)+3HDDC,As(DDC),3,+6Ag+,3,2.方法,（,1,）仪器装置：如图,2-3,所示。,A,为,100ml,标准磨口锥形瓶；,B,为中空的标准磨口塞，上连导气管,C,（一端的外径为,8mm,，内径为,6mm,；另一端长,180mm,，外径,4mm,，内径,1.6mm,，尖端内径为,1mm,）。,D,为平底玻璃管（长,180mm,，内径,10mm,，于,5.0 mm,处有一刻度）。,测试时，于导气管,C,中装入醋酸铅棉花,60mg,（装管高度,80mm,），并于,D,管中精密加入二乙基二硫代氨基甲酸银试液,5ml,。,（,2,）,标准砷对照液的制备：精密量取标准砷溶液,5ml,，置,A,瓶中，加盐酸,5ml,与水,21ml,，再加碘化钾试液,5ml,与酸性氯化亚锡试液,5,滴，在室温放置,10min,后，加锌粒,2g,，立即将导气管,C,与,A,瓶密塞，使生成的砷化氢气体导入,D,管中，并将,A,瓶置,2540,水浴中反应,45min,，取出,D,管，添加氯仿至刻度，混匀，即得,（,3,）检查法：取照各药品项下规定方法制成的供试品溶液，置,A,瓶中，照标准砷对照液的制备方法，自“再加碘化钾试液,5ml,”起，依法操作。将所得溶液与标准砷对照液同置白色背景下，从,D,管上方向下观察、比较，所得溶液的颜色不得比标准砷对照液更深。必要时，可将所得溶液转移至,1cm,吸收池中，用适宜的分光光度计或比色计在,510nm,波长处以二乙基二硫代氨基甲酸银试液作空白，测定吸收度，与标准砷对照液按同法测得的吸收度比较，即得。,（三）石墨炉原子吸收光谱法,1.原理,样品经消化后，待测元素砷被转化为无机离子状态。从光源辐射出待测元素特征光谱通过样品的蒸气时，被蒸气中砷元素的基态原子所吸收，由发射光谱被消弱的程度，进而求得样品中砷元素的含量。,（3）测定条件：检测波长193.7nm；石墨炉操作条件为120干燥30s；600灰化30s；2700原子化8s（可根据仪器型号，调至最佳条件）。,（四）氢化物原子吸收光谱法,1.原理,样品经消化后，加入硼氢化钠,-,酸体系还原剂，使砷元素产生氢化物，通过加热发生化学反应形成自由基态原子，用原子吸收分光光度法检测，测得的吸收度与处于给定的光轴上单位横截面内金属自由原子数成正比。,（2）,测定条件,检测波长：193.7nm；反应时间20s；进样量：2ml/次，硼氢化钠溶液加入量（视各种仪器设计规定，选择样品制备液和还原剂的加入量）。,（五）氢化物的发生,-,原子荧光光谱法,1.原理,样品经酸消化后，加入硼氢化钠,-,酸体系还原剂，使砷元素反应生成氢化物，氢化物被引入石英炉内，受光源（荧光法用空心阴极灯）的光能激发，砷原子处于基态的外层电子跃迁到较高能级，并在回到较低能级的过程中辐射出原子荧光。荧光的强度与原子的浓度（即溶液中被测元素的浓度）成正比。,（,2,）测定条件：砷灯电流,60mA,，负高压,360380V,，原子化炉温度,800,，载气氩气，流量,600ml/min,，屏蔽气,1000ml/min,。,十特殊杂质检查,（一）检查的目的与意义,由于各种药品的来源不同、制备方法不同、剂型不同，即使同一个品种也可以采取不同的工艺路线，而且药品在储存过程中也可能有不同分解变化的产物。因此药品的检查，仍应按照该制剂的生产和贮存过程中，依据其来源、生产工艺及药品的性质有可能引入的杂质进行检查，即特殊杂质的检验。,该项检查在中国药典中一般列在各药品的检查项下。特殊杂质的检查一般是利用药品和杂质的理化性质及生理作用的差异，采用物理、化学、药理、微生物方法来进行。,（二）特殊杂质的检查,1,西洋参中人参的检查,2大黄中土大黄苷的检查,3乌头酯型生物碱的检查,第三节 重金属检查法,一样品前处理（消化）,（一）,植物药材、中成药样品的消化,将植物药材、中成药样品前处理，使待测元素基本完全转为无机离子状态。常用方法有四种：即干法消化、湿法消化、水解消化和,UV,辐射低温消化。,1干法消化,（1）高温灰化消化法,是破坏植物药材、中成药中有机物的十分有效的手段之一。此法适用于中药材及中成药中铅、铜、铬、镉等重金属元素的测定。,（,2,）低温灰化法,2.湿法消化,（,1,）原理：湿法消化属于氧化分解法，是常用的一种消化方式。即用液体或液体的混合物作氧化剂，在一定温度下分解样品中的有机物，使其形成二氧化碳和水，使待测元素转化为无机离子状态。湿法与高温干法消化区别在于干法消化主要靠增高温度或增加氧的氧化能力来进行分解样品的有机物。湿法消化需要加氧化剂来分解有机物，常用的氧化剂有：硝酸、硫酸、高氯酸、过氧化氢、高锰酸钾等。,3.水解法-酸消解弹法,（,1,）原理：利用某些有机物在酸碱作用下水解成简单的化合物来破坏有机物的方法为水解法。一般采用聚四氟乙烯作衬里的消解弹（内套），可以用氢氟酸、氧化性混合酸来消解难以处理的样品。,（,2,）方法：将样品粉碎过,40,目筛（特殊样品可剪碎），称取,0.2000g,，置聚四氟乙烯的坩埚内，加入经选择适合的混合酸,510ml,（视内坩埚大小，样品多少）放置,12h,，然后将坩埚密闭置于不锈钢弹内，拧紧盖，整套罐置于,120150,烘箱内加热,12h,，取出，冷却至室温后再启开。把坩埚内的溶解物转移至量瓶中，用去离子水稀释至刻度，备用。可供汞、锑、锡和铋等元素的测定。,4UV辐射低温消化法,（,1,）原理：利用紫外光作能源辐射试样，破坏其有机物，使原来与有机物结合的无机元素从络合状态中解离出来，形成可溶于水的无机盐类，为有利于此过程的进行，可将样品先进行酸化并加入少量氧化剂，如硝酸,-,过氧化氢，硝酸,-,高氯酸或高氯酸,-,过氧化氢。,（,2,）方法：用本法处理植物药类，精密称取样品粉末约,100mg,，置消化管中，加混合酸（硝酸,-,高氯酸,3,：,1,）,1ml,，加盖后，置于,UV,低温消化反应器中，开机消化,4h,，取出消化管，加适量溶液稀释后，用于测定。,（二）矿物药材的消化,矿物类中药是中药的重要组成部分，主要包括天然矿物、矿物加工品和动物化石。此类药物主要含无机成分和微量元素以及有害元素和稀土元素、放射性元素等。对矿物类药进行分析，首先就是分解样品，将待测组分转入离子状态。矿物药常用的分解方法可分为溶解和熔融两大类。,1.,溶解法,常用的溶剂有水、酸和碱等。遵循从稀到浓、从冷到热、从少到多的原则，对样品有选择地进行消解。,2.熔融法,对于湿法难以分解的试样，须采用熔融法，将试样用固体熔剂覆盖或混合，然后在高温下加热至全熔或半熔，使待测组分转变为可溶于水或酸的化合物。,二样品预处理前的准备,1.水的纯化,2.试剂的纯度,3.容器清洗,三重金属总量的检查,重金属（比重5）是指在实验条件下（一般为弱酸性，pH33.5）能与H,2,S（S,2-,）,作用显色的金属杂质，如银、铅、汞、铬、锡、锑等，在药品的生产过程中遇到铅的机会较多，铅在体内又易蓄积中毒，故检查时以铅为代表。,测定时，溶液的pH值对金属离子与硫化氢呈色影响较大，在pH33.5时，硫化铅的沉淀较完全。若酸度较大，重金属离子与硫化氢呈色变浅，酸度太大时甚至不呈色。故供试品用强酸溶解或有机破坏后，在加硫化氢试液前应加氨水调节pH值。,重金属检查法使用的显色剂有硫化氢试液、硫代乙酰胺试液和硫化钠试液等。,中国药典（,1990,年版）以前历版药典均用硫化氢试液为显色剂，但试液有恶臭，不够稳定，浓度也难以控制。故在,1990,年版以后改用硫代乙酰胺试液显色。,BP,（,1993,）也采用此试液。,USP,（,23,）仍使用硫化氢试液，,JP,（,13,）使用硫化钠试液。,本法对硫化钠的纯度要求很高，否则放置时易析出硫，影响比色。,（一）第一法,用于在实验条件下供试液澄清、无色，对检查无干扰或经处理后检查无干扰的药物。,1.原理,在弱酸（,pH3.5,醋酸盐缓冲液）条件下，硫代乙酰胺发生水解，产生硫化氢，可与微量重金属离子生成黄色至棕黑色的硫化物的均匀混悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较，颜色不得更深。,pH3.5,CH,3,CSNH,2,H,2,O,CH,3,CONH,2,H,2,S,Pb,2,H,2,S,PbS,2H,（二）第二法,适用于在水、乙醇中难溶，或能与重金属离子形成配位化合物的药物。,1.原理,将供试品炽灼破坏后，加硝酸加热处理，使有机物分解破坏完全后，在按一法进行检查。,（三）第三法,适用于难溶于稀酸但能溶解于碱性水溶液的药物。,1.原理,在碱性介质中，以硫化钠为显色剂，使Pb,2,生成PbS微粒的混悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较，颜色不得更深。,（四）第四法,为微孔滤膜法。适用于重金属限量低的药物。,1.原理,使重金属生成硫化物富集于微孔滤膜上，比较供试品和一定量标准铅溶液经同法处理后所产生的色斑深浅，确定重金属是否超过限量。,四铅元素的测定方法,（一）双硫腙比色法,1.原理,样品经消化后，在,pH 8.59.0,时，铅离子与双硫腙生成红色络合物，此络合物溶于氯仿，向反应液中加入柠檬酸铵、氰化钾和盐酸羟胺等，防止铁、铜、锌等离子干扰，与标准系列比较定量。,（二）原子吸收分光光度法,1.原理,样品经消化后，导入原子吸收分光光度计中，原子化后，于波长,283.3nm,处测其吸收度。,五、汞元素的测定方法,（一）测汞仪法,1.原理,样品经消化使汞转为离子状态。汞离子被氯化亚锡定量地还原为金属汞。利用汞蒸气对,253.7nm,波长的紫外光具有强烈的吸收作用，从而测定汞的含量。,（二）冷原子吸收分光光度法,1.原理,样品经消化使汞转化为无机离子状态。用氯化亚锡将其还原为金属汞，通过氢化物发生器装置再转换为蒸气，载气将汞蒸气导入原子吸收分光光度计，进行高灵敏度的测定,。,六其他元素的测定法,（一）铜元素的测定方法,（二）镉元素的测定方法,（三）锡元素的测定方法,（四）锑元素的测定方法,（五）铬元素的测定方法,第四节,农药残留量的测定,一农药的分类及其危害,（一）农药的分类,1按防治对象分类,2按作用或效用分类,3按化学成分分类,（二）农药的危害,大气、水及土壤中残留的农药可以通过直接和间接的方式进入人体，对健康造成危害。对不同农药作用于人体的方式和特点进行简单介绍,1有机氯类农药,有机氯类农药包括六六六、,DDT,、五氯硝基苯、艾氏剂等。该类农药化学性质稳定、脂溶性好、残效期长，易在脂肪中蓄积，造成慢性中毒，严重危害人体健康。我国已在,1983,年禁止使用有机氯农药，但由于其半衰期长，至今在土壤、地下水等环境中仍有残存。且由于中药材的种植期较长，尤其是多年生的根类药材，易吸收环境中有机氯农药造成污染。,2,有机磷类农药,有机磷类农药是一些含有,C-P,键或,C-O-P,、,C-S-P,、,C-N-P,键的有机化合物。目前，正式商品有几十种，可分为磷酸酯类（敌敌畏、敌百虫）、硫代磷酸酯类（对硫磷、马拉硫磷）、磷酰胺及硫代磷酰胺（甲胺磷）。有机磷类农药的毒性主要是通过抑制生物体内的胆碱脂酶的酶活性，导致传导介质代谢紊乱，产生迟发性神经毒性，引起运动失调、昏迷、呼吸中枢麻痹、瘫痪甚至死亡。此类农药可以通过消化道、皮肤、黏膜、呼吸道等途径进入体内而引发中毒。,3,氨基甲酸酯类农药,二十世纪七十年代以来，由于有机氯类农药受到禁用或限用，以及耐有机磷杀虫剂的昆虫品种日益增多，使氨基甲酸酯类农药被广泛用于农作物的保护，其用量也逐年增加，此类农药的残留情况也引起了广泛关注。大多数的氨基甲酸酯类农药在施用后很短的时间内就可被降解成相应的代谢产物，这些降解产物通常与母体化合物具有相同或更强的活性。例如，涕灭威亚砜比涕灭威本身具有更有效的抗胆碱酯酶作用，必须考虑此类氨基甲酸酯农药代谢产物的作用。氨基甲酸酯类农药的毒性部位的立体结构与乙酰胆碱相似，进入体内后与胆碱酯酶活性中心的阴离子部位和酶解部位的丝氨酸羟基结合，进而生成氨基甲酰化酶，使胆碱酯酶丧失对乙酰胆碱的水解能力，造成乙酰胆碱蓄积而引起一系列中毒症状。,4,拟除虫菊酯类农药,拟除虫菊酯类农药是一类由人工合成的模拟天然除虫菊素的广谱杀虫剂，常用的有丙烯菊酯、氯菊酯、氯戊菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、氟氯氰菊酯、氟氰戊菊酯、氟氯菊酯等。拟除虫菊酯类杀虫剂具有用量低，药效好，杀虫谱广，毒性小等优点，目前广泛用于防治农业及卫生害虫。拟除虫菊酯在化学结构上具有共同的特点是其分子结构中含有数个不对称碳原子，由多个光学和立体异构体组成。这些异构体具有不同的生物活性，杀虫效果也大不相同。因此在拟除虫菊酯农药的生产、质量控制、药效检验以及施药后的生物代谢农药残留调查中，都要求提供准确、快速地测定样品中的总酯和最具生物活性的异构体含量的方法。拟除虫菊酯类农药能影响细胞色素,C,和电子传递系统，使感觉神经不断传入向心性冲动，导致肌肉持续性收缩，引起震颤与抽搐；还可直接作用于神经末梢和肾上腺髓质，使血糖、乳酸和肾上腺素水平升高。,二农药的污染途径及污染特点,农药的污染主要有以下三种途径：,1.,环境对药材的农药污染,2.,中药栽培中的农药污染,3.,采收、加工、贮存、运输过程中的农药污染,（二）农药的污染特点,1.,中药材农药残留污染具有普遍性，几乎在所有样品中都有检出,2.,种植药材中农药残留量较高，而野生药材中仅有痕量检出,3.,中成药农药残留量一般较低,4.,农药在药用植物中的分布随产地、药用部位及农药种类的不同而异,5.,不易发生急性中毒事,6.有机磷和氨基甲酸酯类农药检出率较低，残留量也低,7.,药材炮制前后农药残留量无显著差异,三中药中残留农药的提取与纯化,（一）中药中残留农药的提取方法,残留农药提取溶剂的选择主要考虑：,（,1,）提取溶剂的纯度：农药残留分析中应用的提取溶剂必须保证在色谱条件下检验不含杂质峰，通常采用重蒸法提高溶剂的纯度。,（,2,）提取溶剂的极性：采用相似相溶原理来选择溶剂。通常情况下，极性小的农药应选择低极性提取溶剂，如六六六、,DDT,等应选用石油醚、正己烷等；极性较强的农药如有机磷、拟除虫菊酯类农药应选择二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮等极性较大的溶剂，可以采用单一或混合溶剂进行残留农药提取。,1.,索氏提取法,2.,固相萃取技术,3.,微波辅助提取法,4.,吹扫蒸馏技术,5.,超临界流体提取技术,（二）中药中残留农药的纯化方法,1.,磺化法,2.Florisil,小柱法,四残留农药的分析方法,（一）总氯量的测定,取供试品细粉适量，加约,10,倍量的乙腈,-,水（,65,：,35,），高速搅拌后过滤，取滤液用石油醚（,30-60,）萃取出农药，浓缩萃取液后滴加于不含氯元素的滤纸上，待溶剂挥干，照氧瓶燃烧法燃烧破坏。取吸收液，加入硫氰酸汞试液，再加入硫酸铁铵溶液，于,460nm,波长处测吸收度，计算总氯量。,化学反应式为：,2Cl,-,+Hg,（,SCN,）,2,HgCl,2,+2SCN,-,6SCN,-,+Fe,3+,Fe,（,SCN,）,6,3-,（二）薄层色谱法,中药样品经适当前处理后点样于薄层板上，薄层展开依据,R,f,值定性分析；也可在薄层扫描仪上进行定量检测。,薄层色谱法具有操作简便、分析快速的特点，但灵敏度较低，一般用于现场筛查。,（三）气相色谱法,1相关分析技术,气相色谱法分离效能好，有灵敏度高、专属性强的特点，是对残留农药进行定性和定量分析的最常用的方法。气相色谱柱多以硅氧烷类为固定液，如,OV-17,、,OV-21,、,SE-30,、,OV-1701,、,SE-54,、,PB-701,等，毛细管柱长度,25-30m,，口径,0.25-0.32mm,，氮气为载气。气相色谱法测定有机氯农药时，使用电子捕获检测器（,ECD,）；测定有机磷农药时，使用火焰光度检测器（,FPD,）。,电子捕获检测器是一种专属型检测器，它是目前分析痕量电负性有机化合物最有效的检测器，对含卤素、硫、氧、硝基、羰基、氰基、共轭双键体系、有机金属化合物等均有很高的检测响应值，但对烷烃、烯烃和炔烃等的响应值很低。火焰光度检测器是测定硫、磷化合物的专用检测器，当含磷化合物在富氢火焰中燃烧时，产生的,HPO,将发射,526nm,的特征光，可专属性地检测磷。,2,药典有机氯类农药残留量测定法,色谱条件与系统适用性试验：,SE-54,（,30m,0.32mm,0.25,gm,）或,DB-1701,，,63,Ni-ECD,电子捕获检测器。进样口温度：,230,；检测器温度：,300,；不分流进样；程序升温：初始,100,，每分钟,10,升至,220,，每分钟,8,升至,250,，保持,10min,。理论塔板数按,-BHC,峰计算，不低于,10,6,，分离度应大于,1.5,。,混合对照品溶液：,BHC,（,、,、,、,-BHC,），,DDT,（,PP,-DDE,、,PP,-DDD,、,OP,-DDT,、,PP,-DDT,），五氯硝基苯（,PCNB,），溶剂为石油醚（,60-90,）。,供试品溶液制备：药材、中药制剂按要求用非极性有机溶剂萃取出残留农药，并选择合适方法进一步纯化，制备气相色谱分离分析供试品溶液。,分析操作：供试品溶液进样量,1,l,，按外标法计算,9,种农药残留量。,（四）高效液相色谱法,高效液相色谱法常用于分析高沸点和热不稳定的农残分析，一般采用,C,18,或,C,8,的填充柱，以甲醇、乙腈等水溶性溶剂作流动相，采用的紫外检测器可对多种农药残留量的定量分析。,实例：有报道采用,HPLC,法测定西洋参中甲基对硫、磷等,6,种农药残留的检测。西洋参样品采用乙醚超声提取，提取液经硅胶柱净化后，在,C,18,色谱柱上分离，流动相为甲醇,-,水,-,乙腈（,30,：,27.5,：,42.5,），回收率大多在,80,以上。,